一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及耐药菌株技术领域，尤其涉及一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用。本发明专利技术的一种鼠伤寒沙门菌，同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点，所述四个喹诺酮类药物耐药突变位点分别为：gyrA基因编码产物的第83位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；gyrA基因编码产物的第87位的天冬氨酸突变为甘氨酸；parC基因编码产物的第80位丝氨酸突变为精氨酸；parE基因编码产物的第458位丝氨酸突变为脯氨酸。这些突变位点导致沙门菌菌株对喹诺酮类药物表现为高水平耐药。鉴于此，沙门菌Sal17241可做为筛选新型抗菌药物的模型材料，具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。具有良好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用


[0001]本专利技术涉及耐药菌株
，尤其涉及一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用。

技术介绍

[0002]沙门菌(Salmonella spp)是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病病原菌，可引起人和动物的伤寒、副伤寒、胃肠炎和败血症等许多严重疾病，使全球遭受巨大的经济损失。目前，全世界已发现约2610种血清型。其中，鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium)是存在于畜禽及食品中的优势血清型，也是引起人类感染的主要血清型。
[0003]喹诺酮类药物，尤其是氟喹诺酮类药物，是治疗多重耐药沙门菌引起的可能危及生命的感染最后可选择的一类重要药物。随着这类药物在临床及生产上的广泛应用，细菌对这类药物的耐药问题日益严重。研究表明沙门菌对喹诺酮类药物的耐药性逐年上升，而鼠伤寒沙门菌耐药率普遍高于其他沙门菌。
[0004]沙门菌对喹诺酮类药物产生耐药性最主要的机制是喹诺酮药物作用靶位点DNA螺旋酶(编码基因：gyrA和gyrB)和拓扑异构酶Ⅳ(编码基因：parC和parE)发生基因突变，使酶发生结构改变，从而影响与喹诺酮药物的结合。gyrA、gyrB、parC和parE又称喹诺酮耐药决定区(quinolone resistance
‑
determining regions，QRDR)。另外，质粒介导的喹诺酮类药物耐药机制(plasmid
‑
mediated quinolone resistance，PMQR)，包括QNR蛋白(编码基因：qnrA、qnrB、qnrC、qnrD、qnrS、qnrVC)、外排泵转运蛋白(编码基因：qepA和oqxAB)，以及乙酰转移酶(编码基因：aac(6
’
)
‑
Ib
‑
cr)也是导致细菌对喹诺酮类药物敏感性下降的原因。
[0005]沙门菌对喹诺酮类药物的耐药程度通常与突变位点位置和数量有关。单一位点突变可引起低水平耐药，若2个或多个突变同时发生，则会导致高水平耐药菌株的产生。目前，已有关于沙门菌QRDR突变菌株的报道中，多以单一位点突变为主，多个突变同时发生而导致高水平耐药菌株的比较少见。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点的鼠伤寒沙门菌及其应用，本专利技术的鼠伤寒沙门菌可作为筛选功能微生物/新型抗菌药物的模型材料，具有良好的应用前景。
[0007]为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：提供一种鼠伤寒沙门菌，所述鼠伤寒沙门菌同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点，所述四个喹诺酮类药物耐药突变位点分别为：
[0008]gyrA基因编码产物的第83位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；
[0009]gyrA基因编码产物的第87位的天冬氨酸突变为甘氨酸；
[0010]parC基因编码产物的第80位丝氨酸突变为精氨酸；
[0011]parE基因编码产物的第458位丝氨酸突变为脯氨酸。
[0012]作为本专利技术所述鼠伤寒沙门菌的优选实施方式，所述gyrA基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:2373710..2376422，所述parC基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:3336954..3339227，所述parE基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:3343969..3345861。
[0013]作为本专利技术所述鼠伤寒沙门菌的优选实施方式，所述鼠伤寒沙门菌是鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium)Sal17241，其分类命名为鼠伤寒沙门菌(Salmonella enterica subsp.enterica serovar Typhimurium)，已于2020年9月30日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，保藏编号：GDMCC No：61226。
[0014]本专利技术发现一株同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点gyrA
S83F
、gyrA
D87G
、parC
S80R
和parE
S458P
的鼠伤寒沙门菌，该菌株的gyrA基因编码产物发生双突变：Ser83
→
Phe(丝氨酸突变为苯丙氨酸，简写为S83F)、Asp87
→
Gly(天冬氨酸突变为甘氨酸，简写为D87G)，同时parC基因编码产物发生单位点突变(Ser80
→
Arg)(丝氨酸突变为精氨酸，简写为S80R)，以及parE基因编码产物发生单位点突变(Ser458
→
Pro)(丝氨酸突变为脯氨酸，简写为S458P)。这是首次发现四个喹诺酮类药物耐药突变位点gyrA
S83F
、gyrA
D87G
、parC
S80R
和parE
S458P
同时存在于一株鼠伤寒沙门菌菌株中，该菌株在国内外均未见报道。同时，该菌株不具有任何质粒介导的喹诺酮类药物耐药基因。因此，这些突变位点导致该菌株对喹诺酮类药物表现为高水平耐药，萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙星对沙门菌Sal17241菌株最小抑菌浓度分别为8192μg/mL、32μg/mL、16μg/mL、8μg/mL。
[0015]本专利技术的沙门菌Sal17241，为革兰氏阴性、短杆菌，API 20E鉴定为沙门菌，符合率为89.4％。其生化特征如下：精氨酸双水解酶、赖氨酸脱羧酶、鸟氨酸脱羧酶阳性、分解柠檬酸盐、产生硫化氢，发酵葡萄糖、甘露醇、山梨醇、鼠李糖、密二糖、阿拉伯糖，尿素酶、苯丙氨酸脱氨酶、氧化酶、ONPG试验、吲哚试验、VP试验均为阴性，不能液化明胶，不发酵肌醇、蔗糖、苦杏仁苷，具沙门菌典型生理生化特征。血清抗原式鉴定为1,4,5,12:i:1,2，为典型的鼠伤寒沙门菌血清型。
[0016]沙门菌Sal17241可培养于LB、BHI和NA培养基中。
[0017]本专利技术同时提供一种微生物菌剂，所述微生物菌剂包含所述的鼠伤寒沙门菌。
[0018]本专利技术还提供所述的鼠伤寒沙门菌在作为筛选新型抗菌药物的模式菌株中的应用。
[0019]本专利技术的有益效果：
[0020]本专利技术提供了一种同时携带喹诺酮类药物四个耐药突变位点gyrA
S83F
、gyrA
D87G
、parC
S80R
和parE
S458P
的沙门菌——沙门菌Sal17241。多个突变位点同时存在导致该菌株对喹诺酮类药物表现为高水平耐药，萘啶酮酸、环丙沙星、左氧氟沙星和莫西沙本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鼠伤寒沙门菌，其特征在于，所述鼠伤寒沙门菌同时携带四个喹诺酮类药物耐药突变位点，所述四个喹诺酮类药物耐药突变位点分别为：gyrA基因编码产物的第83位的丝氨酸突变为苯丙氨酸；gyrA基因编码产物的第87位的天冬氨酸突变为甘氨酸；parC基因编码产物的第80位丝氨酸突变为精氨酸；parE基因编码产物的第458位丝氨酸突变为脯氨酸。2.根据权利要求1所述的鼠伤寒沙门菌，其特征在于，所述gyrA基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:2373710..2376422，所述parC基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:3336954..3339227，所述parE基因的NCBI登录号为AE006468 REGION:3343969..3345861。3.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨小鹃，黄嘉慧，吴清平，张菊梅，吴诗，柏建玲，王涓，薛亮，庞锐，韦献虎，张友雄，
申请(专利权)人：广东省微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：