用于去除抗A和/或抗B抗体的新型亲和层析介质制造技术

本文所述的实施方案涉及用于从样品中去除抗A和/或抗B抗体的新型层析介质，以及使用所述层析介质的方法。本文所述的介质相对于此前描述的介质具有若干优势，包括酸和碱稳定性。

Novel affinity chromatography medium for the removal of anti A and / or anti B antibodies

Embodiments described herein relate to novel chromatography media for removing A and / or anti B antibodies from samples, and methods of using the chromatography media. The medium described herein has a number of advantages over the previously described medium, including acid and base stability.

【技术实现步骤摘要】
用于去除抗A和/或抗B抗体的新型亲和层析介质相关申请的交叉引用本申请要求2015年9月8日提交的美国临时专利申请No.62/215,401的优先权，其全部内容都以整体援引加入本文。专利技术背景免疫球蛋白富集的人血浆用于治疗许多病征以及用于治疗某些先天性缺陷。通常，通过从具有不同血型的多个供血者汇集血浆而获得人血浆。血型可以分为四种主要的的类型。A血型-在红细胞上仅具有A抗原(以及血浆中具有B抗体)；B血型-在红细胞上仅具有B抗原(以及血浆中具有A抗体)；AB血型-在红细胞上具有A和B抗原(但在血浆中既不具有A抗体也不具有B抗体)；和O血型-在红细胞上既不具有A抗原也不具有B抗原(A和B抗体都在血浆中)。重要的是，具有特定血型抗原如A的红血细胞从来都不会与结合此抗原的抗体如抗A抗原抗体接触，因为与此类抗体接触会导致其红血细胞的凝集和/或溶血，这甚至会导致死亡。因此，具有A血型的受血者仅可接受来自具有A血型或AB血型的供血者的血浆；具有B血型的受血者仅可接受来自具有B血型或AB血型的供血者的血浆；具有AB血型的受血者仅可接受来自具有AB血型的供血者的血浆；而具有O血型的受血者被认为是万能受血者。不同血型的相容性对于安全的输血和器官移植的开发是重要的。然而，在血液衍生的治疗药物的情况中，其中依赖于汇集来自很多人的血浆以获得蛋白组分的恒定均值，此时确保受血者不会接受不相容的血浆将会是特别具有挑战性的。已经开发了很多方法来选择性地从血浆中去除血型抗体，包括经福尔马林处理的热处理红细胞(VoxSang.,1967,12,75-77)、经热处理的具有A和B抗原的大肠杆菌(Escherichiacoli)O86:B7(Transfusion,1972,12,98-102)、红细胞基质粉末、源自免疫吸附剂的红细胞基质抗原(ChemicalSoc.Rev.,1978,7,423-452)、和合成的血型A和B免疫吸附剂(Rev.Fr.Transfus.Immunohematol.1981,24,3,281-287)。已经开发了固相层析免疫吸附剂作为商用层析介质，以用以处理源自产物的血液以及也用于在输血至ABO不相容受血者之前对于供血者的准备。利用合成的免疫吸附剂的一个关键优势在于，它们是合成构建的而不是源自天然来源因而在批次与批次之间会具有更一致的性质。目前，一些具有血型A抗原(A-抗原)配体和/或血型B抗原(B-抗原)配体的商业可用的层析介质包括Glycosorb-ABO装置(GlycorexTransplantationAB)。此种Glycosorb装置用于将器官供者准备为用来移植至具有不相容血型的患者。所述Glycosorb-ABO装置中的血型抗原配体从器官供体的血液中结合并去除血型A抗原抗体(抗-A)和血型B抗原抗体(抗-B)，由此降低器官排斥的风险。另外，PCT公开No.WO2015/001277讨论了结合抗A或抗B抗体的亲和层析基质。专利技术概述本文所述的实施方案涉及新型的层析介质，其用于从样品(例如，血液、血液制品、血浆、血浆衍生物或IVIG)中去除抗A或抗B抗体。相对于此前描述的层析介质，本文所述的层析介质对于去除抗A或抗B抗体具有若干优势，其在于所述介质在酸性和/或碱性条件下在延长的时间段中保持稳定。另外，此种介质可以用包含磷酸、乙酸和苯甲醇的溶液来消毒，而不会损失其去除抗A或抗B抗体的能力。在本文所描述的一些实施方案中，提供了用于从样品中去除抗-A抗体的层析介质，其中所述介质包含其上附着有血型A抗原配体的固体支持物，其中所述配体以至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷附着至所述固体支持物，其中所述层析介质在酸性和碱性条件下都稳定。在特定的实施方案中，所述配体载荷为至少1mg/ml固体支持物或至少1.5mg/ml固体支持物或至少1.65mg/ml固体支持物，并且其中所述层析介质在酸性和碱性条件下都稳定。在另一实施方案中，提供了用于从样品中去除抗-B抗体的层析介质，其中所述介质包含其上附着有血型B抗原配体的固体支持物，其中所述配体以至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷附着至所述固体支持物，其中所述层析介质在酸性和/或碱性条件下都稳定。在特定的实施方案中，所述配体载荷为至少1.0mg/ml固体支持物或至少1.20mg/ml固体支持物并且其中所述层析介质在酸性和碱性条件下都稳定。在另一实施方案中，提供了用于从样品中去除抗-A和抗-B抗体二者的层析介质，其中所述层析介质包含其上附着有血型A抗原配体和血型B抗原配体的固体支持物，每种均为至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷。在本文所描述的各个实施方案中，所述固体支持物包含选自以下组的聚合物：聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯。在特定的实施方案中，所述固体支持物是基于聚乙烯醚的固体支持物。在一些实施方案中，所述固体支持物是珠的形式。在一些实施方案中，所述血型A抗原配体包含以下结构：在一些实施方案中，所述血型B抗原配体包含以下结构：在本文所描述的一些实施方案中，所述层析介质包含血型A抗原配体和/或血型B抗原配体(用还原胺化化学附着至固体支持物)。在本文所描述的其它实施方案中，所述层析介质包含血型A抗原配体和/或血型B抗原配体(用聚合物触角(tentacle)化学附着至固体支持物)在一些实施方案中，所述层析介质包装在装置中，例如层析柱。在层析介质之外，本文所述的实施方案还涉及使用本文所描述的层析介质从样品(例如，血液、血液制品、血浆、血浆衍生物、或IVIG添料)中去除抗A和/或抗B抗体的方法。在一些实施方案中，提供了从样品中去除抗-A抗体或抗-B抗体的方法，其中所述方法包括以下步骤：提供包含起始已知量的抗-A抗体或抗-B抗体的样品；在适宜介质结合抗体的条件下，如果所述样品含有抗-A抗体则将所述样品与含有血型A抗原配体的层析介质接触，或者如果所述样品含有抗-B抗体则将所述样品与含有血型B抗原配体的层析介质接触；回收没有结合至层析介质的样品部分；和测量没有结合至层析介质的样品部分中抗-A抗体或抗-B抗体的量，其中没有结合至层析介质的样品部分中抗-A抗体或抗-B抗体的量相对于样品中抗A或抗B抗体的起始量降低了至少50％。本文所述的实施方案还涉及从含有抗-A和抗-B抗体的样品中去除该二者的方法。在一些实施方案中，本文所述的方法利用顺次使用本文所述的层析介质。换句话说，首先将样品与含有血型A抗原配体的本文所述层析介质接触，随后是含有血型B抗原配体的本文所述层析介质；又或者，首先将样品与含有血型B抗原配体的本文所述层析介质接触，随后是含有血型A抗原配体的本文所述介质。在其它实施方案中，将样品与两种介质的混合物接触，其中所述在单一步骤中去除抗-A和抗-B抗体二者。在另外的实施方案中，本文所述的方法涉及使用这样的层析介质，其包括以至少0.8mg/ml的配体载荷附着至相同固体支持物的血型A抗原和血型B抗原配体。本文还描述了在使用之后将含有本文所述的层析介质的层析柱消毒的方法，其中所述方法包括将所述柱与包含磷酸、乙酸和苯甲醇(PAB)的溶液接触至少三小时，并且其中所述层析介质包含固定至固体支持物上的血型A抗原配体和本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于从样品中去除抗‑A抗体的介质，所述介质包含其上附着有血型A抗原配体的固体支持物，其中所述配体以至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷附着至所述固体支持物，并且其中所述介质在酸性和/或碱性条件下稳定。

【技术特征摘要】
2015.09.08 US 62/215,4011.用于从样品中去除抗-A抗体的介质，所述介质包含其上附着有血型A抗原配体的固体支持物，其中所述配体以至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷附着至所述固体支持物，并且其中所述介质在酸性和/或碱性条件下稳定。2.用于从样品中去除抗-B抗体的介质，所述介质包含其上附着有血型B抗原配体的固体支持物，其中所述配体以至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷附着至所述固体支持物，并且其中所述介质在酸性和/或碱性条件下稳定。3.权利要求1的介质，其中所述配体载荷为至少1mg/ml固体支持物或至少1.5mg/ml固体支持物或至少1.65mg/ml固体支持物。4.权利要求2的介质，其中所述配体载荷为至少1mg/ml固体支持物或至少1.2mg/ml固体支持物。5.用于从样品中去除抗-A和抗-B抗体的介质，所述介质包含：(a)其上附着有血型A抗原配体和血型B抗原配体的固体支持物，每种均为至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷；或者(b)两种固体支持物的混合物，一种包含附着的血型A抗原配体，而另一种包含附着的血型B抗原配体，每种介质都具有至少0.8mg/ml固体支持物的配体载荷，其中所述介质在酸性和/或碱性条件下稳定。6.权利要求1的介质，其中所述固体支持物包含选自以下组的聚合物：聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯。7.权利要求2的介质，其中所述固体支持物包含选自以下组的聚合物：聚乙烯醚、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸酯、聚丙烯酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酰胺和聚碳酸酯。8.权利要求1的介质，其中所述固体支持物是基于聚乙烯醚的珠。9.权利要求2的介质，其中所述固体支持物是基于聚乙烯醚的珠。10.权利要求1的介质，其中所述血型A抗原配体具有以下结构：11.权利要求2的介质，其中所述血型B抗原配体具有以下结构：12.权利要求1的介质，其中所述血型A和/或B抗原配体经还原胺化化学或pAA触角化学附着至固体支持物。13.权利要求2的介质，其中所述血型A和/或B抗原配体经还原胺化化学或pAA触角化学附着至固体支持物。14.权利要求1的介质，其中所述介质包装在装置中。15.权利要求2的介质，其中所述介质包装在装置中。16.权利要求14的介质，其中所述装置是层析柱。17.权利要求15...

【专利技术属性】
技术研发人员：N·比安，CY·孙，M·霍尔斯坦，K·科托尼，M·T·斯通，S·拉哈内，
申请(专利权)人：默克专利股份有限公司，
类型：发明
国别省市：德国,DE