一种食品中酪氨酸的检测方法技术

本发明专利技术提供一种食品中酪氨酸的检测方法，属于食品中氨基酸检测技术领域。本发明专利技术通过对高效液相色谱色谱条件的精确限定，能够实现食品中酪氨酸的分离和测定。实施例的数据表明，本发明专利技术实现了对食品中酪氨酸的分离和测定，同时峰面积和保留时间的标准偏差较小，且标准方程的线性相关系数高达0.99999，具有较高的准确性和灵敏度。

A method for the detection of tyrosine in food

The invention provides a method for detecting tyrosine in food, which belongs to the field of amino acid detection in food. The invention can realize the separation and determination of tyrosine in food by precise definition of high performance liquid chromatography. The data of the embodiment show that the invention realizes the separation and determination of tyrosine in foods, and the standard deviation of peak area and retention time is relatively small, and the linear correlation coefficient of standard equation is as high as 0.99999, which has high accuracy and sensitivity.

【技术实现步骤摘要】
一种食品中酪氨酸的检测方法
本专利技术涉及食品中氨基酸检测
，特别涉及一种食品中酪氨酸的检测方法。
技术介绍
氨基酸是构成生物体蛋白的最基本物质，也是生物体内活性肽、酶和其他一些生物活性分子的重要组成成分，与生命活动有着密切的关系。食品中含有丰富的氨基酸，为人体所需提供了不可或缺的营养成分。目前，检测氨基酸的常用方法是高效液相色谱法，高效液相色谱法是利用衍生化试剂将荧光基团加在氨基酸的氨基上，然后通过荧光和紫外检测器进行检测，如中国专利CN104678044A公开了利用反相高效液相色谱检测茶叶中游离氨基酸的方法；中国专利CN104181251A公开了一种HPLC检测胱氨酸中酪氨酸含量的方法，但是这些方法存在灵敏度低、衍生剂昂贵、检测结果不准确的问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种食品中酪氨酸的检测方法，提高检测结果的准确性和灵敏度。本专利技术提供了一种食品中酪氨酸的检测方法，包括以下步骤：(1)食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液；(2)将所述步骤(1)得到的滤液依次进行调节pH值为中性和稀释，得到稀释液；(3)在避光条件下，将所述步骤(2)得到的稀释液依次与丹磺酰氯进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm；(4)将所述步骤(3)得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，所述标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；所述高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C-18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。优选地，所述步骤(1)中无机酸的浓度为0.1～1mol/L，所述食品的质量与无机酸的体积比为1g：10～15mL。优选地，所述步骤(1)中浸提的时间为20～60min。优选地，所述步骤(2)中调节pH值使用的溶液为碳酸钠缓冲液，所述碳酸钠缓冲液的pH值为9.5。优选地，所述步骤(3)中稀释液中的酪氨酸与丹磺酰氯的质量比为1:1～1.1。优选地，所述步骤(3)中衍生化反应的时间为2～4h。优选地，所述步骤(4)中乙酸钠缓冲液的pH值为4.2。优选地，所述标准方程的测定包括以下步骤：(a)配制包含酪氨酸标准样品的待测溶液；(b)将所述步骤(a)得到的待测溶液与丹磺酰氯进行衍生化反应，得到待测样品；(c)将所述步骤(b)得到的待测样品进行高效液相色谱分析，得到待测样品的色谱图，所述高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C-18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器；以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量，得到酪氨酸的标准方程。优选地，所述步骤(a)中待测溶液中酪氨酸的浓度为0.5～10.0μg/mL。本专利技术提供了一种食品中酪氨酸的检测方法，食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液，滤液依次进行调节pH值为中性和稀释得到稀释液，然后在避光条件下，将稀释液与丹磺酰氯依次进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm，得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程，高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C-18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。本专利技术通过对高效液相色谱色谱条件的优化，能够实现食品中酪氨酸的分离和测定。实施例的数据表明，本专利技术实现了对食品中酪氨酸的分离和测定，同时峰面积和保留时间的标准偏差较小，且标准方程的线性相关系数高达0.99999，具有较高的准确性和灵敏度。附图说明图1是本专利技术实施例1测定酪氨酸标准样品的高效液相色谱谱图；图2是本专利技术实施例1制得的酪氨酸标准曲线；图3是本专利技术实施例2得到的高效液相色谱谱图；图4是本专利技术实施例2得到的空白样品的高效液相色谱谱图；图5是本专利技术实施例3得到的高效液相色谱谱图；图6是本专利技术实施例4得到的高效液相色谱谱图；图7是本专利技术实施例5得到的高效液相色谱谱图。具体实施方式本专利技术提供了一种食品中酪氨酸的检测方法，包括以下步骤：(1)食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液；(2)将所述步骤(1)得到的滤液依次进行调节pH值为中性和稀释，得到稀释液；(3)在避光条件下，将所述步骤(2)得到的稀释液依次与丹磺酰氯进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm；(4)将所述步骤(3)得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，所述标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；所述高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C-18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。本专利技术中食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液。在本专利技术中，所述无机酸的浓度优选为0.1～1mol/L，更优选为0.5～0.8mol/L；所述食品的质量与无机酸的体积比优选为1g：10～15mL，更优选为1g：11～13mL。本专利技术对所述无机酸的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的无机酸即可，具体的，如盐酸、硝酸。在本专利技术中，所述食品进行浸提前还优选包括粉碎处理。本专利技术对所述粉碎的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的粉碎方式确保均匀即可，具体的如研磨。在本专利技术中，所述浸提的时间优选为20～60min，更优选为30～40min。本专利技术对所述浸提的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的提取方式即可，具体的，如超声浸提，本专利技术对所述超声的功率、温度没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的功率和温度即可，具体的，如在室温下、于100～400W下进行超声处理。提取完成后，本专利技术将提取后的体系进行固液分离得到滤液。本专利技术对所述固液分离的具体方式没有特殊的限定，采用本领域技本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种食品中酪氨酸的检测方法，包括以下步骤：(1)食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液；(2)将所述步骤(1)得到的滤液依次进行调节pH值为中性和稀释，得到稀释液；(3)在避光条件下，将所述步骤(2)得到的稀释液依次与丹磺酰氯进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm；(4)将所述步骤(3)得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，所述标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；所述高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C‑18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。

【技术特征摘要】
1.一种食品中酪氨酸的检测方法，包括以下步骤：(1)食品经无机酸浸提后，固液分离得到滤液；(2)将所述步骤(1)得到的滤液依次进行调节pH值为中性和稀释，得到稀释液；(3)在避光条件下，将所述步骤(2)得到的稀释液依次与丹磺酰氯进行衍生化反应和有机滤膜过滤，得到待测液，所述有机滤膜的孔径为0.45μm；(4)将所述步骤(3)得到的待测液进行高效液相色谱分析，以保留时间定性，用外标法以标准方程计算得到食品中酪氨酸的含量，所述标准方程是以酪氨酸质量浓度为自变量、峰面积为因变量的方程；所述高效液相色谱分析的色谱条件为：分析柱：C-18柱；流动相：有机相A:乙腈；水相B：乙酸钠缓冲液；流速：1mL/min；洗脱方式：梯度洗脱，0min，A:B＝45:55，10min，A:B＝65:35，12min，A:B＝75:25，18.5min，A:B＝45:55；检测波长：252nm；检测温度：40℃；进样体积：20μL；检测时间：35min；检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中无机酸的浓度为0.1～1mol/L，所述食品的质量与无机酸的体积比为1g：10～15mL。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(1)中浸提的时间为20～60min。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述步骤(2)中调节pH值使用...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦俊莲，吴建明，陈智勇，郑家概，陈良开，严艺书，杨逸菲，
申请(专利权)人：广东中测食品化妆品安全评价中心有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44