一种抗人DLL4单克隆抗体与海兔毒素衍生物MMAE的偶联物制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE的偶联结合物，涉及生物制药技术领域。其特征在于：小分子毒素海兔毒素衍生物MMAE和抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01的偶联结合物的制备方法及用途。本发明专利技术采用抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01，选取vcMMAE的接头及药物组合，在偶联工艺中使用膦类还原剂三羧乙基膦TCEP部分还原抗体MMGZ01，随后与vcMMAE偶联并进行偶联物的纯化，通过对工艺的优化，制备出新型抗人DLL4单克隆抗体药物偶联物MvM03，所述的偶联物MvM03有益效果在于促进毒素分子MMAE的肿瘤靶向性，减少对机体正常细胞的毒害作用，达到更好的治疗效果。

Conjugates of an anti human DLL4 monoclonal antibody and aplysiatoxin derivatives MMAE

The invention discloses a conjugated anti human DLL4 monoclonal antibody MMGZ01 and aplysiatoxin derivative MMAE conjugates, relates to the technical field of biological pharmacy. It is characterized in that the preparation and use of the coupling of small molecule toxin aplysiatoxin derivatives MMAE and anti human DLL4 monoclonal antibody combined with MMGZ01. The invention adopts anti human DLL4 monoclonal antibody MMGZ01, selection of joint and drug combination vcMMAE, in the coupling process using phosphine reducing agent three carboxyethyl phosphine partial reduction of TCEP antibody MMGZ01, then purified with vcMMAE coupling and conjugates, by optimizing the process, producing new anti DLL4 monoclonal antibody drugs conjugates of MvM03, the conjugate MvM03 beneficial effect is to promote the tumor target toxin molecule to MMAE, reduce the toxicity to normal cells of the body, achieve better therapeutic effect.

【技术实现步骤摘要】
一种抗人DLL4单克隆抗体与海兔毒素衍生物MMAE的偶联物
本专利技术是抗体偶联药物领域。具体来说，本专利技术涉及抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01偶联小毒素分子海兔毒素衍生物MMAE的偶联物。
技术介绍
DLL4(Deltalike4)是Notch信号通路中Notch受体的一个重要配体，DLL4通过与相邻细胞表面Notch受体的结合，参与调控毗邻细胞的增殖、凋亡、分化以及干细胞增殖和更新等生物学过程。此外DLL4在人类肿瘤组织中过表达，并参与肿瘤血管的发生发展，到目前为止，人们先后在肾癌、膀胱癌、结肠癌、脑瘤和乳腺癌等肿瘤血管中均观察到DLL4的过表达。近年来多项研究发现，DLL4/Notch信号通路在肿瘤发生、肿瘤血管生成以及肿瘤干细胞的增殖与更新等肿瘤发生发展过程中发挥了重要作用。可见，DLL4有望成为研究肿瘤发生机制及开发相关诊断试剂的新颖靶标，以此开发的特异性抗体及其肿瘤干细胞治疗方法具有良好的应用前景。抗肿瘤的单克隆抗体通过化学修饰与小分子毒素偶联，这些偶联物既有特异性识别肿瘤抗原的能力，也保留了毒素分子杀伤肿瘤细胞的毒性，靶向于肿瘤部位，选择性杀伤肿瘤细胞。目前国内尚无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新型抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE的抗体药物偶联物MvM03，其特征在于：包括抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01分子偶联带有接头Val‑Cit的毒素MMAE，即vc‑MMAE，平均每个MMGZ01分子偶联MMAE的分子数为4.42。

【技术特征摘要】
1.一种新型抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE的抗体药物偶联物MvM03，其特征在于：包括抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01分子偶联带有接头Val-Cit的毒素MMAE，即vc-MMAE，平均每个MMGZ01分子偶联MMAE的分子数为4.42。2.根据权利要求1所述的抗体药物偶联物MvM03，其特征在于：其制备方法包括如下步骤：步骤一：抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01经过ProteinA柱亲和层析纯化和琼葡糖凝胶G25FF柱分子筛层析替换抗体溶液体系后，BCA法测定抗体浓度，将还原剂TCEP与抗体以3：1的摩尔比混合，还原MMGZ01，使MMGZ01链间二硫键打开，样品于4℃反应1小时，用含1MDTPA的PH7.0PBS溶液通过琼葡糖G25FF柱分子筛层析脱盐。步骤二：取带有二肽接头Val-Cit的毒素MMAE粉末，即vc-MMAE充分溶解在DMSO溶液中，将vc-MMAE溶液与步骤一得到抗体产物以15∶1的摩尔比混合进行偶联反应，置于冰上轻轻搅拌，反应1小时。步骤三：，使用琼葡糖凝胶G25FF脱盐柱将步骤二得到的产物MMGZ01-vcMMAE，即MvM03，进行分子筛层析纯化，除去反应体系中的杂质。步骤四：在低速冷冻离心机上用超滤管将步骤三中的产物MvM03进行浓缩，即得抗体药物偶联物MvM03；BCA法测定偶联物浓度后，置于-20℃保存。3.根据权利要求2所述的新型抗人DLL4单克隆抗体MMGZ01与海兔毒素衍生物MMAE的抗体药物偶联物MvM03，其特征在于：所述的抗体药物偶联物MvM03的抗体部分采用化学方法，使用TCEP还原剂将链间二硫键还原成巯基基团，从而对抗体结构进行修饰。4.根据权利要求2所述的新型抗人D...

【专利技术属性】
技术研发人员：王旻，吴旻，王世静，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32