高效离体人造血干细胞扩增培养液配方组成比例

本发明专利技术涉及高效离体人造血干细胞扩增培养液配方。揭示了一种离体扩增造血干细胞的培养基和培养方法，通过所述培养基和培养方法可使造血干细胞在保持原来干性特征的基础上进行有效和大量的扩增，大大提高造血干细胞的体外扩增效率。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医学领域；更具体地，本专利技术涉及高效离体人造血干细胞扩增培 养液配方。
技术介绍
干细胞（Stem Cells)是一类具有自我更新及多向分化潜能的细胞群体，即这些细 胞可以通过细胞分裂维持自身细胞群的大小，同时又可以进一步分化成为各种不同的组织 细胞，从而医学界称之为"万能细胞"。这种独一无二的特性使其成为再生医学和移植医学 的一个不可缺少的细胞来源。也使它成为众多疾病，如血液疾病、帕金森病，糖尿病，脊髓损 伤、癌症和心脏病等细胞治疗的最佳候选者，因此对于干细胞的研究在临床应用领域意义 重大。 造血干细胞（Hematopoietic Stem Cell,HSC)是存在于造血组织中的一群原始造 血细胞，它不是组织固定细胞，可存在于造血组织及血液中。造血干细胞在人胚胎2周时可 出现于卵黄囊，妊娠5个月后，骨髓开始造血，出生后骨髓成为造血干细胞的主要来源。在 造血组织中，干细胞所占比例甚少。现代医学中，造血干细胞在骨髓移植和疾病治疗方面有 重要作用。 造血干细胞在应用过程中一个瓶颈是不能够有效的体外扩增并且在体外扩增中 会失去其干性。可用数量的细胞非常少，根本不能满足临床医治的需求。已知的造血干细 胞的扩增方法有使用饲养层细胞的方法，此方法不能使子干细胞维持与母干细胞相同的成 熟状态，最佳可以扩增干细胞5倍左右，且引入了外源性的细胞干扰，不利于扩增后用于临 床移植，易提高移植物抗宿主反应（GVHD)发生风险。 因此，本领域迫切需要提供针对造血干细胞的有效培养和扩增的试剂和方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供高效离体人造血干细胞扩增培养液配方。 在本专利技术的第一方面，提供一种用于造血干细胞扩增培养的细胞因子组合物，所 述的组合物是细胞因子组合物1，包括： Sail 样蛋 H 4B: 1-iOng/ml； Τ·细胞WJ'S 50-500 ng/ml； flt3-配体： 50-500 ng/ml； 血小板闪 f: 5-100 ng/ml； 屮性粒细胞集落刺激闪f: 5-100 ng/mh 白介素 3: 10-250 ng/ml: 白介素 6: 5-100 ng/ml 〇 在一个优选例中，所述的细胞因子组合物1包括： Sal】样蛋白 4B: 1.5-8 ng/ml； 干细胞_+/·: 60-300 ng/ml； flO-配体： 60-300 ng/ml; 血小板闪f: 6-70 ng/ml； 屮性粒细胞巢落刺激闪?-: 6-70 ng/ml； 內介素 3·* 15-150 ng/ml; 內介素 6: 6-70 ng/mL toon] 在另一优选例中，所述的细胞因子组合物1包括： Sal丨样蛋白 4B: 2-6 ng/ml； 干细胞因子： 80-丨50 ng/ml; flt3-配体： 80-150 ng/ml; 血小板因子： 8-30 ng/ml; 中性粒细胞集落刺激因子： 8-30 ng/ml; A 介素 3: 20-50 ng/ml； 内介素 6: 8-30 ng/mU 在本专利技术的另一方面，提供前面任一所述的细胞因子组合物1的用途，用于制备 造血干细胞扩增培养的培养基。 在本专利技术的另一方面，提供一种用于造血干细胞扩增培养的培养基，所述的培养 基是培养基1，包括=IMDM培养基；和前面任一所述的细胞因子组合物1。 在一个优选例中，该培养基还包括胎牛血清。 在另一优选例中，所述的胎牛血清是按照体积8-12%，较佳地10%的用量。 在本专利技术的另一方面，提供所述的培养基1的用途，用于扩增培养（为离体培养） 造血干细胞。 在另一优选例中，所述的造血干细胞是人脐带血造血干细胞。 在本专利技术的另一方面，提供一种用于造血干细胞扩增培养的试剂盒，所述的试剂 盒中包括：前面任一所述的细胞因子组合物1。 在另一优选例中，所述试剂盒中还包括：细胞因子组合物2,该细胞因子组合物2 包括： Sail 样蛋內 4B: l-10ng/m1； 十细胞 W-JS 50-500 tig/ml； flt3-配体： 50-500 ng/ml; 血小板Pl /·: 3-50 ng/mla 在另一优选例中，所述的细胞因子组合物2包括： Sail 样蛋闩 4B: 1.5-8 ng/ml;较佳地为 2-6 ng/ml; 十细胞闪 iS 60-300 ng/ml;较佳地为 80-150 ng/mi; flt3-配体： 60-300 ng/m〗；较佳地为 80-〗50 ng/mh 血小板 W /·: 5-30 ng/ml;较佳地为 6-20 ng/ml 3 在另一优选例中，所述的试剂盒中还包括：MDM培养基；所述的细胞因子组合物1 和/或细胞因子组合物2与IMDM培养基分开于不同的容器中放置，或被配制于IMDM培养 基中。 在本专利技术的另一方面，提供一种扩增培养造血干细胞的方法，所述方法包括： (1)应用前面所述的培养基1培养⑶34+的造血干细胞，培养期间更换1-2次新鲜 的培养基1 (较佳地在起始后第3±0. 5天，更换1次新鲜的培养基1); (2)培养起始后第6± 1天（较佳地6±0· 5天），将培养基更换为培养基2,培养期 间更换1-2次新鲜的培养基2 (较佳地在起始后第9± 1天（较佳地9±0. 5天），更换1次 新鲜的培养基2); 其中，所述的培养基2包括IMDM培养基和细胞因子组合物2,该细胞因子组合物2 包括： Sail 样蛋 R 4B; l-10ng/ml; T细胞闪 f: 50-500 ng/mh flt3-配体： 50-500 ng/ml; 血小板闪 ; 3-50 ng/ml? 在另一优选例中，在培养起始后第12±1天，终止培养，收获造血干细胞。 本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见 的。【附图说明】 图1、干细胞分离纯化后不同培养时间总有核细胞扩增效果图。 图2、干细胞分离纯化后不同培养时间⑶34+细胞扩增效果图。 图3、使用细胞因子组合扩增造血干细胞显微镜图。【具体实施方式】 针对现有技术中难以实现造血干细胞高效扩增的技术问题，本专利技术人经过深入的 研究，开发了一种离体扩增造血干细胞的培养基和培养方法，通过所述培养基和培养方法 可使造血干细胞在保持原来干性特征的基础上进行有效和大量的扩增，大大提高造血干细 胞的体外扩增效率。 如本文所用，术语"含有"或"包括"包括了"包含"、"主要由……构成（制成）" "基 本上由......构成"、和"由......构成"。 细胞因子组合物及培养基 本专利技术人优化了用于离体扩增造血干细胞的细胞因子。根据造血干细胞扩增的不 同阶段，提供了不同的细胞因子组合物，包括细胞因子组合物1和细胞因子组合物2。 所述的细胞因子组合物1包括：干细胞因子（SCF)、flt3_配体（FLT-3L)、血小板 因子（TPO)、中性粒细胞集落刺激因子（G-CSF)、白介素3 (IL3)、白介素6 (IL6)和Sail样蛋 白4B(Sall4B)。上述各细胞因子以适合的比例添加到细胞生长培养基中，可为造血干细胞 提供适合的离体生长环境的培养基，促进造血干细胞的生长和扩增。作为本专利技术的优选方 式，用于配制本专利技术的培养基的各组分的用量如表1所示。 表 1【主权项】1. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于造血干细胞扩增培养的细胞因子组合物，其特征在于，所述的组合物是细胞因子组合物1，包括：

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋永平，
申请(专利权)人：苏州方舟基因药业有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32