盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法技术

本发明专利技术属于分析化学领域，具体涉及盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法。该方法以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱，该方法能够实现三乙炔苯胺与潜在基因毒性杂质同时有效分离，该方法还可利用高效液相色谱法进行分离测定，不仅实现有效分离，还能够准确测定三乙炔苯胺与相关的潜在基因毒性杂质的含量，专属性强，灵敏度高，对于实现对三乙炔苯胺及终产品盐酸厄洛替尼的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。

Separation and determination of hydrochloride and erlotinib for potential key starting materials, three acetylene in aniline genotoxic impurities

The invention belongs to the field of analytical chemistry, particularly relates to a method for the separation and determination of hydrochloride erlotinib for potential key starting materials, three acetylene in aniline genotoxic impurities. This method takes eighteen alkyl silane bonded silica stationary phase, acetonitrile and two triethylamine aqueous solution mixture as the mobile phase, this method can realize the impurity three acetylene aniline and potentialgenotoxic separation at the same time, the method can also use the HPLC separation and determination, not only to achieve effective separation, also to determine the content of acetylene and three aniline potentialgenotoxic related impurities, strong specificity, high sensitivity, for it is very important to the three and final products of acetylene aniline hydrochloride erlotinib in quality control and safety guarantee.

【技术实现步骤摘要】
盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法
本专利技术属于分析化学领域，具体涉及盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺中潜在基因毒性杂质的分离与测定方法。
技术介绍
盐酸厄洛替尼是酪氨酸激酶抑制剂，适用于既往接受过至少一个化疗方案失败后的局部晚期或转移的非小细胞肺癌。盐酸厄洛替尼的中文名为：N-(3-乙炔苯基)-6,7-双(2-甲氧乙氧基)-4-喹啉胺盐酸盐，英文名为：Erlotinibhydrochloride，其结构式如式Ⅱ所示：三乙炔苯胺是合成盐酸厄洛替尼的一个关键起始原料，化学名称：三乙炔苯胺，英文名称：3-Ethynylbenzenamine，其结构式如式Ⅰ所示：基因毒性杂质是指能直接或间接损伤细胞DNA，产生致突变和致癌作用的物质。可能产生基因毒性杂质的环节：新药合成、原料纯化、储存运输(与包装物接触)等，故在新药合成阶段应该指明涉及到的所有具有基因毒性或有致癌性的化学物质，如所用试剂、中间体、副产品等。具有毒性作用的基团一般具有亲电试剂的性质，这些基团在生理条件下同体内核酸、蛋白质或其他重要成分中的亲核中心发生取代反应，使这些成分发生不可逆的损伤，表现为毒性、致突变或致癌等作用。具体基团举例如下：a、惶酰烷酯；b、芳香硝基；c、芳香偶氮；d、芳香氮氧-化物；e、芳香伯胺或者仲胺；f、烷基肼；g、酯醛基；h、N-甲醇基；i、卤代烯烃；j、氮芥基；k、氯胺；l、β-内酯；m、乙烯亚胺；n、卤代烷；o、乌拉坦；p、N-亚硝基胺；q、芳胺或酚；r、环氧基。在三乙炔苯胺的合成中，其合成使用的原料及其副产物M2a、M2b、M2d、M2e、M2f、M2g、M2c(三苯基氧膦)都具有以上警示结构，这些都使最终获得的盐酸厄洛替尼中含有潜在基因毒性杂质，M2a、M2b、M2d、M2e、M2f、M2g、M2c(三苯基氧膦)结构式如下所示：为了控制三乙炔苯胺的质量，需要对三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质进行分离测定。但是，目前还没有同时分离测定三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的HPLC方法。因此开发一种分离测定三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法对于实现对三乙炔苯胺及终产品盐酸厄洛替尼的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种同时分离三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，该方法能够实现三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的有效分离。本专利技术还提供了利用高效液相色谱法分离测定三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，该方法不仅实现有效分离，还能够准确测定三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的含量，专属性强，灵敏度高，对于实现对三乙炔苯胺以及终产品盐酸厄洛替尼的质量控制、安全性保证具有极其重要的意义。为实现上述目的，本专利技术的技术方案为：分离盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱，所述三乙炔苯胺的结构式如式Ⅰ所示；进一步，所述的方法，所述潜在基因毒性杂质为M2a、M2b、M2c、M2d、M2e、M2f、M2g所示化合物中的一种或多种；优选的，本专利技术分离盐酸厄洛替尼的关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，对三乙炔苯胺与以上7种潜在基因毒性杂质同时进行分离。进一步，所述的方法，所述二乙胺水溶液浓度为0.1％-0.3％。优选的，所述二乙胺水溶液浓度为0.2％。进一步，所述的方法，所述二乙胺水溶液的pH值为2.5-3.5。优选的，所述二乙胺水溶液的pH值为3.0。优选的，所述二乙胺水溶液的pH值选用磷酸溶液进行调节。优选的，所述流动相采用线性梯度洗脱分离，线性梯度洗脱条件为：0min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85；20min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为35-45：55-65；40min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为75-85：15-25；45min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为75-85：15-25；47min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85；55min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85。更优选的，线性梯度洗脱条件为：0min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80；20min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为40：60；40min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为80：20；45min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为80：20；47min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80；55min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80。本专利技术还提供了利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，该方法不仅实现有效分离，还能够准确测定三乙炔苯胺与潜在基因毒性杂质的含量，专属性强，灵敏度高。利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，所述高效液相色谱法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱分离，分离后采用紫外检测器对三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质进行检测。进一步，所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，所述潜在基因毒性杂质为M2a、M2b、M2c、M2d、M2e、M2f、M2g所示化合物中的一种或多种。优选的，对三乙炔苯胺与以上7种潜在基因毒性杂质同时进行分离。进一步，所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，所述流动相的二乙胺水溶液浓度为0.1％-0.3％。优选的，所述二乙胺水溶液浓度为0.2％。进一步，所述二乙胺水溶液的pH值为2.5-3.5。优选的，所述二乙胺水溶液的pH值为3.0。优选的，所述二乙胺水溶液的pH值选用磷酸溶液进行调节。优选的，所述流动相采用线性梯度洗脱分离，线性梯度洗脱条件为：0min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85；20min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为35-45：55-65；40min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为75-85：15-25；45min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为75-85：15-25；47min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85；55min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85。更优选的，线性梯度洗脱条件为：0min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80；20min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为40：60；40min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为80：20；45min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为80：20；47min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80；55min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为20：80。进一步，所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，所述流动相的流速为0.5-1.5ml/min，优选流动相的流速为1.0ml/min。进一步，所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，所述色谱柱柱温为30±5℃，进样量为20μl，优选色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm。本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱，所述三乙炔苯胺的结构式如式Ⅰ所示；

【技术特征摘要】
1.分离盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于，以十八烷基硅烷键合硅胶为固定相，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱，所述三乙炔苯胺的结构式如式Ⅰ所示；2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述潜在基因毒性杂质为M2a、M2b、M2c、M2d、M2e、M2f、M2g所示化合物中的一种或多种；3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二乙胺水溶液浓度为0.1％-0.3％。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述二乙胺水溶液的pH值为2.5-3.5。5.利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈和二乙胺水溶液混合液为流动相进行洗脱分离，分离后采用紫外检测器对三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质进行检测。6.根据权利要求5所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述潜在基因毒性杂质为M2a、M2b、M2c、M2d、M2e、M2f、M2g所示化合物中的一种或多种。7.根据权利要求5所述的利用高效液相色谱法分离测定盐酸厄洛替尼关键起始原料三乙炔苯胺及其潜在基因毒性杂质的方法，其特征在于，所述流动相采用线性梯度洗脱分离，线性梯度洗脱条件为：0min：乙腈与二乙胺水溶液的体积比为15-25：75-85；20min：乙腈与二乙胺水溶液的体积...

【专利技术属性】
技术研发人员：周春燕，夏爽，杨婧，
申请(专利权)人：重庆华邦胜凯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50