本发明专利技术公开了PPP4C基因在骨质疏松症诊断中的用途。本发明专利技术通过检测发现PPP4C在正常人和骨质疏松症患者的血液中的表达存在差异，基于PPP4C与骨质疏松症的相关性，将PPP4C认作是用于骨质疏松症诊断的分子标志物。作为一种无创性的骨质疏松症诊断方法，该分子标志物在临床上具有广泛的应用前景。
The application of PPP4C gene and its expression products in the preparation of osteoporosis diagnosis products
The invention discloses the use of the PPP4C gene in the diagnosis of osteoporosis. The detection of PPP4C in the blood of normal persons and osteoporosis patients is different. Based on the correlation between PPP4C and osteoporosis, PPP4C is recognized as a molecular marker for osteoporosis diagnosis. As a noninvasive diagnostic method for osteoporosis, the molecular marker has a wide application prospect in clinical practice.
【技术实现步骤摘要】
PPP4C基因及其表达产物在制备骨质疏松症诊断产品中的应用
本专利技术涉及骨质疏松症诊断领域，更具体地，本专利技术涉及以检测PPP4C异常为手段的骨质疏松症诊断方法。
技术介绍
骨质疏松症(osteoporosis，OP)是一种以骨量低下、骨微结构破坏、导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的全身性骨病(WHO)。2001年美国国立卫生研究院(NIH)提出骨质疏松症是以骨强度下降、骨折风险性增加为特征的骨骼系统疾病，骨强度反映了骨骼的两个主要方面，即骨矿密度和骨质量。该病可发生于不同性别和任何年龄，但多见于绝经后妇女和老年男性。骨质疏松症分为原发性和继发性两大类。原发性骨质疏松症又分为绝经后骨质疏松症(I型)、老年性骨质疏松症(II型)和特发性骨质疏松(包括青少年型)3种。骨质疏松症的危险因素包括：遗传因素，营养因素，废用因素，酗酒、嗜烟、过多咖啡和咖啡因的摄入、肝素使用均是本病的危险因素。此外，年龄增长、服用皮质类固醇和抗惊厥药物、具有骨质疏松症家族史或具有影响骨量的特殊基因也是骨质疏松症的高危因素。骨质疏松症早期可以没有任何症状，骨质在不知不觉中流失，直到发生骨折后才被意识到，亦被称之为“无声杀手”，由于早期没有典型的临床症状，所以常常不能引起医患足够的重视，以致许多患者只能无奈的面对从病痛到恢复的漫漫长路。诊断骨质疏松症，首先必须进行骨密度的测定。骨密度实际上就是表示骨的健康程度，或是反过来说表示骨的老化程度。常用的检测手段：X线摄片法：使用历史最早，但由于有放射性，其测验结果不能量化，已逐渐被取代。单光子测定仪：费用低、方便、辐射量小而安全。但因不能测躯干骨以及不能区别皮质骨、松质骨、软组织等而受限制，已逐渐被取代。定量超声法：低廉、方便、又无放射性损伤。适合各年龄段人群的骨状态普查工作。不仅能检测骨密度，还能了解骨的质量即可反应骨的微结构及弹性。但目前只用于跟骨、胫骨和指骨，不能进行全身骨骼的检测。双能X线吸收法：是目前最理想的测定法，是诊断骨质疏松症的金标准，国内外通用，可测全身各部位骨骼，也能测软组织厚度，但该设备数量较少且价格昂贵，因此对于骨质疏松症患者的诊断来说经济负担大。为此寻找一种敏感性高、准确度高且价格合理的诊断骨质疏松症的方法是亟待解决的问题。近年来，遗传因素已经成为了骨生物学中最活跃的研究领域之一，很多基因已经被确定为调节古骨密度的候选基因。这些候选基因大多数都是影响骨代谢的基因。如维生素D受体(VDR)、脂蛋白受体相关基因5(LRP5)、I型胶原蛋白(COLIA1)、雌激素受体α、转化生长因子TGFβ1、骨形态发生蛋白(BMPs)、Runx2、Osterix(Osx)、Sclerostin、TCIRG1、IGF-1、IL-1(骨质疏松症，张弛，中国骨质疏松杂志，2010年10月，802-813)。此外，已经有相当数量的专利申请涉及骨质疏松症的基因诊断，如申请号为：201610272604.0、201610922798.4、201510628024.6、201510628081.4、201510725408.X、201510628042.4、201610530383.2、201510629348.1、201510627056.4、201510627060.0、201610555353.7的专利。可见利用基因来诊断骨质疏松症成为了今后骨质疏松症早期诊断的发展趋势。
技术实现思路
本专利技术的目的之一在于提供一种通过检测PPP4C基因或蛋白表达差异来诊断骨质疏松症的方法。为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：本专利技术提供了检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的产品在制备骨质疏松症诊断工具中的用途。进一步，所述检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的产品包括检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的表达水平的产品。所述产品包括能够结合PPP4C基因的核酸或者能够结合PPP4C蛋白的物质(例如抗体)。所述核酸能够检测PPP4C基因的表达水平；所述物质能够检测PPP4C蛋白的表达水平。本专利技术的检测PPP4C基因的产品可基于使用核酸分子的已知方法来发挥其功能：如PCR、如Southern杂交、Northern杂交、点杂交、荧光原位杂交(FISH)、DNA微阵列、ASO法、高通量测序平台等。使用该产品可以定性地、定量地、或半定量地实施分析。包含在上述产品中的核酸可以通过化学合成来获得，或通过从生物材料制备含有期望核酸的基因，然后使用设计用于扩增期望核酸的引物扩增它来获得。进一步，所述PCR方法为已知方法，例如，ARMS(AmplificationRefractoryMutationSystem，扩增不应突变系统)法、RT-PCR(逆转录酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。扩增的核酸可以通过使用点印迹杂交法、表面等离子共振法(SPR法)、PCR-RFLP法、原位RT-PCR法、PCR-SSO(序列特异性寡核苷酸)法、PCR-SSP法、AMPFLP(可扩增片段长度多态性)法、MVR-PCR法、和PCR-SSCP(单链构象多态性)法来检测。上面所述的核酸包括扩增PPP4C基因的引物，产品中包括的引物可以通过通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来适当地设计，并通过化学合成来制备。在本专利技术的具体实施方案中，所述核酸为QPCR实验中使用的扩增引物，所述引物的序列如SEQIDNO.1(正向序列)和SEQIDNO.2(反向序列)所示。上面所述的核酸还可包括探针，所述探针可以通过化学合成来制备，通过使用本领域技术人员知道的方法参考已知信息来恰当设计，并通过化学合成来制备，或者可以通过从生物材料制备含有期望核酸序列的基因，并使用设计用于扩增期望核酸序列的引物扩增它来制备。本专利技术的检测PPP4C蛋白的产品可基于使用抗体的已知方法来发挥其功能：例如，可以包括ELISA、放射免疫测定法、免疫组织化学法、Western印迹等。本专利技术的检测PPP4C蛋白的产品包括特异性结合PPP4C蛋白的抗体或其片段。如本文所用，术语”抗体”，意指特异性结合至特定抗原或与特定抗原相互作用的任意抗原-结合分子或分子复合体，其包含至少一个互补决定区(CDR)。术语”抗体”包括含有4个多肽链(即，通过双硫键相互连接的2个重(H)链以及2个轻(L)链)以及其多聚体(例如IgM)。每个重链含有重链可变区以及重链恒定区。重链恒定区含有3个结构域CH1、CH2和CH3。每个轻链含有轻链可变区以及轻链恒定区。轻链恒定区含有一个结构域(CL1)。VH与VL区可进一步细分成高变区(称为互补决定区(CDR))，其中散布着较保守的称为框架区(FR)的区域。每个VH和VL均由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端按以下顺序排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。如本文所用，术语“抗体”还包括整个抗体分子的抗原结合片段。抗体的抗原结合片段可以利用任何适宜的标准技术，例如蛋白水解消化或涉及编码抗体可变区和任选恒定区的DNA的操纵和表达的重组基因改造技术，从例如完整的抗体分子衍生。这样的DNA是已知的及/或很容易从例如市售来源、DNA库(包括例如噬菌体-抗体库)获得，或可以被合成。该DNA可以被测序且以化学方法或分子生物学本文档来自技高网...
【技术保护点】
检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的产品在制备诊断骨质疏松症工具中的应用。
【技术特征摘要】
1.检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的产品在制备诊断骨质疏松症工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的产品包括检测PPP4C基因或PPP4C蛋白的表达水平的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，利用所述产品检测受试者样本中的PPP4C基因或PPP4C蛋白的表达水平，与正常人相比，受试者样本中的PPP4C基因或PPP4C蛋白的表达水平降低，则诊断该受试者为骨质疏松症患者或诊断该受试者患有骨质疏松症的风险高。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述受试者样本的来源是血液。5.根据权利要求1-4中任一项所述的应用，其特征在于，所述产品包括能够结合PPP4C基因的核酸或者能够结合PPP4C蛋白的物质；所述核酸能够检测PPP4C基因的表达水平；所述物质能够检...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖枫，李曙光，孙耀兰，常鹏，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11
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