一种用慢病毒在野生型成体小鼠中建立胰腺癌模型的方法技术

一种用慢病毒在野生型成体小鼠中建立胰腺癌模型的方法，包括慢病毒载体的构建，病毒包装、滴度测定及体外验证，病毒注射，及病理鉴定步骤。方法选择人类胰腺癌中变异率最高的癌基因Kras，抑癌基因Tp53、Cdkn2a和Cdkn2b，在同一个慢病毒载体中过表达癌基因Kras

A method of establishing a pancreatic cancer model in wild type adult mice with lentivirus

A method of establishing pancreatic cancer model with lentivirus in wild type adult mice, including lentiviral vector construction, virus packaging, titer determination and in vitro validation, virus injection and pathological identification steps. Methods the highest mutation rate of oncogene Kras, tumor suppressor gene Tp53, Cdkn2a and Cdkn2b in human pancreatic cancer was selected, and over expression of oncogene Kras in the same lentiviral vector.

【技术实现步骤摘要】
一种用慢病毒在野生型成体小鼠中建立胰腺癌模型的方法
本专利技术涉及一种用慢病毒在野生型成体小鼠中建立胰腺癌模型的方法，具体涉及利用慢病毒介导癌基因的过表达及抑癌基因的敲降以诱导小鼠胰腺癌模型的方法，属于动物模型建立

技术介绍
胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，5年生存率为5％左右，是预后最差的恶性肿瘤之一。尽管已有很多关于胰腺癌遗传变异的研究，但是在成体中诱导胰腺癌发生的遗传变异仍未知。考虑到人类癌症(包括胰腺癌)发生的主要原因是成年后遗传突变的累积，因此通过遗传改变在成体动物中诱导的肿瘤模型能更好的认识人类肿瘤的特征。目前应用最多的小鼠胰腺癌模型主要包括KC模型(KrasG12D/Pdx1-Cre)和KPC模型(LSL-KrasG12D/LSL-tp53R172H；Pdx1-Cre)，在这些模型中Kras基因的表达和tp53的突变均开始于早期胚胎时期，而且Kras诱导胰腺癌的能力随着年龄增长而逐渐下降，在成体中完全丧失；并且在成熟的腺泡细胞中Kras也不能诱导明显的肿瘤，甚至再加上Tp53或者Cdkn2a的失活也不能诱导肿瘤形成。现有的胰腺癌动本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用慢病毒在野生型成年小鼠中建立胰腺癌模型的方法，其特征在于选择人类胰腺癌中变异率高的癌基因和抑癌基因，利用慢病毒在胰腺组织中原位表达癌基因、同时敲低抑癌基因，以诱导胰腺癌的发生。

【技术特征摘要】
1.一种用慢病毒在野生型成年小鼠中建立胰腺癌模型的方法，其特征在于选择人类胰腺癌中变异率高的癌基因和抑癌基因，利用慢病毒在胰腺组织中原位表达癌基因、同时敲低抑癌基因，以诱导胰腺癌的发生。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是利用慢病毒载体在胰腺组织中过表达癌基因KrasG12D，同时抑制抑癌基因Tp53、Cdkn2a和Cdkn2b的功能。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于在完全成年的野生型个体中诱导胰腺癌。4.根据权利要求1所述的建立胰腺癌模型的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)慢病毒载体的构建根据对TCGA数据库的分析，选择人类胰腺癌变异率高的癌基因和抑癌基因，以pTomo空载体为出发质粒，通过一系列常规酶切连接构建表达癌基因，沉默抑癌基因的慢病毒载体。(2)病毒包装、滴度测定及体外验证将构建好的慢病毒载体和包装质粒pCMV8.9、pMD2.G共转染H...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵旭东，涂秋，
申请(专利权)人：中国科学院昆明动物研究所，
类型：发明
国别省市：云南,53