一种发酵乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种发酵乳杆菌及其应用。其保藏编号：GDMCC No.60112。本发明专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)DJ8A具有较强的耐酸和耐胆盐能力，对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有明显抑菌效果，因此能用于制备抗菌药物，具有广阔的市场前景。

Lactobacillus fermented and application thereof

The invention discloses a Lactobacillus fermented and application thereof. The accession number: GDMCC No.60112. The invention of l.fermentum (Lactobacillus fermentum) DJ8A has strong tolerance to acid and bile salt, the effect on Escherichia coli and Staphylococcus aureus had obvious bacteriostasis, so it can be used for the preparation of antibacterial drugs, and has broad market prospects.

【技术实现步骤摘要】
一种发酵乳杆菌及其应用
本专利技术属于微生物领域，具体涉及一种发酵乳杆菌及其应用。专利技术背景饲料中添加抗生素能够抵抗疾病，促进动物的生长，加快集约化畜牧业的发展。但是随着人们对绿色、安全和环保理念的不断加强和对健康程度的不断重视，抗生素添加剂在给人们带来巨大经济利益的同时其负面效应也逐渐凸显，最典型的特征就是抗生素引起的耐药性、内源性感染、二重感染以及药物残留，这些将对养殖业、饲料工业和动物带来严重威胁，进而通过食物链危及人类健康。因此，限制乃至禁止饲料行业和养殖业使用抗生素的呼声越来越高，研究和开发新的抗生素替代品刻不容缓。近年来，益生菌因其安全、无毒、无残留、不诱发耐药性且对动物生长具有显著作用而被作为抗生素替代品的首要选择。乳酸杆菌是益生菌中的主要菌种，它是动物消化道栖生微生物，在防治胃肠道感染、调节免疫功能和调节肠道的微生物菌群平衡中具有较好作用，是一种很有前途的益生素生产菌种。目前，乳酸菌类产品的开发利用已成为我国饲料行业发展的一个新趋势，但也存在一些亟待解决的问题。如益生效果不佳、产品质量不稳定、活菌数量不够、抗逆性差等。因此，筛选益生性能好、耐受能力强、繁殖速度快、质量稳定的乳酸杆菌类产品，对提高产品的市场竞争力以及促进畜牧业的发展都非常有意义。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种具有较强的耐酸和耐胆盐能力，对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有明显抑菌效果的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A。本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A，其于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：中国广州市先烈中路一百号省微生物所实验楼五楼，邮编：510070，保藏编号：GDMCCNo.60112。本专利技术的第二个目的是提供发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A在制备抗菌药物中的应用。所述的抗菌药物是抗金黄色葡萄球菌或大肠杆菌的药物。本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A具有较强的耐酸和耐胆盐能力，对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌均有明显抑菌效果，因此能用于制备抗菌药物，具有广阔的市场前景。本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A，其于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：中国广州市先烈中路一百号省微生物所实验楼五楼，邮编：510070，保藏编号：GDMCCNo.60112。附图说明：图1为本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A在MRS培养基上培养的菌落形态特征。图2为本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A显微形态特征。图3为本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A的发酵上清液对大肠杆菌的抑菌能力，1：发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A的发酵上清液；2：菌株DJ9B的发酵上清液；②：pH4.45MRS空白培养基；③：pH6.60MRS空白培养基。图4为本专利技术的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A的发酵上清液对金黄色葡萄球菌的抑菌能力，1：发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A的发酵上清液；2：菌株DJ9B的发酵上清液；②：pH4.45MRS空白培养基；③：pH6.60MRS空白培养基。具体实施方式：以下实施例是对本专利技术的进一步说明，而不是对本专利技术的限制，根据本专利技术的实质对本专利技术进行的简单改进都属于本专利技术要求保护的范围。实施例1：菌株的分离纯化购买广州先烈中路菜市场所售发酵风味食品(酸菜、酸豆角、梅菜)，加适当的生理盐水进行无菌研磨，用生理盐水将研磨液稀释至合适浓度，取3个适宜稀释度的菌液涂布CaCO3-MRS(蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉4g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，碳酸钙20g，吐温-801.08g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，三级水定容至1L，调pH至7.2，灭菌备用)平板，37℃厌氧培养48h。挑取溶钙圈较大的菌落在MRS(配方如上，无碳酸钙)平板上划线分离，反复纯化。将纯化后的菌落进行革兰氏染色、镜检及H2O2接触酶试验，挑出无芽孢、接触酶阴性的革兰氏阳性菌株，置于10％的甘油管中，-80℃保存备用。本试验共分离到81株溶钙圈较大、接触酶阴性、无芽孢的革兰氏阳性菌株。用浓度为6mol/L的盐酸调节MRS液体培养基(蛋白胨10g，牛肉膏10g，酵母粉4g，磷酸氢二钾2g，柠檬酸三铵2g，乙酸钠5g，葡萄糖20g，吐温-801.08g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，三级水定容至1L，调pH至7.2，灭菌备用)pH至4.0、3.0、2.5。将初筛获得的乳酸菌进行活化并培养至对数生长期后，按体积比2％的接种量分别接种至pH为4.0、3.0、2.5的MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h，以未接种的培养基为对照，测各组菌液的OD600nm值，选取耐酸性能较好的乳酸菌进行后续实验。本试验发现48株乳酸菌可在pH4.0的MRS液体培养基中生长，10株乳酸菌能够在pH3.0环境下生长，其中菌株DJ8A和DJ10C在pH3.0环境下生长良好。上述试验纯化所得的菌株均保存于广东省微生物菌种保藏中心。实施例2：菌株耐酸、耐胆盐试验选取可在pH3.0生长的菌株，重新培养至对数生长期后，按体积比2％接种量接种至含有0.1％、0.2％、0.3％胆盐的MRS液体培养基中，37℃厌氧培养24h，以相应胆盐含量的未接种培养基为对照，测各组菌液的OD600nm值，选取耐胆盐性能较好的乳酸菌进行后续实验。本试验发现，实施例1中所提到的10株可在pH3.0环境下生长的菌株均能在0.1％的牛胆盐中生长，但均不能在0.2％及0.3％牛胆盐中生长，其中菌株DJ8A在0.1％的牛胆盐中生长良好。实施例3菌种鉴定(1)形态学鉴定：将筛选获得的菌株涂布分离于MRS平板上，37℃厌氧培养24h后观察其菌落特征；取单菌落涂片，革兰氏染色，显微镜下观察其个体形态。菌株DJ8A在MRS平板上37℃培养48h后，菌落呈圆形、扁平、白色，表面光滑、湿润，边缘整齐，直径3-4mm(图1)；菌株DJ8A的显微形态特征为短杆状，单个、成对或成长链，不产芽孢、革兰氏阳性(图2)。(2)16SrRNA分子鉴定：采用CTAB法提取待鉴定菌株DJ8A的基因组DNA，采用细菌16SrRNA通用引物进行PCR扩增。将PCR产物送到上海美吉生物医药科技有限公司测序。将测序结果提交GenBank进行Blast比对分析。菌株DJ8A的16SrRNA基因序列经测序(其序列如SEQIDNO.1所示)、分析，比对，结果与已报道的发酵乳杆菌LactobacillusfermentumCECT562(T)的16SrRNA基因序列同源性达到99.65％，鉴定其为发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A，其于2016年11月15日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，地址：中国广州市先烈中路本文档来自技高网...

【技术保护点】
发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)DJ8A，其保藏编号为GDMCC No.60112。

【技术特征摘要】
1.发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)DJ8A，其保藏编号为GDMCCNo.60112。2.权利要求1所述的发酵乳杆菌(Lactob...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱红惠，李安章，林龙镇，邓名荣，陈美标，谢小林，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，广东博沃特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44