抗α/β干扰素受体的抗体制造技术

本发明专利技术提供了抗α／β干扰素受体上配体结合部分的抗体，所述抗体能够选择性减弱各种Ⅰ型干扰素的活性。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗α/β干扰素受体上配体结合部分的抗体，它们能选择性地减弱多种Ⅰ型干扰素的活性。欧洲专利(EP)出版物No.588,177描述了一种分子量约40,000的可溶性IFN-α受体，是通过与125Ⅰ-IFN-α2的交叉连接和与抗IFN-α单克隆抗体的免疫沉淀来鉴定的。当从血清中获取这类受体时，其分子量为50K。该专利还对从均质状态尿液中制取的有着不同于任何已知蛋白序列的上述40,000 IFN-α结合蛋白(本文下面称为“IFNAB-BP”或“IFNAB-BPⅡ”)进行了说明。IFNAB-BP与多种IFN-α亚型以及一种IFN-β结合并封闭其活性。EP出版物No.676,413描述了编码IFNAB-BP前体的两种cDNA分子的克隆和测序，这两种DNA分子可能来自同一基因通过不同拼接而产生。该专利还描述了在哺乳动物或其它宿主细胞中生产被称为IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ的两种重组蛋白质。该专利还揭示了可用于封闭IFN受体、及用于IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ的免疫分析和免疫沉淀的抗IFNAB-BP多克隆和单克隆抗体。本专利技术说明的是两组抗IFNAB-BPⅡ的中和抗体的制备，这些中和抗体能结合人细胞上的Ⅰ型干扰素的受体。其中一组抗体能够封闭IFN-α各亚型和IFN-β的活性。而另一组抗体能够选择性地封闭人细胞中α-干扰素各种亚型的活性但不影响β-干扰素的活性。这样，一组上述抗体能够抑制IFN-α的不良作用而几乎不影响IFN-β的活性。
技术介绍
Ⅰ型干扰素(IFNs)(IFN-α、IFN-β和ω)构成一族结构上相关的细胞因子，通常以其提供抗病毒感染的能力而定义为干扰素。有关Ⅰ型IFN的许多其它生物活性已经有所报道，其中包括抑制细胞增殖、诱导Ⅰ型MHC抗原和其它几种免疫调节活性(1)。IFN-α和IFN-β可以用于治疗数种病毒疾病，包括丙型肝炎(2,3)和病毒性疣，以及某些恶性肿瘤例如毛细胞白血病(6)、慢性髓性白血病(7)和卡波济(Kaposis’s)肉瘤(8)。在各种患有诸如系统性红斑狼疮(9)等自身免疫疾病的病人和AIDS(10)病人的血清中发现有IFN-α。IFN-α与青少年性糖尿病的发展有关(11)。而且，IFN-α治疗在某些病例中导致了不良副作用，包括发热和神经紊乱等(12)。所以，在某些病理状态下，中和掉IFN-α的活性对病人也许是有利的。和其它细胞因子一样，IFN-α通过结合细胞表面受体发挥其生物活性，该受体对IFN-α所有亚型和IFN-β具有特异性(13)。从Daudi细胞鉴定出并克隆得到了人IFN-α受体(IFNAR)(14)。克隆得到的这种受体具有一个单一的跨膜区，一个胞外区和一个胞内区。当在鼠细胞中表达时，该受体对人IFN-αB具有应答反应，但对其它种类IFN-α和IFN-β没有明显的应答反应，这表明在对IFN-β和IFN-α各亚型的应答反应中，还涉及其它组分。其它一些研究显示，还有其它组分或受体亚基参与与IFN-α和IFN-β的结合(15-17)。然而，据报道，上述受体(14)涉及到与所有IFN-α和IFN-β种类的结合(18)。的确，最近鉴定和克隆了第二受体组分，命名为IFN-α/β受体(EP出版物No.676,413和参考文献19)。我们证实，胞外区序列与IFNAB-BPⅠ相同的IFN-α/β受体是Ⅰ型干扰素受体的主要配体结合组分；而且，干扰素-α/β受体和IFNAR在配体结合中进行合作，并在细胞表面与Ⅰ型干扰素形成三元复合物(20)。针对IFNAR并能够非选择性地封闭Ⅰ型干扰素的许多单克隆抗体已有所报道(21)。针对尚未鉴定受体组分的另一些单克隆抗体也有描述，这种抗体非选择性地封闭Ⅰ型干扰素的活性。专利技术概述本专利技术提供了抗IFN-α/β受体的单克隆抗体，此受体是IFN-α和IFN-β的通用受体。这些抗体可与受体的多种形式结合，而受体可以表达在人细胞上或者是可溶性的IFNAF-BPⅠ和IFNAF-BPⅠ。本专利技术开发了两类中和性单克隆抗体。一类用于封闭IFN-α和IFN-β的抗病毒活性时表现出很高的效价。另一类意外地发现只对IFN-α的抗病毒活性表现出很高的封闭效价，而对封闭IFN-β的活性只有很低的效价。这样，令人惊奇的第二类单克隆抗体也许可在一定的浓度范围内用于选择性地封闭IFN-α的活性而不影响IFN-β的活性。本专利技术还提供抗人细胞表达的IFN-α/β受体(IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ)的人源化单克隆抗体，人源化单克隆抗体是鼠-人杂交抗体分子，其中可变区来自小鼠抗体而恒定区来自人抗体。本专利技术还提供编码抗IFN-α/β受体(IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ)的单克隆抗体和人源化单克隆抗体的DNA分子。本专利技术还提供含有上述DNA分子的可复制表达载体，用该载体转化的宿主细胞和由该转化宿主细胞产生的蛋白质。“DNA分子”一词包括基因组DNA、cDNA、人工合成DNA和它们的组合物。本专利技术还涉及这样的DNA分子，它们可以在严谨条件下与上述DNA分子杂交，并编码具有与抗IFN-α/β受体(即IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ)的单克隆抗体和人源化单克隆抗体相同生物活性的蛋白质。本专利技术还提供能够产生抗IFN-α/β受体(即IFNAB-BPⅠ和IFNAB-BPⅡ)的功能性单克隆抗体和人源化单克隆抗体的宿主细胞的制备方法。本专利技术的单克隆抗体抑制人细胞内α干扰素的生物活性但不影响人β干扰素的生物活性。采用人WISH细胞和水泡性口炎病毒进行细胞病变抑制试验定量评价抗体的抑制作用来测定这种生物活性。专利技术详细说明根据以色列(Israeli)专利申请No.106591，通过两步色谱从正常尿液中分离出分子量40,000的IFN-α/β结合蛋白(IFNAB-BP)。将粗制尿蛋白上样于IFN-α2连接的琼脂糖色谱柱上。洗去柱上的无关蛋白，然后在低pH下洗脱结合蛋白。用体积排斥性HPLC分析洗脱的蛋白质，得到几个蛋白质峰，一个蛋白峰的特性是能特异性地与125Ⅰ-IFN-α2反应并封闭IFN-α和IFN-β的抗病毒活性。对该蛋白进一步通过N末端微测序分析进行鉴定。将得到的序列与已知的IFNAR受体序列(14)比较，发现与之不同。而且，用FastA程序(23)将其与Swissport和Genebank数据库比较发现，它与任何已知蛋白质都不同，而且不是由任何已知的DNA序列所编码。用尿IFNAB-BP的均一制品作为制备抗体的免疫原。“抗体”一词意味包括多克隆抗体、单克隆抗体(Mab)、嵌合抗体、抗独特型抗体(抗-Ⅰd抗体)和能以可溶性或结合形式标记的抗体，还包括采用各种已知技术(例如酶切、肽合成或重组技术)产生的它们的活性片段。多克隆抗体是来自抗原免疫动物血清的异质性抗体分子群。单克隆抗体是含有基本上均一的抗原特异性抗体分子群，该分子群含有基本上相同的表位结合位点。Mab可由该领域技术人员已知的方法来获得。例如，可参见Kohler和Milstein,Nature 256:495-497(1975)；美国专利No.4,376,110；Ausubel等编辑的CurrentProtocols in Molecular Biology,Greene Publishing本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体，所述抗体与ＩＦＮ－α／β受体或其ＩＦＮＡＢ－ＢＰⅠ和ＩＦＮＡＢ－ＢＰⅡ的可溶形式结合，而且所述抗体封闭ＩＦＮ－α的生物活性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：D诺维克，M鲁宾斯坦，
申请(专利权)人：依达研究发展有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]