本发明专利技术论述了ＳＡＲＳ（严重急性呼吸道综合症病毒，一种冠状病毒）免疫原、抗原或表位；编码所述免疫原、抗原或表位的核酸分子；含所述核酸分子的载体，例如病毒载体（如杆状病毒载体）、ＤＮＡ载体（如ＤＮＡ质粒载体，例如在哺乳动物细胞中表达核酸分子的ＤＮＡ质粒）；所述免疫原、抗原或表位和载体例如用作活性组分免疫原性、免疫性或疫苗组合物的用途或用于生产抗体如单克隆抗体的用途；以及制备和使用所述免疫原、抗原或表位、载体、抗体的方法，包括激发免疫性或免疫原性或疫苗应答的方法以及实验或诊断试剂盒或诊断方法，还论述了质粒或载体中序列的无缝融合，例如前导序列编码序列和蛋白、表位或免疫原或抗原编码序列的无缝融合。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及SARS(严重急性呼吸道综合症病毒，一种冠状病毒)免疫原、抗原或表位；编码所述免疫原、抗原或表位的核酸分子；含所述核酸分子的载体，例如病毒载体(如杆状病毒载体)、DNA载体(如DNA质粒载体，例如在哺乳动物细胞中表达核酸分子的DNA质粒)；所述免疫原、抗原或表位和载体例如用作活性组分免疫原性、免疫性或疫苗组合物的用途或用于生产抗体如单克隆抗体的用途；制备和使用所述免疫原、抗原或表位、载体、抗体的方法，包括激发免疫原性或免疫性或疫苗应答的方法，以及实验或诊断试剂盒或诊断方法。本专利技术还包括在质粒或载体中的序列无缝融合，例如前导序列编码序列和蛋白、表位或免疫原或抗原编码序列的无缝融合。
技术介绍
SARS或严重急性呼吸道综合症是一种呼吸道疾病。主要症状包括发烧、干咳、头痛、呼吸短促和呼吸困难。许多被感染患者发展为引起下呼吸道感染的病毒性肺炎。SARS是高度传染性的，通过咳嗽或打喷嚏产生的飞沫或通过其它方法如粪便污染传播。WHO估计SARS的致死率约占全部病例的10-15％。至2003年5月28日为止，全世界确诊8,240例SARS，745人死亡(来源世界卫生组织)。在老年人中，具体地说是那些60岁或60岁以上的患者，致死率为43％。(Stohr，2003)。目前，对SARS没有特异性疗法，迄今为止也没有可靠的诊断试验。最近，Koch的SARS冠状病毒与SARS疾病相关的假定得到证实(Fouchier，Kuiken et al.2003)。Fouchier等描述了得自实验性感染的猕猴的证据，SARS相关病毒(SCV)实际上是疾病的病因。较早前，其它研究小组已经描述了由病患宿主分离SCV并在宿主细胞中培养SCV(Drosten，Gunther et al.2003；Ksiazek，Erdman et al.2003)。冠状病毒感染各种家畜、家禽和宠物。冠状病毒是球形包膜病毒，直径在160-180nm之间，含正链RNA基因组。鉴于其约30,000个碱基的基因组，其被认为是已知最大的RNA病毒。同流感病毒一样，它们能够与冠状病毒家族的其它成员遗传重组。冠状病毒以引起常见感冒而声名狼籍。冠状病毒形态学示于附图说明图10，示意图示于图11。由冠状病毒引起的SARS已成为了一个难题。证据如下SARS已被证明在VERO(非洲绿猴肾)细胞中生长，并存在于哺乳动物物种中，例如果子狸和貉，这种因素表明病毒在不确定的将来仍将保持活性，并可增强毒力。SARS免疫原、抗原和表位；编码所述免疫原、抗原或表位的核酸分子；含所述核酸分子的载体；所述免疫原、抗原或表位和载体例如用作活性组分免疫原性、免疫性或疫苗组合物的用途或用于生产抗体如单克隆抗体的用途；制备和使用所述免疫原、抗原或表位、载体、抗体的方法，包括激发免疫性或免疫原性或疫苗应答的方法以及实验或诊断试剂盒或诊断方法，应当对处理SARS有效。专利技术目的/概述本专利技术的一个目的可为使用例如杆状病毒表达载体系统克隆和表达、纯化、放大、表征和生产冠状病毒(如SARS)、蛋白(如S-蛋白，例如SARS S-蛋白)；有利地，蛋白，如SARS S蛋白，可用于免疫原性、免疫性或疫苗组合物，或用于产生可用于试剂盒、检查、方法或实验(例如诊断性实验)的单克隆抗体。S蛋白可为全长或截短或融合蛋白。并且，本专利技术的另一个目的可为提供无缝连接的核酸分子。而且，本专利技术提供联合组合物，例如含和/或表达一种或多种SARS抗原、表位或免疫原以及另一种病原体(例如流感病毒，如流感病毒HA和/或NA)一种或多种抗原、表位或免疫原的组合物。本专利技术进一步设想了含和/或表达一个以上分离株的一种或多种SARS抗原、表位或免疫原的组合物，例如至少两个分离株，如3个或更多个分离株，有利地为3个分离株。在这一点上，由于流感疫苗在联合组合物中含和/或表达一种或多种HA和/或NA抗原、表位或免疫原(例如不同毒株的3种HA和/或NA抗原、表位或免疫原，如WHO选定的那些)，有利地，组合物也含有和/或表达一种或多种HA和/或NA抗原、表位或免疫原；再进一步，组合物可有利地含有和/或表达一个以上分离株的SARS蛋白，例如至少两个分离株，如3个或更多个分离株，例如3个分离株。关于SARS抗原、表位或免疫原，尽管本专利技术设想了S、S1、S2、M、N和E或其部分中的任一种或全部，但S如全长S被认为是有利的。在本说明书中要指出的是，术语“包含”等可具有美国专利法赋予它们的含义；例如其可指“包括”等。术语如“基本由组成”具有美国专利法赋予它们的含义，例如其允许包含另外的不损害本专利技术的新特征或基本特征的成分或步骤，即其排除了有损本专利技术的新特征或基本特征的其它未列举成分或步骤，并排除了先有技术的成分或步骤，所述先有技术例如为本文提及或通过引用结合到本文中的本领域文件，尤其是该文件的目标实际上是确定实施方案可取得专利的，例如相比于先有技术(例如本文提及的或通过引用结合到本文中的文件)为新的、非显而易见的、创造性的。再者，术语“由组成”具有美国专利法赋予它们的含义；即这些术语是封闭式的。本专利技术的其它方面描述于或显见于(并在本专利技术范围内)以下的公开内容。附图简述以下详述以举例方式给出，但无意限制本专利技术于所描述的任何具体实施方案，其可连同通过引用结合到本文中的附图一起来理解，其中图1A、1B显示了SARS S蛋白的氨基酸序列以及SARS S蛋白的编码核苷酸序列，并标出了用于克隆的限制性位点和引物(另参阅图7)；图2A、2B显示了SARS S ORF的编码核苷酸序列，ATG、AGT和TAA以粗体表示；图3显示了SARS E蛋白的编码核苷酸序列；图4显示了SARS E蛋白的氨基酸序列；图5显示了SARS M蛋白的编码核苷酸序列；图6显示了SARS M蛋白的氨基酸序列；图6A显示了SARS N蛋白的编码核酸序列；图6B显示了SARS N蛋白的氨基酸序列；图7显示了用于克隆SARS S ORF的引物(也参阅图1)；图8显示了SARS S ORF的限制性图谱；图9显示了制备杆状病毒(BEVS或BV)表达载体的流程策略；图10显示了冠状病毒颗粒；图11显示了SARS冠状病毒的图示；图12A、B、C和D显示了S蛋白生产工艺的概述图。图13A-F显示了序列比对。图14为三种产生的构建物的图示。图15是凝胶图象。图16是凝胶图象。图17是凝胶图象。图18是蛋白质印迹图象。图19是蛋白质印迹图象。图20是蛋白质印迹图象。图21是两个蛋白质印迹的图象。图22是两个蛋白质印迹的图象。图23是凝胶和蛋白质印迹的图象。图24是凝胶图象。图25是凝胶图象。图26是凝胶图象。图27是凝胶图象。图28是凝胶图象。图29是凝胶图象。图30是凝胶图象。图31是凝胶图象。图32是凝胶和蛋白质印迹的图象。图33是凝胶和蛋白质印迹的图象。图34是凝胶和蛋白质印迹的图象。图35是凝胶和蛋白质印迹的图象。图36是凝胶和蛋白质印迹的图象。图37是凝胶和蛋白质印迹的图象。图38是凝胶和蛋白质印迹的图象。图39是蛋白质印迹图象。图40是蛋白质印迹图象。图41是蛋白质印迹图象。图42是蛋白质印迹图象。图43是蛋白质印迹图象。图44是凝胶图象。图45是蛋白质印迹图象。图46是蛋白质印迹图象。图47是本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离的ＳＡＲＳ蛋白，或体内和／或体外表达所述蛋白的载体，例如质粒、重组病毒，如重组杆状病毒。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：KD安德森，KM霍尔茨科尔里斯，R楚贝特，D亚当斯，M科克斯，
申请(专利权)人：蛋白质科学公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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