适冷纤维素酶产生菌制造技术

本发明专利技术公开了一种适冷纤维素酶产生菌，该适冷纤维素酶产生菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的保藏编号为14938，保藏日期为2017年11月20日。本发明专利技术的适冷纤维素酶产生菌具有生产纤维素酶的能力，并且应用该适冷纤维素酶产生菌制备适冷纤维素酶的方法简单，易于实施，该纤维素酶具有适冷性、耐酸碱的特性，具有广泛的应用前景。

Colder Cellulase Producing Bacteria

The present invention discloses a cold Cellulase Producing Bacterium, which is protected in China for the preservation management center (CGMCC) of the common microbial species preservation management center (CGMCC) in China, and the preservation date is November 20, 2017. The cold Cellulase Producing Bacteria of the invention has the ability to produce cellulase, and the method of applying the cold Cellulase Producing Bacteria to prepare the cold cellulase is simple and easy to implement. The cellulase has the characteristics of cold and acid alkali resistance, and has a wide application prospect.

【技术实现步骤摘要】
适冷纤维素酶产生菌
本专利技术涉及纤维素酶产生菌，具体地，涉及适冷纤维素酶产生菌与适冷纤维素酶及其制备方法。
技术介绍
纤维素酶包括内切葡聚糖酶(EC3.2.1.4)、外切葡聚糖酶(EC3.2.1.91)，和β-葡萄糖苷(EC3.2.1.21)三种类型，通过协同作用可以将纤维素完全水解为葡萄糖。其中内切葡聚糖酶主要作用于纤维素的非结晶区，随机切开β-1,4-糖苷键，水解纤维素。外切葡聚糖酶在无定型的纤维素中水解β-1,4-糖苷键，形成可溶的纤维糊精和纤维二糖。β-葡萄糖苷酶可水解非还原末端水解葡萄糖残基，将纤维二糖和纤维素糊精分解成葡萄糖。目前，大部分研究产纤维素酶的菌株通常取自常规环境，一般是营养较丰富，生态结构较复杂的地方，而获得的产酶菌株往往耐受性不高，易退化。某些独特的极端生态环境地区往往能够孕育具有独特的生理活性的菌株，如果能够在其中筛选到具有特殊性质纤维素酶的菌株，这将有利于大大降低成本，节省资源，同时也将更适合应用于工业生产。我国青藏高原地区属高原温带，海拔高，气候寒冷干燥，年均降水量为140mm，年平均气温1℃，日夜温差较大。该地区的气候环境比较极端，但其内部分布的山峰、冰川、高山湖泊和高山沼泽等各类生境依然孕育着丰富而奇特的生物资源，近年来该地区逐渐成为科学考察和生态研究的胜地。青藏高原独特的地理环境和气候条件造就了该地区微生物的群落结构及生理特性与其他地区有极大差异，因而对于该地区的产纤维素酶菌株筛选，具有重要的生态效益、经济效益和社会效益，所获得的新型菌株将在食品、饲料和制药等领域有着潜在的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适冷纤维素酶产生菌与适冷纤维素酶及其制备方法，该适冷纤维素酶产生菌生产的纤维素酶具有适低温、耐酸碱性的特点，有望被应用于生物能源、洗衣纺织、食品发酵、饲料等多个工业领域。为了实现上述目的，本专利技术提供了一种适冷纤维素酶产生菌，所述适冷纤维素酶产生菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的保藏编号为14938，保藏日期为2017年11月20日。本专利技术还提供一种适冷纤维素酶的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)将权利要求1所述的适冷纤维素酶产生菌接种于液体LB(Luria-Bertani)中培养；(2)将培养所得菌液转接至发酵培养基中进行发酵；(3)将发酵后的菌液进行离心，取上清液。本专利技术还提供一种根据前文所述的制备方法制备得到的适冷纤维素酶。通过上述技术方案，本专利技术提供的适冷纤维素酶产生菌其分类命名为耐盐刘志恒菌(Zhihengliuellahalotolerans)La12，菌株的16SrDNA基因序列如SEQIDNO1所述，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏日期为2017年11月20日，保藏编号为：14938。本专利技术所述的适冷纤维素酶产生菌具有生产纤维素酶的能力，该纤维素酶具有适冷性、耐酸碱的特性，具有广泛的应用前景。本专利技术的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。附图说明附图是用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本专利技术，但并不构成对本专利技术的限制。在附图中：图1是本专利技术提供的适冷纤维素酶产生菌的水解纤维素照片；图2是检测例2中温度对本专利技术提供的纤维素酶活性的影响；图3是检测例3中pH对本专利技术提供的纤维素酶活性的影响；图4是检测例4中金属离子对本专利技术提供的纤维素酶活性的影响。具体实施方式以下对本专利技术的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本专利技术，并不用于限制本专利技术。在本文中所披露的范围的端点和任何值都不限于该精确的范围或值，这些范围或值应当理解为包含接近这些范围或值的值。对于数值范围来说，各个范围的端点值之间、各个范围的端点值和单独的点值之间，以及单独的点值之间可以彼此组合而得到一个或多个新的数值范围，这些数值范围应被视为在本文中具体公开。本专利技术提供了一种适冷纤维素酶产生菌，所述适冷纤维素酶产生菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的保藏编号为14938，保藏日期为2017年11月20日。本专利技术提供的适冷纤维素酶产生菌其分类命名为耐盐刘志恒菌(Zhihengliuellahalotolerans)La12，菌株的16SrDNA基因序列如SEQIDNO1所述，保藏单位为中国普通微生物菌种保藏管理中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏日期为2017年11月20日，保藏编号为：14938。该适冷纤维素酶产生菌通过以下方法筛选得到：(1)选取青藏高原3000-5000米海拔处植被地表以下3-20厘米处土壤，经水溶解、稀释；(2)将稀释后的土壤溶液涂布于纤维素富集培养基上进行培养，以长出菌落点；(3)挑取菌落点于纤维素筛选培养基上培养以长出菌落；(4)对长出菌落的纤维素筛选培养基进行染色、脱色、查验透明圈；(5)筛选出具有水解圈的纤维素筛选培养基上的菌种。在后文的将具体进行说明。本专利技术还提供一种适冷纤维素酶的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：(1)将权利要求1所述的适冷纤维素酶产生菌接种于液体LB(Luria-Bertani)中培养；(2)将培养所得菌液转接至发酵培养基中进行发酵；(3)将发酵后的菌液进行离心，取上清液。本专利技术所述的适冷纤维素酶产生菌具有生产纤维素酶的能力，该纤维素酶具有适冷性、耐酸碱的特性，按照上述技术方案培养发酵前文所述的适冷纤维素酶产生菌即可制备得到适冷纤维素酶，制备方法简单，易于实施。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶产生菌的产量，优选地，液体LB的配方为：相对于1000mL的水，酵母粉4-6g，氯化钠8-12g，蛋白胨8-11g，pH为7.2-7.6。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶产生菌的产量，优选地，步骤(1)中培养条件为：于24-30℃转速为100-300rpm的条件下培养18-36小时。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶产生菌的产量，提高发酵效率，优选地，步骤(2)中菌液与发酵培养基的体积比为2-3:100。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶产生菌的产量，提高发酵效率，优选地，发酵培养基的配方为：相对于1000mL的水，酵母粉4-6g，氯化钠8-12g，蛋白胨8-11g，羧甲基纤维素钠0.4-0.6g，pH为7.2-7.6。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶产生菌的产量，提高发酵效率，优选地，步骤(2)中发酵条件为：于24-30℃转速为100-300rpm的条件下培养40-50小时。在本专利技术一种优选的实施方式中，为了提高适冷纤维素酶的提取率，优选地，步骤(3)中离心的条件包括：于2-6℃条件下以3000-5000rmp转速离心20-30min。本专利技术还提供一种根据前文所述的制备方法制备得到的适冷纤维素酶。该适冷纤维素酶具有适冷性、耐酸碱的特性，具有广泛的应用前景。以下将通过实施例对本专利技术进行详细描述。1、适冷纤维素酶产生菌的筛选选取青藏高原4000米海拔处植被周围本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种适冷纤维素酶产生菌，其特征在于，所述适冷纤维素酶产生菌在中国普通微生物菌种保藏管理中心(CGMCC)的保藏编号为14938，保藏日期为2017年11月20日。

【技术特征摘要】
1.一种适冷纤维素酶产生菌，其特征在于，所述适冷纤维素酶产生菌在中国普通微生物菌种...

【专利技术属性】
技术研发人员：林凌，秦娜，杨青，程啸天，
申请(专利权)人：安徽师范大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34