一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物及其应用制造技术

本发明专利技术涉及分子生物学与中药鉴定领域，具体公开了一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物及其应用。本发明专利技术基于蛤蚧的COI序列，筛选出适合蛤蚧鉴别的短片段，并设计特异性引物，本发明专利技术的2组特异性引物COISF2/COISR2和COISF3/COISR3扩增效率高，特异性强，并相互验证，通过凝胶电泳检测，可适用于蛤蚧基原动物、蛤蚧中药材、蛤蚧类产品的鉴定。尤其是特异性引物COISF3/COISR3，通过扩增到较短片段(133bp)，可实现含蛤蚧的中成药的鉴定，简单快捷，不需要测序，成本低，适合大量样本的检测，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物及其应用
本专利技术涉及分子生物学与中药(材)鉴定领域，具体地说，涉及一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物。
技术介绍
中药蛤蚧为壁虎科动物蛤蚧(大壁虎)(GekkogeckoLinnaeus)的干燥全体，为我国名贵动物中药材，为历届药典所收载，具有补肺益肾、纳气定喘、助阳益精的功效，可用于肺肾不足、虚喘气促、劳嗽咳血、阳痿、遗精等症。蛤蚧酒、人参蛤蚧散等保健品，蛤蚧定喘丸、蛤蚧定喘胶囊、参蛤平喘胶囊等药品应用广泛，但国内蛤蚧早已供不应求，野生蛤蚧于1989年便被列为“国家二级保护动物”，现市场蛤蚧主要依靠进口。因其疗效显著，市场需求逐年增长，且国内资源不足，市场已有混伪品出现。朱华等收集了各类商品蛤蚧，18个样品中竟只有2个为正品，或因形态相似，如喜山鬣蜥、变色树蜥；或因名字相同，如小蛤蚧(壁虎)、藏蛤蚧(喜山鬣蜥)，以上情况直接影响临床用药安全。目前，蛤蚧的鉴定方法主要有形态鉴定、显微鉴定、化学鉴定，但形态鉴定要求样品有一定的完整性，显微鉴定和化学鉴定则非针对专属组织或专属成分，难以实现蛤蚧的准确鉴定。近年来，DNA条形码技术在中药鉴定领域本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物，其特征在于，为以下引物(1)和/或引物(2)所示的特异性引物：引物(1)：COISF2：5’‑GCCTCCGCGAGTGTG‑3’；COISR2：5’‑CGTGTATTGGGTTATGCTTGG‑3’；引物(2)：COISF3：5’‑AAAATGAAAACCCCAAG‑3’；COISR3：5’‑TACGAACGGTCAACAA‑3’。

【技术特征摘要】
1.一种鉴别蛤蚧及其产品的PCR特异性引物，其特征在于，为以下引物(1)和/或引物(2)所示的特异性引物：引物(1)：COISF2：5’-GCCTCCGCGAGTGTG-3’；COISR2：5’-CGTGTATTGGGTTATGCTTGG-3’；引物(2)：COISF3：5’-AAAATGAAAACCCCAAG-3’；COISR3：5’-TACGAACGGTCAACAA-3’。2.含有权利要求1所述特异性引物的试剂。3.含有权利要求1所述特异性引物的试剂盒。4.权利要求1所述的特异性引物在鉴别蛤蚧及其产品中的应用。5.一种蛤蚧及其产品的鉴别方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：S1、提取待检样品的DNA；S2、以S1提取的DNA为模板，使用权利要求1所述特异性引物进行PCR扩增；S3、对S2所得的扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，若使用引物(1)所示的特异性引物扩增出200bp的单一DNA条带，则样品中含有蛤蚧，若无该条带，则样品中不含蛤蚧；若使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：向丽，苏燕燕，陈士林，张栋，李西文，
申请(专利权)人：中国中医科学院中药研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11