用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途，并提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的标记、组合物、试剂盒和预测方法。根据本发明专利技术，预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的效果优异，因此本发明专利技术可以用于癌症治疗。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途
本专利技术涉及一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物及其用途。
技术介绍
通常，对于抗癌治疗，对抗癌药物的体内反应性很大程度上取决于药物靶向的癌细胞对药物的敏感性。癌细胞对给定药物的这种敏感性根据不同癌细胞而变化很大。癌细胞的敏感性归因于药物的靶分子或其中涉及的因素的定量差异或定性差异、耐药性的获得等。基于这样的背景，确认癌细胞的遗传变化(该变化特别是在癌细胞对给定抗癌药物显示敏感性时出现)将是非常有益的，因为所述确认将使得能够早期确定药物的作用、治疗的建立、新治疗的选择等。此外，从临床观点来看非常有用的是：根据常规方法，通过将癌细胞与活检组织等治疗前获得的癌组织分离后，通过用药物治疗癌细胞，基于遗传变化而测量给定癌细胞对药物的敏感性的存在，原因是这种测量将能够预测药物在治疗中的有效性。同时，蛋白激酶是通过磷酸化调节其它蛋白质的活性、位置和功能从而控制各种细胞内过程的酶。蛋白激酶的功能异常与诸如癌症、免疫疾病、神经疾病、代谢疾病、感染等疾病的机制密切相关。蛋白激酶的实例可以包括Abl、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR、YES等。其中，关于c-MET，c-MET的异常活化与抗癌治疗预后的恶化密切相关，并且在诸如非小细胞肺癌等各种癌症中观察到c-MET的过表达和突变。由于肿瘤的侵袭和转移是癌症患者死亡的主要原因，因此预期c-MET信号传导的抑制对于癌症治疗是有效的。Recepteurd'OrigineNantais(RON)是属于MET(c-MET)系列的蛋白受体。它在肝脏中分泌，并且是调节巨噬细胞作用的血清蛋白(巨噬细胞刺激蛋白，MSP)的受体(ZhouYQ,HeC,ChenYQ,WangD,WangMH:改变原发性人结肠直肠腺癌中RON受体酪氨酸激酶的表达：不同剪接RON变体的产生及其致癌潜力。Oncogene2003,22(2):186-197)。RON表达在乳腺癌和结肠直肠癌中被异常调节，更具体地，其与结肠直肠癌的转移密切相关。RON活性的程度由选择性剪接调控，其为调节真核生物的基因表达的主要过程之一。RONΔ155、RONΔ160和RONΔ165是通过这种剪接跳过外显子而产生的形式，并且即使没有配体，它们也总是处于结构活化状态。此外，RON基因的突变与各种癌症的发生和分级相关。在韩国专利号10-1350006中描述的CJ12495、CJ12537、CJ12524和CJ12567是能够抑制癌细胞异常增殖的抗癌药物，并且它们是能够抑制蛋白激酶活性的抑制剂。如上所述，抗癌药物在耐药性和毒性方面显示出个体差异，并且具有超过约一半的患者表现出抗性的问题，因此选择合适的治疗-反应性标记物可带来创新性改善。因此，目前正在积极且持续地开发根据特定基因对单个癌症药物治疗的反应性的研究。然而，由于与对特定药物体内反应相关的因素的复杂作用、治疗药物的多样性和给药模式、以及难以获得足够的样品，所以成果仍然可以忽略。
技术实现思路
[技术问题]在这种情况下，本专利技术人努力开发能够预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，所述蛋白激酶抑制剂是针对结肠癌的抗癌药物。作为结果，他们已经根据RON基因的活化分析了RON基因的变体和突变体以及敏感性，并且根据RON基因的变体和突变体的RON活化或表达特征，确认了由于对特定药物的敏感性导致的癌细胞的大小和重量的降低程度根据结肠癌细胞不同而变化，从而完成本专利技术。因此，在一个目的中，本专利技术提供用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物、组合物、试剂盒及其方法。[技术方案]为了实现上述目的，本专利技术的一个目的提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂(包括活性Recepteurd'OrigineNantais(RON))的敏感性的生物标记物。此外，本专利技术提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的组合物，其包含用于测量活性RON的表达水平的试剂。此外，本专利技术提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的试剂盒，其包含所述组合物。此外，本专利技术提供一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的方法。[本专利技术的有益效果]使用本专利技术的生物标记物来预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性可以肯定地确定在开始治疗之前个体患者的敏感性，因此可以选择具有高治疗效果的抗癌药物。此外，可以避免使用没有显著效果的抗癌药物，因此可以防止不必要的副作用。附图说明图1a示出了结肠癌细胞系(HT29、colo320hsr和MKN28)和结肠癌患者的样品中野生型RON或RONΔ155或RONΔ160变体的RT-PCR结果。图1b示出了结肠癌细胞系(HT29、colo320hsr和MKN28)和结肠癌患者的样品中野生型RON或RONΔ155或RONΔ160变体的蛋白质印迹和免疫沉淀(IP)结果。图1c示出了结肠癌患者的样品中P-RON的IHC结果。图2a表示说明PDX模型中药物敏感性试验过程的示意图。图2b示出了当在PDX模型制备过程中关于RON变体确定为阳性的结肠癌患者的样品的第116号样品被移植时的情况下肿瘤大小以及当在PDX模型制备过程中关于RON变体确定为阳性的第130号样品被移植时的情况下肿瘤大小的测量结果。图3a表示当CJ12567施用于患者来源的结肠癌组织异种移植模型(PDX模型)中时在裸小鼠中形成的癌组织的图像，所述PDX模型是移植有结肠癌患者的第87和第116号样品的裸小鼠。图3b示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织大小的测量结果。图3c示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织重量的测量结果。图3d示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织的IHC结果。图3e示出了从上述小鼠获得的肿瘤组织的蛋白质印迹结果。图4a示出了CJ12495对RON磷酸化的抑制。图4b示出了在导入了RON突变基因的细胞中RON磷酸化的抑制。图4c示出了RON基因变体中RON磷酸化的抑制。图5a示出了CJ12495对细胞运动性的抑制。图5b示出了在导入了RON突变基因的细胞中细胞运动性的抑制。图5c示出了RON基因变体中细胞运动性的抑制。图6a示出了CJ12495对细胞转移的抑制。图6b示出了在导入了RON突变基因的细胞中细胞转移的抑制。图6c示出了RON基因变体中细胞转移的抑制。图7a示出了CJ12524对RON磷酸化的抑制。图7b示出了RON基因变体中RON磷酸化的抑制。图7c示出了通过CJ12524的凋亡。图7d示出了RON基因变体中的凋亡。图7e示出了CJ12524对细胞转移的抑制。图8a示出了在将CJ12524施用于RON-活性癌细胞-异种移植模型之后从小鼠获得的肿瘤组织大小和重量的测量结果。图8b示出了在小鼠中形成的肿瘤组织大小的图像。图8c示出了从小鼠获得的肿瘤组织的IHC结果。图8d示出了从小鼠获得的肿瘤组织的蛋白质印迹结果。图9示出本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，其包括活性Recepteur d’Origine Nantais即RON。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.03 KR 10-2014-01167871.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的生物标记物，其包括活性Recepteurd’OrigineNantais即RON。2.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述活性RON包括RON基因的剪接变体或突变体。3.根据权利要求2所述的生物标记物，其中，所述剪接变体为选自由序列号1的RONΔ155、序列号2的RONΔ160和序列号3的RONΔ165组成的组中的至少一种。4.根据权利要求2所述的生物标记物，其中，所述突变体为选自由序列号4的多肽中第1254位氨基酸从M取代为T的突变体；序列号4的多肽中第1335位氨基酸从R取代为G的突变体；序列号4的多肽中第523位氨基酸从R取代为Q的突变体；序列号4的多肽中第1232位氨基酸从D取代为V的突变体；和序列号4的多肽中第1268位氨基酸从M取代为T的突变体组成的组中的至少一种。5.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述蛋白激酶为选自由Abl、ACK、ALK、Arg、ARK5、Aurora、Axl、Bmx、BTK、CDK、CHK、c-Kit、c-MET、c-RAF、c-SRC、EGFR、FAK、Fes、FGFR、Flt3、GSK3、IGF、IKK、JAK、Lck、LIMK、Lyn、MEK、Mer、MK-2、P38α、PDGFR、PDK、Pim、PKA、PKB、PKCR、Plk-1/3、Ret、RON、Ros、Rse、Tie、Trk、Tyro3、VEGFR和YES组成的组中的至少一种。6.根据权利要求1所述的生物标记物，其中，所述蛋白激酶抑制剂为选自由CJ12495、CJ12537、CJ12524、CJ12567、K252a、SU11274、PHA-665752、ARQ-197、PF-02341066、PF-04217903、JNJ-38877605、Foretinib、SGX523、MP470、AMG102、AMG706、LY2801653、XL-184、Flavopihdol、Olomoucine、Roscovitine、Purvanolols、CGP74514A、Roscovitine、Bevacizumab、Cetuximab、Gefitinib、Erlotinib、Panitumumab、PKI-166、EKB-569、HKI-272(WAY-177820)、Lapatinib、Canertinib、AEE788、XL647、BMS5599626和Zactima所组成的组中的至少一种。7.一种用于预测对蛋白激酶抑制剂的敏感性的组合物，其包括用于测量活性Recepteurd’OrigineNantais即RON的表达水平。8.根据权利要求7所述的组合物，其中，所述活性RON的表达水平包括剪接变体或突变体的表达水平。9.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述剪接变体为选自由序列号1的RONΔ155、序列号2的RONΔ160和序列号3的RONΔ165组成的组中的至少一种。10.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述突变体为其中序列号4的多肽中的氨基酸被取代、缺失或插入的突变体。11.根据权利要求8所述的组合物，其中，所述突变体为选自由序列号4的多肽中第1254位氨基酸从M取代为T的突变体；序列号4的多肽中第1335位氨基酸从R取代为G的突变体；序列号4的多肽中第523位氨基酸从R取代为Q的突变体；序列号4的多肽中第1232位氨基酸从D取代为V的突变体；和序列号4的多肽中第1268位氨基酸从M取代为T的突变体组成的组中的至少一种。12.根据权利要求7...

【专利技术属性】
技术研发人员：阵东勋，洪承佑，文哉喜，伸在植，
申请(专利权)人：财团法人峩山社会福祉财团，
类型：发明
国别省市：韩国,KR