本发明专利技术属于生物工程领域，提供了一种葡萄糖-6-磷酸异构酶（GPI）抗原体外检测试剂盒，包括检测板、羊抗GPI抗体、胶体金结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。本发明专利技术还提供了上述的GPI抗原体外检测试剂盒的制备方法。本发明专利技术采用双抗体夹心胶体金免疫吸附法原理检测人血清中的GPI抗原，将羊抗GPI抗体包被于硝酸纤维素膜，制成固相抗体，用以捕获人外周血清中可能存在的GPI抗原。再将胶体金标记于羊抗GPI抗体，形成胶体金结合物作为示踪物，如被测人血清中含有GPI抗原，则形成固相羊抗GPI抗体-GPI抗原-胶体金结合物。本发明专利技术可应用于类风湿性关节炎辅助诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术生物工程领域，尤其涉及一种试剂盒及其制备方法，特别是一种。
技术介绍
类风湿性关节炎(RA)是一种最常见的自身免疫性疾病，在全世界大约有1. 0%的人患有此病。其特征为对称性的大小关节滑膜的炎症。起初的症状包括批关节肿胀疼痛， 并且在关节部位有晨僵，继而引起骨质破坏。因而，RA的早期诊断和及时开始合适的治疗对控制该病的病情非常重要。中小型医院的类风湿关节炎(RA)患者就诊人数量少，检测样品少，检测报告周期长，容易延误患者明确诊断和用药治疗。类风湿性关节炎(RA)患者和约64%的健康人群与类风湿关节炎未控制的患者在血清中和关节腔积液内存在葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)。主要有体内T细胞系统和B淋巴细胞系统产生，分泌大量GPI抗原进入血清和关节腔内，使得血清中和关节腔内GPI浓度升高，是类风湿关节炎独特的自身免疫生理功能。在RA患者有高效价的GPI存在，常伴有严重的关节功能受限。提示预后不良或治疗过程中药物没有起到一定作用，当RA患者用药物治疗好转，血清和关节腔积液中GPI降低，关节肿痛减轻。从2001年Nature Immunology 杂志首次发表文章，从鼠自然生成类风湿关节炎的k/BxNT细胞神经未稍细胞基因中得到 GPI，然后从人类类风湿关节炎(RA)中也得到相同的GPI，而且在类风湿关节炎所含高浓度抗原都是一致，几乎完全为GPI同一酵素酶。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种，所述的这种是采用胶体金渗滤法和层析法原理来检测人血清中的GPI浓度，解决了现有技术中检测血清中的GPI浓度的时间较长，程序复杂的技术问题。本专利技术提供了一种葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗原体外检测试剂盒，包括检测板、羊抗GPI抗体、由胶体金标记的羊抗GPI抗体结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。进一步的，所述的检测板由一个塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中设置有一层吸水层，所述的吸水层上设置有一层硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上设置有一个塑料盒面盖，所述的塑料盒面盖中央设置有一个检测反应孔，在检测反应孔对应的硝酸纤维素膜上点加羊抗GPI抗体。进一步的，所述的检测反应孔为圆形或者其它形状。进一步的，所述的封闭液是含有牛血清白蛋白的磷酸盐溶液，磷酸盐溶液的 pH7. 0 7. 5之间，牛血清白蛋白在磷酸盐溶液中的重量百分比为1. 0%。进一步的，所述的洗涤液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH7. 0 7. 5之间，Tween-20在Tris-HCl溶液中的重量百分比为0. 05% 0进一步的，在每毫升胶体金结合物中，羊抗GPI抗体的质量为0. 025毫克。进一步的，所述的阳性参考品为浓度大于0. 2mg/L的GPI抗原。进一步的，所述的阴性参考品小于0. 2mg/L的GPI抗原。本专利技术还提供了上述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗原体外检测试剂盒的制备方法，包括一个配制羊抗GPI抗体溶液的步骤，一个制备检测板的步骤，一个制备胶体金标记的羊抗GPI抗体结合物的步骤，一个配制封闭液的步骤，一个配制洗涤液的步骤，一个制备阳性参考品的步骤和一个制备阴性参考品的步骤。本专利技术的工作原理是本试剂盒采用双抗体夹心免疫吸附法原理、及胶体金渗滤、 胶体金层析检测技术检测人血清中的GPI抗原，将羊抗GPI抗体包被于硝酸纤维素膜，制成固相抗体，用以捕获人血清中可能存在的GPI抗原，再将羊抗GPI抗体标记于胶体金，形成胶体金结合物作为示踪物。如被测人血清中含有GPI抗原，则形成固相羊抗GPI抗体-GPI 抗原-胶体金结合物，呈红色斑点反应，其颜色深浅与被测血清中含有的GPI抗原的浓度有关，但不呈比例关系。本专利技术和已有技术相比，其技术进步是显著的。本专利技术可以用于检测人血清样本中葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗原，作为类风湿性关节炎辅助诊断使用。采用本专利技术的试剂盒当天能收到检测报告，检测结果准确而且方便。附图说明图1显示了检测板反应孔中心检测点有红色斑点，为阳性结果。图2显示了检测板反应孔中心检测点无红色斑点，为阴性结果。具体实施例方式实施例1.胶体金制备条件选择1. 10. 05%氯化金溶液300毫升，加热至沸；1.2加入5.0%柠檬酸三钠3. 6毫升；1. 3继续加热煮沸15分钟，停止加热，待冷至室温，用蒸馏水恢复至原体积；1. 4实验结果波长λ 540 535 530 525 520 510nm。ABS 值:0. 528 0. 715 1. 481 0. 902 0. 699 0. 601目测胶体金溶液颜色红色透明。实施例2.胶体金结合物制备条件选择2. 1胶体金标记羊抗GPI抗体pH值的选择选择胶体金标记羊抗GPI抗体的适宜pH值，使用1. 0%无水碳酸钠溶液调节胶体金标记PH值，通过检测灵敏度比较胶体金标记羊抗GPI抗体的合适pH值范围。实验结果权利要求1.一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于包括检测板、羊抗 GPI抗体、由胶体金标记的羊抗GPI抗体结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。2.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 所述的检测板由一个塑料盒底盒，所述的塑料盒底盒中设置有一层吸水层，所述的吸水层上设置有一层硝酸纤维素膜，所述的硝酸纤维素膜上设置有一个塑料盒面盖，所述的塑料盒面盖中央设置有一个检测反应孔，在检测反应孔对应的硝酸纤维素膜上点加羊抗GPI抗体。3.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 所述的封闭液是含有牛血清白蛋白的磷酸盐溶液，磷酸盐溶液的PH7. 0 7. 5之间，牛血清白蛋白在磷酸盐溶液中的重量百分比为1.0%。4.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 所述的洗涤液是含有Tween-20的Tris-HCl溶液，Tris-HCl溶液的pH在7. 0 7. 5之间， Tween-20在iTris-HCl溶液中的重量百分比为0. 05%。5.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 在每毫升胶体金结合物中，羊抗GPI抗体的质量为0. 025毫克。6.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 所述的阳性参考品为浓度大于0. 2 mg/L的GPI抗原。7.如权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于 所述的阴性参考品为浓度小于0. 2 mg/L的GPI抗原。8.权利要求1所述的一种葡萄糖-6-磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒的制备方法，其特征在于包括一个配制羊抗GPI抗体溶液的步骤，一个制备检测板的步骤，一个制备胶体金标记的羊抗GPI抗体结合物的步骤，一个配制封闭液的步骤，一个配制洗涤液的步骤，一个制备阳性参考品的步骤和一个制备阴性参考品的步骤。全文摘要本专利技术属于生物工程领域，提供了一种葡萄糖-6-磷酸异构酶(GPI)抗原体外检测试剂盒，包括检测板、羊抗GPI抗体、胶体金结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。本专利技术还提供了上述的GPI抗原体外检测试剂盒的制备方法。本专利技术采用双抗体夹心胶体金免疫吸附法原理检测人本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种葡萄糖－６－磷酸异构酶抗原体外检测试剂盒，其特征在于：包括检测板、羊抗ＧＰＩ抗体、由胶体金标记的羊抗ＧＰＩ抗体结合物、封闭液、洗涤液、阳性参考品和阴性参考品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘颖冰，陆梅生，刘中令，
申请(专利权)人：上海北加生化试剂有限公司，
类型：发明
国别省市：31
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