一组同时检测抗凝药物相关基因多态性的引物及应用制造技术

本发明专利技术公开了一组同时检测抗凝药物相关基因多态性的引物，其包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；同时检测的位点包括

A group of primers and applications for simultaneous detection of polymorphisms of anticoagulant related genes

The invention discloses a set of simultaneous detection of polymorphism of anticoagulant related genes, including PCR primers and SNaPshot PCR primers; simultaneous detection of sites including

【技术实现步骤摘要】
一组同时检测抗凝药物相关基因多态性的引物及应用
本专利技术属于基因多态性检测领域，具体涉及一种同时检测VKORC1-1639G>A、CYP4F2*3、CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2D6*10基因多态性的引物与应用。
技术介绍
导致心血管疾病高发的原因之一就是血栓的形成，抗凝药及抗血小板药就是两类广泛用于抗栓的药物，在心血管疾病的治疗中占主导地位，心脑血管血栓治疗和心脑血管疾病介入术治疗过程中都需要用到这两类抗栓药，临床最常用的两类药物为华法林及氯吡格雷。基于其抗栓的作用机制，如果使用不当，可能导致出血风险，并危及患者生命。华法林和氯吡格雷均需在机体内经细胞色素CP450药物代谢相关酶类代谢后才可产生其活性成分并发挥抗栓作用；其中华法林需经CYP4F2、CYP2C9代谢，而VKORC1的多态性亦会影响华法林的作用效果；而氯吡格雷主要经CYP2C19代谢产生抗血小板的活性成分。FDA及抗栓治疗的相关指南建议，在使用华法林的过程中，需对CYP4F2、CYP2C9和VKORC1基因型进行检测，并代入华法林剂量计算公式计算初始用药剂量；而氯吡格雷使用过程中，最好对CYP2C19的基因型进行检测，对慢代谢型基因型（CYP2C19*2、CYP2C19*3）患者，需增加氯吡格雷的剂量，或选用其他不经CYP2C19代谢的抗血小板药物如替格瑞洛等。维生素K氧化还原酶是抗凝药物华法林的作用靶点。维生素K环氧化物还原酶复合物1的编码基因VKORC1的遗传变异可通过影响VKORC1表达，从而影响华法林的敏感性。位于该基因启动子区（-1639G>A）的单核苷酸突变rs9923231可影响VKORC1的表达，是导致华法林用药剂量个体差异的主要原因之一。与该位点AA基因型患者相比，-1639GA和GG基因型患者平均华法林剂量分别增加52％（95％CI：41~64％）和102％（95％CI：85~118％）。VKORC1多态性对华法林剂量影响的比重因种族而异，-1639GA和GG基因型对白种人华法林剂量的影响比对亚洲人的影响分别高10％和50％。总体上，VKORC1多态性在不同种族不同人群中可解释约27％华法林用药剂量的个体差异。VKORC1-1639A等位基因在亚洲人、白种人和黑种人群中的等位基因频率分别为91.17％、38.79％和10.81％（根据千人数据库的结果：在亚洲人、白种人和黑种人群中的等位基因频率分别为92%、40%和7%），其频率分布的种族差异与华法林用药剂量差异间具有很好的相关性。VKORC多态性同时也影响华法林用药的临床后果。美国FDA于2007年批准修改华法林的产品说明书，推荐在使用华法林前对VKORC1进行基因检测；2010年再次修改说明书，建议结合VKORC1和CYP2C9基因型考虑华法林的初始用药剂量。临床上也可根据考虑了VKORC1和CYP2C9基因型、年龄、身高、体重、种族、是否合用肝药酶诱导剂和是否合用胺碘酮等因素的剂量计算公式确定华法林初始用药剂量。CYP4F2为维生素K单氧酶，可氧化底物生成ω-羟基衍生物。CYP4F2*3（rs2108622C>T，V433M）可导致酶活性降低，野生型纯合子基因型个体代谢活性最高，CYP4F2*3杂合子其次，CYP4F2*3纯合子活性最低。CYP4F2*3纯合子个体酶活性下降导致维生素K浓度升高，华法林的抗凝效果增强。临床研究提示，CYP4F2*3多态性与华法林稳态剂量相关，可解释1~10％的华法林剂量个体差异。携带CYP4F2*3等位基因的个体应用华法林时出血的风险显著增加。CPIC指南建议降低CYP4F2*3纯合子基因型个体华法林及香豆素类抗凝药（醋硝香豆素、苯丙香豆素）的用药剂量。CYP2C19参与氯吡格雷、S-美芬妥英、奥美拉唑、伏立康唑、安定、去甲安定等药物的代谢。CYP2C19遗传变异可导致酶活性的个体差异，使人群出现超快代谢者（ultrarapidmetabolizer，UM）、快代谢者（extensivemetabolizer，EM）、中间代谢者（intermediatemetabolizer，IM）和慢代谢者（poormetabolizer，PM）4种表型。CYP2C19*2（rs4244285，c.681G>A）和CYP2C19*3（rs4986893，c.636G>A）是中国人群中存在的2种导致CYP2C19酶缺陷的主要等位基因。CYP2C19*2导致剪接缺失，CYP2C19*3为终止密码子突变。EM个体只携带CYP2C19*1等位基因，IM个体携带CYP2C19*2或CYP2C19*3杂合子基因型；PM个体包括CYP2C19*2/*2、CYP2C19*2/*3和CYP2C19*3/*3基因型。东方人群中75~85％的PM由CYP2C19*2所致，约20~25％的PM由CYP2C19*3所致。氯吡格雷是一种抗血小板药物，广泛用于急性冠脉综合征、缺血性脑血栓、闭塞性脉管炎和动脉硬化及血栓栓塞引起的并发症。心脏支架手术后的患者需长期服用氯吡格雷以防止支架内再梗。氯吡格雷主要经CYP2C19代谢活化后发挥抗血小板效应。CYP2C19PM患者应用常规剂量的氯吡格雷后体内活性代谢物生产减少，对血小板的抑制作用下降。美国FDA和美国心脏病学会建议，对于CYP2C19慢代谢基因型患者需考虑改变治疗方案，具体意见为：CYP2C19*1/*1基因型个体应用氯吡格雷有效，可常规使用；CYP2C19*2或*3基因型个体对氯吡格雷疗效降低，建议更换成普拉格雷或替卡格雷；CYP2C19*2或*3突变型纯合子个体应用氯吡格雷效果差，建议换用普拉格雷或替卡格雷。阿米替林为三环类抗抑郁药，主要用于焦虑性或激动性抑郁症的治疗。阿米替林在体内主要经CYP2C19代谢为活性代谢产物去甲替林。CYP2C19活性的高低可通过影响血液中阿米替林与去甲替林的浓度比，影响阿米替林的疗效和不良反应的产生。CYP2C19PM个体血浆阿米替林与去甲替林浓度的比值显著升高，5-羟色胺再摄取的抑制作用显著增强。由于三环类抗抑郁药具有多种不良反应如抗胆碱作用、中枢神经系统不良反应和心血管不良反应，与治疗失败密切相关。调整携带CYP2C19突变等位基因患者阿米替林的起始用药剂量有助于降低初始治疗的失败率。CPIC指南建议CYP2C19EM和IM基因型患者应用常规起始剂量的阿米替林，而CYP2C19PM基因型个体阿米替林的起始剂量应降低至常规剂量的50％，并进行治疗药物监测。伏立康唑是一种广谱三唑类抗真菌药，CYP2C19是其主要代谢酶之一。CYP2C19EM与PM个体间伏立康唑的血液浓度存在显著差异，PM个体在应用常规剂量药物时可能出现毒副反应，建议减少用药剂量；EM和IM个体可给予常规剂量。在常规剂量治疗时，若EM个体出现毒副反应或PM疗效不佳，均应考虑更换药物。FDA批准的药物说明书中指出应用伏立康唑前需检测CYP2C19基因型，以确保用药安全。CYP2D6又称异喹胍4’-羟化酶,CYP第二亚家族中的重要成员。人群中CYP2D6的活性呈现强代谢者（EM）、中间代谢者（IM）、弱代本文档来自技高网...

【技术保护点】
一组同时检测抗凝药物相关基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshot PCR引物；同时检测的位点包括

【技术特征摘要】
1.一组同时检测抗凝药物相关基因多态性的引物，其特征在于：包括PCR扩增引物和SNaPshotPCR引物；同时检测的位点包括VKORC1-1639G>A、CYP4F2*3、CYP2C9*3、CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2D6*10；针对VKORC1-1639G>APCR扩增的正向引物如SEQIDNO：1所示，反向引物如SEQIDNO：2所示，SNaPshotPCR引物如SEQIDNO：13所示；针对CYP4F2*3PCR扩增的正向引物如SEQIDNO：3所示，反向引物如SEQIDNO：4所示，SNaPshotPCR引物如SEQIDNO：14所示；针对CYP2C9*3PCR扩增的正向引物如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐文如，罗瑛，旦菊花，刘宁，盛苗苗，李静怡，念孙琪，王思皓，张继虹，贾舒婷，吴晓明，刘静，谢晓丽，周若宇，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南,53