一种造血干细胞培养方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种造血干细胞培养方法，包括以下步骤：（1）采集脐带血分离得到单个核细胞中；加入PBS洗涤重悬细胞，得细胞重悬液；（2）调整单个核细胞密度，往细胞重悬液加入CD34

【技术实现步骤摘要】
一种造血干细胞培养方法
本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种造血干细胞培养方法。
技术介绍
造血干细胞是血液系统中的成体干细胞，是一个异质性的群体，具有长期自我更新的能力和分化成各类成熟血细胞的潜能。它是研究历史最长且最为深入的一类成体干细胞，对研究各类干细胞，包括肿瘤干细胞，具有重要指导意义。由于造血干细胞具有多向分化的潜能，将造血干细胞移植到体内是治疗白血病、淋巴瘤等恶性肿瘤、代谢性疾病、自身免疫性疾病及先天免疫缺陷等严重危害人类健康疾病的有效方法，可以有效的减轻患者的痛苦。但是，由于造血干细胞在体内的数量极少，大大的限制了造血干细胞在临床中的应用。骨髓、外周血和脐血是造血干细胞的重要来源。与骨髓和外周血造血干细胞相比，脐带血造血干细胞更为原始，自我增殖能力最强，且脐带血具有富含更早期的造血干细胞、采集方便，造血干细胞免疫原性弱、对异源性抗原产生的抗体少、移植过程中不需要严格配型、成熟性T细胞较少、采集和保存容易、无肿瘤细胞污染、对供者无损伤及副作用、CD34+CD38-与CD34+CD33-的比例较高等优点，因而脐带血造血干细胞具有极大的临床应用价值。但是，单份脐血的造血干本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种造血干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）采集脐带血，加入PBS稀释后，得到脐带血稀释液；往脐带血稀释液中加入甲基纤维素溶液，混匀后，沉降脐带血中的红细胞，并吸出上清液；将上清液离心后弃掉所得的上清液，加入PBS重悬细胞，得细胞悬液；往细胞悬液加入淋巴细胞分离液，静置，离心，弃掉上清液后，添加红细胞裂解液于收集到的下层的单个核细胞中；加入PBS洗涤液并再次重悬细胞，得细胞重悬液；（2）调整单个核细胞密度为1‑ 2×10

【技术特征摘要】
1.一种造血干细胞培养方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）采集脐带血，加入PBS稀释后，得到脐带血稀释液；往脐带血稀释液中加入甲基纤维素溶液，混匀后，沉降脐带血中的红细胞，并吸出上清液；将上清液离心后弃掉所得的上清液，加入PBS重悬细胞，得细胞悬液；往细胞悬液加入淋巴细胞分离液，静置，离心，弃掉上清液后，添加红细胞裂解液于收集到的下层的单个核细胞中；加入PBS洗涤液并再次重悬细胞，得细胞重悬液；（2）调整单个核细胞密度为1-2×108个/mL，往细胞重悬液加入CD34+抗体，混匀后，室温下孵育15–25min，加入CD34+免疫磁珠混匀，室温孵育下15-25min，用细胞洗涤液洗涤后置于磁场中，静置后弃掉上清液，得到造血干细胞CD34+细胞；（3）：将造血干细胞CD34+细胞，将细胞接种于造血干细胞培养基，调整造血干细胞CD34+细胞密度为1×105-2×105/mL，置于37℃，5%CO2饱和湿度培养箱中培养5-7天后，收获细胞。2.根据权利要求1所述的一种造血干细胞培养方法，其特征在于：所述造血干细胞培养基包括基础培养基和添加于基础培养基中的添加剂，按终浓度计，所述添加剂包括以下含量的组分：FBS100-200mg/mL、亚硒酸钠0.02-0.03μmol/mL、卡介菌多糖核酸5-10mg/mL、千金藤素50-100μmol/mL、海藻糖50-100ng/mL、维生素C40-80ng/mL、第一细胞因子缓释微囊1.5-2.5mg/mL、第二细胞因子缓释微囊25-50mg/mL。3.根据权利要求2所述的一种造血干细胞培养方法，其特征在于：所述第一细胞因子缓释微囊的制备方法包括以下步骤：A、将IL-3、IL-6、GM-CSF、聚乙二醇加入预先添加有甘露醇和硫酸锌的水溶液中，搅拌均匀后，得到混合物A，所述混合物A中IL-3、IL-6、GM-CSF的浓度均为1-2wt％，聚乙二醇的浓度为6-10wt％；所述甘露醇的浓度为2-4wt％，碳酸锌的浓度为1-3wt％；B、将聚羟基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇加入二氯甲烷中溶解，搅拌均匀后，得到混合物B，所述混合物B中聚羟基乙酸-聚乳酸-聚乙二醇的浓度为12-18wt％；C、将混合物A加入到混合物B中，搅拌均匀后，得到混合物C，所述混合物A和混合物B的体...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗天恩，
申请(专利权)人：东莞市保莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44