一株产D-甘露糖异构酶的菌株及用其生产D-甘露糖的方法，属于食品生物技术领域。本发明专利技术方法提供了一株从腐烂的水蜜桃中筛选而来的假单胞菌(Pseudomonas sp.) SK 27.016，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014411；并提供了一种利用该菌株发酵生产D-甘露糖的方法，该方法包括：（a）在发酵培养基中对该菌株进行发酵，以得到该假单胞菌菌体；（b）用该假单胞菌产的胞内D-甘露糖异构酶转化D-果糖生产D-甘露糖；（c）D-甘露糖的分离纯化。本发明专利技术采用该菌株所产的D-甘露糖异构酶高效地由D-果糖生产D-甘露糖，适于进行大规模生产，为酶法工业化制备D-甘露糖提供了新的方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及能够生产D-甘露糖异构酶的一种假单胞菌iPsoudomorms sp.) SK27.016的筛选和利用该菌株发酵菌体转化D-果糖生产D-甘露糖的方法，属于食品生物
技术介绍
D-甘露糖，是一种目前唯一可用于在临床上的糖质营养素，广泛分布于体液和组织中，尤其是在神经、皮肤、睾丸、视网膜、肝和肠中。其直接被利用合成糖蛋白，参与免疫调节。此外，近年发现D-甘露糖有抑制肿瘤生长与转移，增加癌症存活率的作用，且其在治疗尿路感染上有不可比拟的优势。D-甘露糖，可推荐用作婴儿和儿童的补充治疗一种罕见的称为磷酸化甘露糖异构酶不足疾病，这被称为碳水化合物缺陷糖蛋白综合征Ib型(CDGSIb型)，表现为肠道蛋白流失，肝脏疾病，低血糖，和凝血障碍等。D-甘露糖的市场需求与日俱增，但其天然含量很低，因此单纯依靠天然物质的提取远远满足不了市场的需求。目前生产D-甘露糖的方法主要有化学合成法和生物合成法。生物合成法又分为植物富集法和微生物发酵法。相比而言，化学合成法历史悠久反应迅速，但所使用的原料价格昂贵、毒性大，反应条件剧烈、安全性差，所用的溶剂腐蚀性强、存在安全隐患，不宜用于食品工业。植物富集法成本高、产率低、具有较大局限性。由于微生物具有生长速度快周期短、生长条件温和、代谢过程简单和分布广泛等优点，所以微生物发酵法生产D-甘露糖不受空间、环境、资源的限制，具有成本低、无化学残留、产量高等显著优点，是生产医药及食品级D-甘露糖的一条理想途径。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新的微生物假单胞菌，采用发酵后菌体转化D-果糖生成D-甘露糖。本专利技术的另一个目的是提供一种利用上述假单胞菌株生产D-甘露糖的方法。本专利技术的再一个目的是提供一种从含D-甘露糖的转化液中分离纯化D-甘露糖的方法。本专利技术的技术方案:一株产D-甘露糖异构酶的菌株，是从无锡阳山水蜜桃中分离得到，根据一定法则的菌类学性质、生物化学性质的分析和16sRNA序列的测定得出其分类命名为假单胞菌{Pseudomonas sp.、SK 27.016，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为:CCTCC NO:M 2014411。用所述的产D-甘露糖异构酶的微生物假单胞菌、PsGudomoims sp.) SK 27.016生产D-甘露糖的方法，以假单胞菌{Pseudomonas sp.) SK 27.016为出发菌株，经种子培养、发酵培养、菌体转化D-果糖生产D-甘露糖、D-甘露糖的提取，具体步骤为: (!)种子培养种子培养基:氯化氨1~12 g/L，磷酸氢二钠1~6 g/L，磷酸二氢钾0.1~1 g/L，氯化镁0.05-0.1 g/L，硫酸钠 0.1~1 g/L, D-果糖 1~20 g/L，去离子水配制，调 pH 7.0 ; 种子培养条件:于平板上挑选培养良好的单菌落SK 27.016于25~37°C，摇床转速200rpm，种子培养基中培养14~20 h。(2)发酵培养 发酵培养基:氯化氨1~12 g/L，磷酸氢二钠1~6 g/L，磷酸二氢钾0.1~1 g/L，氯化镁0.05-0.1 g/L，硫酸钠 0.1~1 g/L, D-果糖 1~20 g/L，去离子水配制，调 pH 7.0 ; 发酵条件:接种量1%~10%，温度25~37°C，摇床转速200 rpm，发酵培养基中发酵10~24h0(3)菌体转化 先将发酵培养液进行离心:取I L培养发酵液，5000~8000 rpm离心5~25 min，取沉淀得菌体； 再菌体转化，转化条件:采用D-果糖含量为10~600 g/L, pH 7.5的磷酸盐缓冲溶液重悬菌体至0D_=2，温度40°C转化1~72 h，得D-果糖和D-甘露糖的混合糖液； (4)D-甘露糖的提取 将转化所得混合糖液离心、絮凝、板框过滤、脱色、离子交换、真空浓缩和喷雾干燥，得到纯化的D-甘露糖。D-甘露糖的提取时，所述的离心为2000~4000 rpm离心5~25 min。所述的絮凝为离心清液在30~80°C下，加入100-300 mg/L壳聚糖搅拌絮凝。所述的板框过滤为将壳聚糖絮凝液循环压入板框过滤机滤布，直至滤液变清为止。所述的脱色采用活性炭脱色。所述的离子交换以1~3倍床体积流速上柱，待离子交换树脂吸附饱和后，采用2~5mo I/L氨水洗脱。所述的真空浓缩采用外循环式(真空度范围86.66-93.33 KPa)，总固形物达到20%~60 %停止。所述的喷雾干燥:进风温度为100~200°C，出风温度为50~100°C。本专利技术的有益效果:本专利技术涉及一株从阳山水蜜桃中筛选而来的假单胞菌{Pseudomonas sp.) SK 27.016，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:M 2014411。在以D-果糖为碳源的发酵培养基中经10~24 h的发酵，再经过菌体转化，以10-600 g/L的D-果糖为底物可转化生成的D-甘露糖浓度达到2.5~150 g/L，为D-甘露糖的工业化制备提供了新的方法。本专利技术生产的D-甘露糖安全可靠，是一种很有市场潜力的功能性产品，被广泛的应用于食品、化妆品、医药等行业。本专利技术能高效地生产D-甘露糖，适于进行大规模生产。生物材料样品保藏:一株产D-甘露糖异构酶的菌株，其分类命名为假单胞菌{Pseudomonas sp.) SK 27.016，已保藏于中国典型培养物保藏中心，简称CCTCC，地址:中国武汉武汉大学，保藏编号为CCTCC NO:M 2014411，保藏日期2014年9月12日。【具体实施方式】以下是假单胞菌{Pseudomonas sp.) SK 27.016进行发酵生产D-甘露糖的实施例，但本专利技术的技术范围并不限于所列出的几个实例，在不改变其要点的前提下，可做各种改变进行实施。另外，本专利技术的技术范围延及均等的范围。实施例1产甘露糖异构酶菌的分离 采用自然腐烂的桃子或苹果，取少许果肉加入到分离培养基中(以g/L计):氯化氨1~12g/L，磷酸氢二钠1~6 g/L，磷酸二氢钾0.1~1 g/L，氯化镁0.05-0.1 g/L，硫酸钠0.1~1 g/L，D-果糖1~20 g/L，去离子水配制JjfpH 7.0 ;于30°C、200 rpm培养14~24 h，经稀释涂布后，获得纯培养物，30°C培养30 h，得到15株酶活效高的当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株产D‑甘露糖异构酶的菌株，其分类命名为假单胞菌 (Pseudomonas sp.) SK 27.016，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M 2014411。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：江波，张涛，胡兴，沐万孟，缪铭，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。