抗VEGFR-2脲酶缀合物制造技术

提供了具有治疗效用的抗体‑脲酶缀合物。更具体地，本文描述了用于治疗实体瘤的抗VEGFR‑2抗体‑脲酶缀合物。描述了包含与脲酶部分缀合的抗VEGFR‑2抗体部分的缀合物。还描述了用于治疗VEGFR‑2依赖性肿瘤的组合物和方法，其掺入本文描述的抗体‑脲酶缀合物。

Anti VEGFR-2 urease conjugate

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗VEGFR-2脲酶缀合物专利
本专利技术涉及具有治疗效用的抗体-脲酶缀合物。更具体地，本文描述了用于治疗实体瘤的抗VEGFR-2脲酶缀合物。专利技术背景血管生成是侵袭性肿瘤生长和转移所必需的，并且构成控制癌症进展的要点。肿瘤血管生成由肿瘤分泌的血管生成生长因子介导，所述生长因子与其在内皮细胞上表达的表面受体相互作用。由于缺乏血液供应，无血管肿瘤的生长潜力受到严重限制。“血管生成开关”允许肿瘤通过扰乱促血管生成和抗血管生成因子的局部平衡而血管化并在大小和转移潜能方面发展。通常，肿瘤过表达促血管生成因子，如血管内皮生长因子，从而允许它们形成这种血管生成开关。血管内皮生长因子VEGF是内皮细胞特异性有丝分裂原。在生长因子中，它的不同之处在于它通过特异性促进内皮细胞的增殖而起到血管生成诱导剂的作用。VEGF的生物学反应是通过其高亲和力受体介导的，所述受体在胚胎发生期间和肿瘤形成期间在内皮细胞上选择性表达。血管内皮生长因子通过与许多受体结合来调节血管发育、血管生成和淋巴管生成。VEGFR-1是造血干细胞的募集以及单核细胞和巨噬细胞的迁移所必需的，VEGFR-2调节血管内皮功能，VEGFR-3调节淋巴管内皮细胞功能。除血管生成之外，实体瘤在肿瘤细胞代谢增加所产生的酸性环境中存活。增加的酸度可以降低几种不同类型的免疫细胞的功能，导致改善的肿瘤存活。此外，肿瘤通过表达阻断免疫细胞功能的蛋白质来避免免疫系统的检测。中和酸性环境通过重新激活然后能够靶向肿瘤的T细胞来影响肿瘤生长。申请人先前已开发出脲酶缀合物，例如，WO2004/009112公开了使用脲酶来降低肿瘤微环境中的pH以抑制癌细胞的生长；WO2014/165985公开了稳定脲酶的抗体-脲酶缀合物；以及WO2016/116907公开了使用抗体-脲酶缀合物，特别是CEACAM6-脲酶缀合物来治疗表达CEACAM6的肿瘤。需要治疗或预防癌症的组合物和方法，其靶向/解决不同的抗原和/或肿瘤生长的多个方面。专利技术概述本文描述的是对VEGFR-2特异的抗体，其与脲酶缀合，在本文被称为抗VEGFR-2脲酶缀合物，包含此类缀合物的组合物和使用所述缀合物治疗表达VEGFR-2的肿瘤(在多方面中为实体瘤)的方法。以这种方式，靶向VEGFR-2的结合可以通过仅增加表达VEGFR-2的肿瘤微环境的pH而导致肿瘤完整性彻底去稳定化。在多方面中提供的抗VEGFR-2脲酶缀合物为分离的/纯化的。根据本专利技术的一方面为抗VEGFR-2脲酶缀合物。根据本专利技术的另一方面为单结构域抗VEGFR-2脲酶缀合物。根据本专利技术的另一方面为对VEGFR-2特异的sdAb与脲酶缀合的组合，所述抗体可以包含SEQIDNO:2-30中的一个或多个，此种可以在组合物中提供用于治疗表达VEGFR-2的实体瘤。在本专利技术的多方面中，抗体为对VEGFR-2特异的单结构域抗体。本专利技术的抗VEGFR-2缀合物可以配制成用于治疗实体瘤的组合物，其中单结构域抗体能结合VEGFR-2以抑制活化，从而减少肿瘤的血管生成，同时脲酶增加肿瘤微环境的pH。总之，缀合物导致肿瘤生长的降低和/或进一步肿瘤生长的预防。根据本专利技术的一方面为组合物，其包含在适合于向需要的哺乳动物施用的药学可接受的载体中的治疗有效量的抗VEGFR-2脲酶缀合物。所述组合物可用于实体瘤的治疗，肿瘤生长的消退和/或肿瘤生长的预防。在多方面中为冻干的抗VEGFR-2脲酶缀合物组合物。在多方面中为复水的抗VEGFR-2脲酶缀合物组合物。在上述两个方面中，组合物包含对VEGFR-2特异的单结构域抗体。在多方面中，这些抗体选自SEQIDNO:2-30。在多方面中，抗体的组合。在一些方面，所述抗体为人源化抗体或非人抗体。在一些方面，所述抗体的分子量为约5kDa至约200kDa。在一些方面，所述抗体的分子量为约5kDa至约50kDa。在一些方面，所述抗体为单结构域抗体。在一些方面，所述单结构域抗体具有多达约160个氨基酸残基、多达约150个氨基酸残基、多达约140个氨基酸残基、多达约130个氨基酸残基、多达约120个氨基酸残基、不超过110个氨基酸残基、或约90至130个氨基酸残基的大小。在一些方面，所述单结构域抗体的分子量为约10kDa至约50kDa。在一些方面，所述单结构域抗体的分子量为约12kDa至约15kDa。在多方面中，所述抗体对肿瘤/肿瘤细胞上的VEGFR-2具有特异性。在多方面中，抗体对VEGFR-2的结合亲和力高达约1x10-6M或高达约1x10-8M。在一些方面，缀合物对VEGFR-2具有结合亲和力，其中Kd值不超过约1x10-10M。在一些方面，缀合物对VEGFR-2具有结合亲和力，其中IC50值不超过约5nM。在一些方面，IC50值为约3nM至约5nM。在一些方面，缀合物以约10μg/mL至约30μg/mL的IC50值结合VEGFR-2。在非限制性实例中，用于制备VEGFGR-2特异性脲酶缀合物的单结构域抗体或其片段可以包含能结合VEGFR-2的SEQIDNO:2-30的序列中的任一个，或者与其至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％相同的序列，或者与其基本上相同的序列。适合于本专利技术的单结构域抗体的接头序列可以选自SEQIDNO:54-65。在多方面中，接头序列还可以包含C-末端半胱氨酸，例如如SEQIDNO:66-69中。本文可以使用与这些接头序列相似的序列。在多方面中，编码用于与脲酶缀合的新型sdAb的核酸序列包含SEQIDNO:31-53中任一个的序列，或者与其至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％或至少95％相同的序列，或者与其基本上相同的序列。在一些方面，脲酶为刀豆脲酶。刀豆脲酶具有SEQIDNO:78的氨基酸序列。在一些方面，抗VEGFR-2脲酶缀合物的缀合比可以为每脲酶部分2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12个抗体部分。在一些方面，缀合物的缀合比为每脲酶部分约6或更多个抗体部分。在一些方面，缀合物的缀合比为每脲酶部分6、7、8、9、10、11或12个抗体部分。在一些方面，缀合物的缀合比为每脲酶部分8、9、10、11或12个抗体部分。在一些方面，缀合物的平均缀合比为每脲酶部分约6或更多个抗体部分。在一些方面，缀合物的平均缀合比为每脲酶部分约9个抗体部分，约9.1、约9.2、约9.3、约9.4等。在一些方面，脲酶为刀豆脲酶。本技术提供了治疗有需要的对象中的癌症的方法，其包括向对象施用治疗有效量的本文提供的抗VEGFR-2脲酶缀合物组合物，从而治疗对象中的癌症。在一些方面，对象为人。本技术提供了制备包含抗VEGFR-2脲酶缀合物的组合物的方法，所述方法包括将活化的抗体和脲酶在pH为约6.0-7.0，如约6.5的水性缓冲液中组合，将pH调节至8.0-9.0，如约8.3以形成抗体-脲酶缀合物，以及纯化抗体-脲酶缀合物，其中所述方法不包括色谱纯化步骤，如常用的用于蛋白质纯化的色谱方法，包括尺寸排阻色谱(SEC)、离子交换色谱、亲和色谱、固定化金属亲和色谱、免疫亲和色谱、液固吸本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.缀合物，其包含与脲酶部分缀合的抗VEGFR‑2抗体部分。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2017.01.05 US 62/442,657;2017.04.03 US 62/480,718;1.缀合物，其包含与脲酶部分缀合的抗VEGFR-2抗体部分。2.如权利要求1所述的缀合物，其中所述抗体部分经由交联剂与所述脲酶部分缀合。3.如权利要求2所述的缀合物，其中所述交联剂相对长且柔韧。4.如权利要求2或3所述的缀合物，其中所述交联剂为(PEG)2类交联剂。5.如权利要求4所述的缀合物，其中所述交联剂为SM(PEG)2或BM(PEG)2。6.如权利要求1至5中任一项所述的缀合物，其中所述缀合物的缀合比为每脲酶部分约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11或约12个抗体部分。7.如权利要求6所述的缀合物，其中所述缀合比最高达约3.3。8.如权利要求7所述的缀合物，其中所述缀合比为约3.3。9.如权利要求1至8中任一项所述的缀合物，其中所述脲酶部分为刀豆脲酶。10.如权利要求1至9中任一项所述的缀合物，其中所述抗体部分为单结构域抗体或其片段或其部分。11.如权利要求10所述的缀合物，其中所述抗体包含至少一个具有选自以下的序列的CDR：SYAMG、AISWSDDSTYYANSVKG、HKSLQRPDEYTY和与它们至少70％相同的能结合VEGFR2的序列。12.如权利要求10所述的缀合物，其中所述单结构域抗体或其片段包含选自以下的序列或由选自以下的序列组成：SEQIDNO:2-30、其片段及其变体。13.如权利要求12所述的缀合物，其中所述变体与SEQIDNO:2-30中的任一个具有至少70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、97％、98％、或99％的序列同一性，其中所述变体能结合VEGFR-2。14.如权利要求1至13中任一项所述的缀合物，其还包含另外的缀合部分。15.如权利要求1至14中任一项所述的缀合物，其被配制为组合物。16.如权利要求15所述的缀合物，其还包含药学可接受的载体或稀释剂。17.如权利要求15或16所述的缀合物，其中所述组合物为冻干的。18.药物组合物，其包含适合于静脉内注射的药学可接受的水溶液和基本上不含未缀合的脲酶的抗VEGFR-2-脲酶缀合物。19.如权利要求18所述的药物组合物，其中所述未缀合的脲酶小于5％。20.如权利要求18或19所述的药物组...

【专利技术属性】
技术研发人员：巢立文，黄华友，田保民，玛尼·黛安·乌格，
申请(专利权)人：赫利克斯生物药品公司，
类型：发明
国别省市：加拿大,CA