用于治疗目的的抗体‑脲酶缀合物制造技术

公开了包含抗体‑脲酶缀合物并基本上不含非缀合脲酶的药物组合物。通过不需要色谱纯化的方法制备这些组合物。通过抗体导向酶前药治疗，这些药物组合物可用于治疗癌症，其中脲酶将内源性尿素原位转化为氨以诱导细胞毒性。

The antibody to urease conjugates for therapeutic purposes

Pharmaceutical compositions comprising the antibodies urease conjugates and basically does not contain non conjugated urease is disclosed. These compositions are prepared by the absence of chromatographic purification. These drugs can be used in the treatment of cancer by antibody directed enzyme prodrug, in which urease transforms endogenous urea into ammonia to induce cytotoxicity.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗目的的抗体-脲酶缀合物相关申请的交叉引用本申请要求于2015年1月23日提交的美国临时申请第62/107,210号的权益。该申请通过引用并入本文。序列表即时申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，其全部内容通过引用并入本文。所述ASCII副本于2016年1月14日创建，命名为105013-1610_SL.txt，大小为11,000字节。
本公开提供具有治疗效用的抗体-脲酶缀合物。更具体地，本公开涉及具有缀合至脲酶的一种或多种抗体的治疗性缀合物、组合物、其用途及其制备。
技术介绍
脲酶是催化尿素水解成二氧化碳和氨的酶。具体地，脲酶催化尿素水解产生氨和氨基甲酸酯，随后通过自发水解使产生的氨基甲酸酯降解以产生另外的氨和碳酸。在这方面，脲酶活性倾向于增加其产生氨(其是具有一般毒性的碱性分子)的局部环境的pH值。在癌症治疗中使用抗体靶向肿瘤相关抗原的观念已经有一段时间了(Herlyn等人，(1980)CancerResearch40,717)。然而，关于脲酶，有毒成分是通过尿素的酶降解产生的碱性环境，并且使用高亲和力抗体片段。专利技术概述本技术涉及抗体-脲酶缀合物。本技术提供包含适于静脉内注射的药学上可接受的水溶液和基本上不含脲酶、不含非缀合抗体和/或不含非水性HPLC溶剂的抗体-脲酶缀合物的药物组合物。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分约6个或更多个抗体部分的缀合比。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分约6个或更多个抗体部分的平均缀合比。在一些方面，缀合物具有每个脲酶部分约8-11个抗体部分的平均缀合比。在一些方面，脲酶是洋刀豆(Jackbean)脲酶。在一些方面，抗体是人源化抗体或非人抗体。在一些方面，抗体的分子量为从约5kDa至约200kDa。在一些方面，抗体的分子量为从约5kDa至约50kDa。在一些方面，抗体是单结构域抗体。在一些方面，单结构域抗体具有不超过110个氨基酸残基、或约90个至130个氨基酸残基的大小。在一些方面，单结构域抗体的分子量为从约10kDa至约50kDa。在一些方面，单结构域抗体的分子量为从约12kDa至约15kDa。在一些方面，抗体对肿瘤细胞的抗原具有特异性。在一些方面，抗体对由非小细胞肺癌表达的肿瘤抗原具有特异性。在某一些方面，抗体对CEACAM6具有特异性。在一些方面，抗体对CEACAM6具有高于约1×10-6M的Kd值的的结合亲和力。在一些方面，缀合物对CEACAM6具有不大于约1×10-8M的Kd值的结合亲和力。在一些方面，缀合物对CEACAM6具有不大于约1×10-10M的Kd值的结合亲和力。在一些方面，缀合物对CEACAM6具有不大于约5nM的IC50值的合亲和力。在一些方面，IC50值为约3nM至约5nM。在一些方面，IC50值为约3.22nM。在一些方面，缀合物以约10μg/mL至约30μg/mL的IC50值与CEACAM6结合。在一些方面，缀合物以约20μg/mL的IC50值与CEACAM6结合。在一些方面，抗体包含含有SEQIDNO：1的氨基酸序列的多肽。在一些方面，抗体包含含有对SEQIDNO：1的氨基酸序列的至少一个修改的多肽。本技术提供了治疗有需要对象中癌症的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文提供的组合物，从而治疗对象中的癌症。在一些方面，癌症是非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌或其组合中的一种或多种。在一些方面，癌症是非小细胞肺癌。在一些方面，对象是人。本技术提供了制备包含基本上不含脲酶的抗体-脲酶缀合物的组合物的方法，该方法包括在具有约6.0-7.0(如约6.5)的pH值的水性缓冲液中组合活化的抗体和脲酶，将pH值调节至8.0-9.0(如约8.3)以形成抗体-脲酶缀合物，并纯化抗体-脲酶缀合物，其中该方法不包括色谱纯化步骤，诸如常用的蛋白纯化色谱法，包括尺寸排阻色谱法(SEC)、离子交换色谱法、亲和色谱法、固定化金属亲和色谱法、免疫亲和色谱法、液固吸附色谱法、疏水相互作用色谱法(HIC)、反相色谱法(RPC)和高效液相色谱法等。在一些方面，通过超透析过滤法纯化抗体-脲酶缀合物。在一些方面，抗体-脲酶缀合物具有每个脲酶部分8-11个抗体部分的缀合比。在一些方面，具有约6.5的pH值的缓冲液是乙酸钠缓冲液。在一些方面，通过包括添加硼酸钠溶液的方法将pH值调节至约8.3。本技术提供增加对肿瘤抗原的抗体结合亲和力的方法，其包括将多个抗体分子与脲酶分子缀合以形成抗体-脲酶缀合物，其中所述缀合物对肿瘤抗原具有比非缀合抗体高至少约100倍的结合亲和力。在一些方面，抗体是人源化抗体或非人抗体。在一些方面，抗体是单结构域抗体。在一些方面，肿瘤抗原由非小细胞肺癌表达。在一些方面，抗体对CEACAM6具有特异性。本技术还提供了试剂盒，其包含本文提供的组合物和使用该组合物的说明书。下面进一步描述本公开的这些方面和其它方面。附图说明图1A-B描述了在癌细胞系中L-DOS47的示例性结合和细胞毒性研究。(A)L-DOS47与以下五种癌细胞系的直接结合：BxPC-3、Capan-1、ZR-75-30、LS174T和MDA-MB231。结合信号由与20mM尿素一起孵育时产生的氨的量表示。在BxPC-3细胞(●)、Capan-1细胞和ZR-75-30细胞(◆)中观察到良好的L-DOS47结合，而在LS174T细胞(▲)中观察到中等结合，并且在MDA-MB231细胞(■)中没有发现结合。此外，在相应的细胞系上没有观察到与非缀合DOS47对照的结合(数据未显示)，表明L-DOS47结合是特异性的并且归因于抗体部分。(B)在加入20mM尿素时，L-DOS47对癌细胞系诱导了细胞毒性。在MDA-MB231细胞(■)中没有观察到作用，其与结合研究一致。BxPC-3(●)和ZR-75-30(◆)对L-DOS47高度敏感，而在Capan-1细胞和LS174T细胞(▲)中仅发现中等作用。图2A-B描述了L-DOS47抗体、DOS47抗体和AFAIKL2抗体与BxPC-3细胞的示例性直接和竞争性结合。(A)钌标记的L-DOS47抗体、AFAIKL2抗体和非缀合的DOS47与BxPC-3细胞的结合。电化学发光分析提供了L-DOS47抗体和AFAIKL2抗体与BxPC-3细胞结合的直接测量。用AFAIKL2抗体(▲)观察到弱结合信号，而由于抗体缀合物上存在多个AFAIKL2抗体的亲合力，L-DOS47显示出更强的结合信号(●)。用阴性对照DOS47(◇)没有观察到结合。(B)L-DOS47-标签与BxPC-3细胞的结合，与L-DOS47抗体、AFAIKL2抗体或DOS47竞争。可以通过测试制品的IC50(导致结合降低50％所需竞争者的量)，来比较L-DOS47抗体和AFAIKL2抗体两者的表观结合亲和力。L-DOS47抗体(●)和AFAIKL2抗体(▲)的IC50本文档来自技高网...

【技术保护点】
药物组合物，其包含适合于静脉内注射的药学上可接受的水溶液和基本上不含非缀合脲酶的抗体‑脲酶缀合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.01.23 US 62/107,2101.药物组合物，其包含适合于静脉内注射的药学上可接受的水溶液和基本上不含非缀合脲酶的抗体-脲酶缀合物。2.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述非缀合脲酶少于5％。3.如权利要求1所述的药物组合物，其不含非水性HPLC溶剂。4.如权利要求1所述的药物组合物，其中pH值是约6.8。5.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缀合物具有每个脲酶部分3个、4个、5个、6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。6.如权利要求5所述的药物组合物，其中所述缀合物具有每个脲酶部分6个、7个、8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。7.如权利要求6所述的药物组合物，其中所述缀合物具有每个脲酶部分8个、9个、10个、11个或12个抗体部分的缀合比。8.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缀合物具有每个脲酶部分约6个或更多个抗体部分的平均缀合比。9.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述缀合物具有每个脲酶部分约8-11个抗体部分的平均缀合比。10.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述脲酶是洋刀豆脲酶。11.如权利要求1-10中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是人源化抗体或非人抗体。12.如权利要求1-11中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体是单结构域抗体。13.如权利要求1所述的药物组合物，其中所述抗体对由非小细胞肺癌表达的肿瘤抗原具有特异性。14.如权利要求1-13中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体对CEACAM6具有特异性。15.如权利要求1-14中任一项所述的药物组合物，其中所述抗体对CEACAM6具有高于约1×10-6M的Kd值的结合亲和力。16.如权利要求15所述的药物组合物，其中所述缀合物对CEACAM6具有不大于约1×10-8M的Kd值的结合亲和力。17.如权利要求16所述的药物组合物，其中所述缀合物对CEACAM6具有不大于约1×10-10M的Kd值的结合亲和力。18.如利要求1所述的组合物，其中所述缀合物对CEACAM6具有不大于约5nM的IC50值的结合亲和力。19.如权利要求18所述的组合物，其中所述IC50值为约3.22nM。20.如权利要求1所述的组合物，其中所述缀合物以约20μg/mL的IC50值与CEACAM6结合。21.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗体包含含有SEQIDNO：1的氨基酸序列的多肽。22.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗体包含含有对SEQIDNO：1的氨基酸序列至少一个修改的多肽。23.治疗对象中癌症的方法，其包括向对象施用治疗有效量的权利要求1-22中任一项所述的组合物，从而治疗对象中的癌症。24.如权利要求23所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌、乳腺癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、结肠癌或其组合中的一种或多种。25.如权利要求24所述的方法，其中所述癌症是非小细胞肺癌。26.如权利要求24所述的方法，其中所述对象是人。27.制备包含抗体-脲酶缀合物和基于抗体-脲酶缀合物的重量不超过约5％的脲酶的组合物的方法，该方法包括：(1)在溶剂中组合活化的抗体和脲酶，且在所述溶剂中活化的...

【专利技术属性】
技术研发人员：巢立文，黄华友，田保民，金伯利·杰尼·加斯帕，普拉文·库马尔，
申请(专利权)人：赫利克斯生物药品公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA