提供了特异地结合CD38的抗体，以及包括融合到致弱干扰素α-2B蛋白质上的这样的抗体结构。抗-CD38-致弱干扰素α-2b融合结构可以用于抑制表达CD38和IFN-α2b受体的癌症细胞的增殖，以及诱导这样的细胞凋亡。抑制癌症细胞增殖和诱导癌症细胞凋亡可以充当治疗潜在癌症的基础。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】抗-CD38抗体和与致弱干扰素α-2B的融合体序列表参考本申请包括电子方式提交的序列表，其作为名称为抗-CD38_抗体_ST25的文本文件，创建于2013年4月29日，大小为462,000字节。该序列表通过援引并入本文。
本公开大体上涉及抗体工程领域。更具体地说，本专利技术涉及特异地结合CD38的抗体，以及包括这样的抗体和致弱干扰素-α配体(attenuatedinterferon-alphaligands)的结构，和使用这些结构的治疗方法。在这些结构中，该抗体指导该配体到表达CD38和该配体的受体的细胞，并且该致弱干扰素-α降低不表达CD38的细胞中的干扰素信号。
技术介绍
贯穿整个说明书，引用了各种公开物，包括专利，公开的申请，技术文章，学术文章，和基因或蛋白质的访问号(geneorproteinaccessionnumbers)。每个这些材料以其全部为任何目的在此通过援引并入本文。CD38是46kDaII类跨膜糖蛋白。它具有20个氨基酸的短N-端胞浆区(N-terminalcytoplasmictail)、单个跨膜螺旋和256个氨基酸的长胞外域。它被表达在许多免疫细胞表面和相当比例的正常骨髓前体细胞上，该免疫细胞包括CD4和CD8阳性T细胞、B细胞、NK细胞、单核细胞、浆细胞(plasmacells)。在有些情况下，淋巴细胞中CD38的表达可能依赖于细胞的分化和激活状态，例如，对CD38表达来说，休眠T和B细胞可呈阴性，而不成熟的和激活的淋巴细胞可明显地呈阳性。已经在非造血器官中检测到CD38mRNA表达，比如胰脏、大脑、脾脏和肝脏(Koguma,T.(1994)Biochim.Biophys.Acta1223:160)。CD38是参与跨膜信号和细胞粘附的多能胞外酶。它还被公知为循环ADP核糖水解酶，因为它能依赖细胞外pH将NAD+和NADP+转化成cADPR、ADPR和NAADP。这些产物诱导细胞内的Ca2+-动员(Ca2+-mobilization)，这会导致酪氨酸磷酸化和细胞激活。CD38也是能与配体CD31相互作用的受体。通过CD31的受体激活导致细胞内事件，包括Ca2+-动员、细胞激活、增殖、分化和迁移。在T-和B-系急性淋巴细胞性白血病(T-andB-lineageacutelymphoblasticleukemias)、一些急性髓细胞性白血病(acutemyelocyticleukemias)、滤泡性中心细胞性淋巴瘤(follicularcentercelllymphomas)和T淋巴细胞性淋巴瘤的大多数情况下，CD38在多发性骨髓瘤细胞上被高水平表达。CD38还被表达在B-系慢性淋巴细胞性白血病(B-CLL)细胞上。在一些情况下，具有CD38+克隆的B-CLL病人的特点是不顺利的较高阶段疾病的临床病程，对化学治疗反应性差以及生存时间短。已经提议使用针对CD38的抗体治疗CD38-表达癌症和恶性血液病。因此，提供具有想要的制造、稳定性和免疫原性属性的供选择的针对CD38的抗体可能是有利的。已经描述了许多肽和多肽类配体通过与细胞表面的受体相互作用发挥其功能，由此刺激、抑制或另外调节生物应答，通常涉及具有所述受体的细胞内的信号传导通路。这样的配体的实施例包括肽和多肽类激素、细胞因子、趋化因子、生长因子和促细胞凋亡因子。由于这样的配体的生物活性，许多具有作为治疗剂的潜在用途。几个肽或多肽类配体已经被管理机构批准作为治疗产品，其包括，例如，人生长激素、胰岛素、干扰素(IFN)-α2b、IFN-α2a、IFNβ、红细胞生成素、G-CSF和GM-CSF。虽然这些和其他配体已经证明在治疗应用中有潜能，但当向人类病人给予时它们也显示出毒性。毒性的一个原因是大多数这些配体引发各种细胞上的受体，包括除介导想要的治疗效果的那些细胞以外的细胞。配体的这样的“脱靶(offtarget)”活性的后果是许多配体当前不适合用作治疗试剂，因为该配体不能以足够高的剂量给药以在介导治疗效果的靶细胞上产生最大或最佳治疗效果。例如，从1980年代中期已经知道干扰素，尤其是，IFN-α能够增加细胞凋亡并且减少某些癌细胞的增殖。已经被FDA批准的IFN-α用于治疗几种癌症，包括黑色素瘤、肾细胞癌、B细胞淋巴瘤、多发性骨髓瘤、慢性骨髓性白血病(chronicmyelogenousleukemia)(CML)和毛细胞白血病。IFN-α对肿瘤细胞的直接效果是通过IFN-α直接结合这些细胞上的I类IFN受体并且刺激细胞凋亡、最终分化或降低的增殖所介导。IFN-α对非肿瘤细胞的进一步间接效果是刺激免疫系统，这可以通过引起免疫系统抵制肿瘤产生额外的抗癌效果。这些生物活性由癌细胞表面上的I类干扰素受体介导，当被刺激时，该受体启动导致增殖减少和/或诱导最终分化或细胞凋亡的各种信号传导通路。但是该I类干扰素受体也出现在大多数非癌细胞上。由IFN-α在非癌细胞上激活该受体引起大量促炎性细胞因子和趋化因子的表达，导致毒性和不良反应。这样的毒性可引起严重的类似感冒的症状，这阻止了将IFN-α以对癌细胞发挥最大抗增殖和促凋亡活性的水平向个体配量。当IFN-α2b被用于治疗多发性骨髓瘤时，其效用至少部分在于它结合到骨髓瘤细胞上的I类干扰素受体上，其反过来引发细胞凋亡和/或增殖降低，因此限制疾病进程。不幸的是，但是这个IFN还结合到体内的健康细胞上，引发各种其它细胞反应，有些反应是有害的。Ozzello的公开物(BreastCancerResearchandTreatment25:265-76,1993)描述了将人IFN-α化学偶联到肿瘤-靶向抗体，由此将IFN-α的直接抑制活性定位到肿瘤，作为降低IFN-α肿瘤生长速率的方法，并且证明了这样的偶联物在人类癌症的异种移植模型中具有抗肿瘤活性。观察到的抗癌活性的机理归因于IFN-α对肿瘤细胞的直接效果，因为实验中使用的人IFN-α没有明显地与鼠I类IFN受体相互作用，这会导致间接抗肿瘤效果。因为没有将人IFN-α结合到鼠细胞上，没有评估抗体-IFN-α偶联物相对于游离IFN-α的毒性。抗体和IFN-α也可以以融合蛋白的形式连接到一起。例如，WO01/97844描述了人IFN-α直接融合到对肿瘤抗原CD20特异的IgG的重链C-端上。通常，IFN可被靶向癌细胞。虽然这种方法可导致IFN针对癌细胞活性的增加，但是它没有完全解决IFN对健康细胞的不想要的活性问题。将IFN-α融合到IgG的重链C端上可以延长IFN-α的半衰期，导致不想要的不利事件。因此需要减小基于配体的药物的脱靶活性，同时保持这样的配体的“靶向(on-target)”治疗效果。
技术实现思路
本公开的特载新的抗-CD38抗体和包括抗-CD38抗体和致弱IFN-α的结构。包括它们重链和/轻链可变区的一个或多个突变的该抗体保持特异结合CD38的能力，包括在细胞表面上表达的CD38。该抗体可以融合到，例如，致弱形式的干扰素α以形成抗-CD38抗体-致弱干扰素融合结构。在一些方面，特异地结合CD38的分离的抗体包括包括氨基酸序列SEQIDNO:559的重链可变区，和包括氨基酸序列SEQIDNO:664的轻链可变区。在一些方面，特异地结合CD38的分离本文档来自技高网...
【技术保护点】
特异地结合CD38的分离的抗体，其包括包括氨基酸序列SEQ ID NO:659的重链可变区和包括氨基酸序列SEQ ID NO:664的轻链可变区，但是重链可变区氨基酸序列排除氨基酸序列SEQ ID NO:13，并且轻链可变区氨基酸序列排除氨基酸序列SEQ ID NO:14。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种抗-CD38抗体-致弱人干扰素α-2b融合蛋白，其包括特异地结合CD38并且包括重链可变区氨基酸序列SEQIDNO:156和轻链可变区氨基酸序列SEQIDNO:185的抗体，所述抗体融合到致弱人干扰素α-2b上，所述致弱人干扰素α-2b包括在对应于氨基酸序列SEQIDNO:648的位置145处的丙氨酸被甘氨酸或丙氨酸被天冬氨酸取代。2.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述抗体包括人IgG1重链恒定区。3.根据权利要求1所述的蛋白，其中所述抗体包括人IgG4重链恒定区。4.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述人IgG4重链恒定区包括根据EU编号体系在位置228处的脯氨酸。5.根据权利要求3所述的蛋白，其中所述人IgG4重链恒定区包括根据EU编号体系在所述恒定区的位置252处的酪氨酸、位置254处的苏氨酸和位置256处的谷氨酸。6.根据权利要求4所述的蛋白，其中所述人IgG4重链恒定区包括根据EU编号体系在所述恒定区的位置252处的酪氨酸、位置254处的苏氨酸和位置256处的谷氨酸。7.根据权利要求1到6任一项所述的蛋白，其中所述致弱人干扰素α-2b包括SEQIDNO:649的氨基酸序列。8.根据权利要求1到6任一项所述的蛋白，其中所述致弱人干扰素α-2b包括SEQIDNO:651的氨基酸序列。9.根据权利要求1到6任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：亚当·克拉克，马修·波拉德，安东尼·杰拉德·道尔，科莱特·贝伦斯，津田·山岸，小大卫·S·威尔逊，莎拉·L·波格，哲野·田浦，
申请(专利权)人：泰华制药澳大利亚公司，
类型：发明
国别省市：澳大利亚;AU
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