本发明专利技术提供了能够调节／介导ＲＩＰ功能的蛋白质，其制备方法和用途。（*该技术在2018年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术所涉及的领域属于TNF/NGF受体超家族的受体及其生物功能的调控。TNF/NGF受体超家族包括的受体例如p55和p75肿瘤坏死因子受体(TNF-Rs，以下称p55-R和p75-R)，FAS配体的受体(又称FAS/APO1或FAS-R，以下称FAS-R)及其他受体。具体地说，本专利技术涉及新的蛋白质，它们能与其它蛋白质结合，这些其它蛋白质本身直接或间接地与TNF/NGF受体家族的成员或其它胞内调节蛋白结合，更具体地说，本专利技术涉及在本文中称为RAP(即RIP结合蛋白)的一种蛋白质，它与RIP(即‘受体相互作用蛋白’)结合，RIP再与自身和与MORT-1、FAS-R、p55-R、TRADD和Traf2结合。所以，总的说来，本专利技术涉及的新蛋白质能够调节或介导RIP的功能，所以也能够直接或间接地调节或介导与RIP直接或间接结合的其它蛋白质的功能。具体地说，本专利技术涉及RAP及其制备与用途，还涉及RAP的各种同种型、同系物、片段和衍生物，以及它们的制备和用途。相关技术背景肿瘤坏死因子(TNF-α)和淋巴毒素(TNF-β)(后文中，TNF指TNF-α和TNF-β二者)是主要由单核吞噬细胞形成的多功能致炎细胞因子，具有对细胞的多种效应(Wallach，D.(1986)Interferon 7(Ion Gresser编辑)，pp.83-122，Academic Press，London；和Beutler和Cerami(1987))。TNF-α和TNF-β通过结合特定的细胞表面受体来引发它们的作用。有些作用对生物体可能是有利的例如，它们能破坏肿瘤细胞或病毒感染细胞，并能促进粒细胞的抗菌活性。以这种方式，TNF参与生物体抵抗肿瘤和感染因子的防御功能，并有助于创伤的恢复。所以，TNF可用作抗肿瘤药，在此应用中它与肿瘤细胞表面受体结合，由此引发的作用导致肿瘤细胞死亡。TNF还可以用作抗感染药。但是，TNF-α和TNF-β又都有有害作用。有证据表明，在数种疾病中，TNF-α的过量产生可能起着主要致病作用。例如，已知TNF-α对脉管系统的作用是败血性休克症的主要病因(Tracy等，1986)。在有些疾病中，TNF抑制脂肪细胞的活性和引起厌食，而导致体重过份减轻(恶病质)，所以TNF-α又称为恶病质素。据说，它还是类风湿性疾病中组织损伤的介质(Beutler和Cerami，1987)，并且是移植物抗-宿主反应所见损伤的主要介质(Piquet等，1987)。此外，已知TNF还涉及炎症过程和其它许多疾病。分别表达的两种不同受体-p55和P75 TNF-Rs-均特异性结合TNF-α和TNF-β，引发和/或介导了TNF的上述生物作用。这两种受体具有结构上不同的胞内域，这表明它们的信号传送是不同的(参见Hohmann等，1989；Engelmann等，1990；Brockhaus等，1990；Leotscher等，1990；Schall等，1990；Nophar等，1990；Smith等，1990；和Heller等，1990)。然而，参与p55和P75 TNF-Rs胞内信号传送的细胞机制-例如各种蛋白质及可能的其它因子-还有待阐明。正是这种胞内的信号传送(通常发生在与配体结合之后，亦即TNF(α或β)与受体结合之后)造成了一连串反应的同时发生，最终导致了细胞对TNF的应答反应。关于上述TNF在多数迄今研究过的细胞中的杀细胞作用，主要是由p55TNF-R引发的。抗p55 TNF-R胞外结构域(配体结合域)的抗体本身能够引发杀细胞作用(参见EP412486)，这种作用与抗体交联受体的效应有关，被认为是产生胞内信号传送过程的第一步。而且，诱变研究(Brakebusch等，1992；Tartaglia等，1993)显示，p55 TNF-R的生物功能依赖于其胞内结构域的完整性，所以有人提出p55 TNF-R的两个或多个胞内结构域结合的结果引发了导致TNF杀细胞作用的胞内信号发送。而且，TNF(α和β)以均三聚体的形式存在，因此被认为凭借其与受体分子结合和交联的能力即引起受体集聚的能力通过p55 TNF-R诱导了胞内的信号传送。TNF/NGF受体超家族的另一名成员是FAS受体(FAS-R)，又称FAS抗原，是一种在多种组织内表达的细胞表面受体，并与包括TNF-R和NGF-R在内的许多细胞表面受体具有同源性。FAS-R介导细胞的程序性死亡(Itoh等，1991)，而且似乎是以自身反应性T细胞的阴性选择剂而起作用，即，在T细胞成熟过程中，FAS-R介导识别自身抗原的T细胞程序性死亡。还发现，FAS-R基因(lpr)内的突变造成小鼠的淋巴繁殖失调，这类似于人自身免疫病-系统性红斑狼疮(SLE)(Watanable-Fukunaga等，1992)。FAS-R的配体似乎是一种细胞表面结合分子，杀伤T细胞(或细胞毒T淋巴细胞-CTL)是其携带者之一，所以，当这种CTL与带有FAS-R的细胞接触时，它们能够诱导携带FAS-R的细胞程序性死亡。而且，已经制备出针对FAS-R的单克隆抗体，这些单克隆抗体能够诱导携带FAS-R的细胞-包括编码人FAS-R的cDNA转化的小鼠细胞-程序性死亡(Itoh等，1991)。本专利技术人采用了许多方法(例如，参见欧洲专利申请Ep186833，Ep308378，Ep398327，Ep412486)来调节TNF的有害作用，即采用抗TNF抗体或采用可溶性TNF受体(主要是此受体的可溶性胞外结构域)同TNF竞争与细胞表面的TNF-R的结合，由此抑制TNF与其受体的结合。而且，因为TNF结合其受体是TNF诱导细胞效应所必需的，所以本专利技术人尝试了通过调节TNF-R活性来调节TNF效应的方法(参见EP568925)。简而言之，EP568925涉及调节TNF-R中信号传导和/或切断的方法，借此，肽或其它分子能够与受体本身反应或与同受体反应的效应蛋白反应，由此调节TNF-R的正常功能。EP568925描述了各种突变p55 TNF-R的构建和特征，这些p55 TNF-R在胞外、跨膜和胞内结构域中有突变。由此鉴定到，p55 TNF-R上述结构域内的某些区域对受体的功能是十分重要的，即配体(TNF)的结合以及随后的信号传导和胞内信号传送最终导致TNF对细胞的效应。而且，该专利还描述了一些分离和鉴定能够与TNF上述结构域内不同区域结合的蛋白质、肽或其它因子的方法，这些蛋白质、肽和其它因子可能参与调节TNF-R的活性。该专利中还提出了一些方法，用于分离和克隆编码上述蛋白和肽的DNA序列；用于构建产生这些蛋白和肽的表达载体；和用于制备与TNF-R反应或与上述结合TNF-R不同区域的蛋白质或肽反应的抗体及其片段。但是，EP568925没有具体说明与TNF-R(例如p55 TNF-R)胞内结构域结合的蛋白质和肽，也没有描述用于分离和鉴定与TNF-R胞内结构域结合的蛋白质或肽的酵母双杂交法。而且，EP568925没有公开能够结合FAS-R胞内结构域的蛋白质或肽。虽然已知肿瘤坏死因子(TNF)受体和结构上有关的受体FAS-R在受白细胞产生的配体刺激后，在细胞内引发破坏性活动导致细胞自身消亡，但对这一引发过程的机制仍然知之甚少。诱变研究显示FAS-R和p本文档来自技高网...
【技术保护点】
编码ＲＩＰ结合蛋白ＲＡＰ、其同种型、片段或同系物的ＤＮＡ序列，所述的ＲＡＰ、其同种型、片段或同系物能够结合ＲＩＰ并调节或介导ＲＩＰ的胞内活性。
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：D沃勒克，A科瓦连科，
申请(专利权)人：依达研究发展有限公司，
类型：发明
国别省市：IL[以色列]
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