本发明专利技术公开了一种干酪乳杆菌(Lactobacillus caseii)及其冻干制剂在猪饲料中的应用，公开了本发明专利技术菌株的优化培养基及冻干保护剂。本发明专利技术的干酪乳杆菌的微生物保藏编号为CGMCC No.9041。本发明专利技术菌株是从健康猪肠道分离、选育得到的，其遗传基础明确，具有良好产酸性和抑菌性。本发明专利技术菌株的培养基和冻干保护剂，可以提高该菌的培养效率和冻干存活率，增强其抗逆性。本发明专利技术菌株的冻干制剂添加在猪饲料中，可以促进猪的肠道健康，降低猪的腹泻率，提高猪的生产性能，减少粪便中的有害细菌排放。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属微生物领域，涉及一种干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)菌株，本专利技术还涉及其冻干制剂在猪饲料中的应用。
技术介绍
在养猪生产中，仔猪的消化器官和生理机能尚没有发育完全，胃酸分泌不足，内源性消化酶活性较低，肠道内的微生态平衡尚未建立起来，有害细菌容易乘虚而入，导致仔猪腹泻，影响仔猪的生长和成活率。因此，给仔猪补充能产有机酸、能抑制有害细菌(如大肠杆菌和金黄色葡萄球菌等)、能促进仔猪健康生长的饲用乳酸菌，是一条重要解决途径。干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)是乳酸杆菌属(Lactobacillus)中的种群之一，是农业部公布的《饲料添加剂品种目录(2013)》允许用于动物养殖的乳酸菌。有关干酪乳杆菌在饲料中应用的申请专利有：“一株干酪乳杆菌及其在饲料中的应用”(申请号201210277454.4)，该干酪乳杆菌L-1，是从土壤中筛选分离得到的，该菌株能发酵产生磷脂酶A2，以该菌株作为发酵菌株，以含植物磷脂的油料作物或其加工副产品为发酵底物，以硫酸铵、氯化钠、玉米淀粉作为能量供体，通过固态发酵制备饲料添加剂，用于肉猪饲料中。“一种干酪乳杆菌发酵液在饲料中的应用”(申请号为201310162105.2)，公开了干酪乳杆菌1yT-7发酵液在饲料中的应用，将干酪乳杆菌发酵液通过喷雾干燥并加入脱毒后的油菜饼，制成含干酪乳杆菌109活菌/克的饲料添加剂，用于仔猪饲料中。“一种干酪乳杆菌及其在饲料发酵中的应用”(申请号201210594249.0)，涉及的干酪乳杆菌(Hzd-lc-002)分离于陈年花生壳中，采取厌氧方式培养，其发酵液用于饲养育肥猪和肉鸭。上述专利技术通过固态发酵、液态发酵、液态发酵后喷雾干燥等方式制备饲料添加剂，应用于动物饲料中，没有涉及到猪源干酪乳杆菌，没有涉及到菌种的产酸性能、抑制有害菌情况和冻干制备存活率方面的内容。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一株从健康猪肠道中分离、选育得到的干酪乳杆菌；本专利技术的第二个目的在于提供适合上述干酪乳杆菌生长的培养基；本专利技术的第三个目的在于提供所述干酪乳杆菌的冻干制剂及制剂的制备方法；本专利技术的目的还在于提供所述干酪乳杆菌在猪饲料中的用途。本专利技术从健康猪肠道中分离、选育出一株猪源干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)，命名为干酪乳杆菌ZLC018，经过体外产酸、抑菌等一系列试验，证明其具有益生特性。通过优化培养基、冻干保护剂和冻干工艺，提高了菌株的培养效率和冻干存活率，制备的冻干制剂添加到保育猪饲料中，能降低猪的腹泻率，提高日增重，显著降低粪便中有害菌数量。该菌株于2014年06月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码：100101。保藏编号：CGMCCNo.9041，生物保藏存活信息：存活。本专利技术干酪乳杆菌ZLC018具有以下特性：①37℃下，培养18h后，进入生长稳定期；培养24h，活菌数达到6.0×109CFU/mL；②37℃下，培养24h，pH达到3.69，发酵液中乳酸含量达到105.92mmoL/L；培养48h，pH达到3.66，发酵液中乳酸含量达到220.75mmoL/L；③在pH＝2.0的人工胃液中处理4h，存活率77.62％；在pH＝6.8的人工肠液中处理4h，存活率95.56％；④对有害细菌具有抑制作用。该菌发酵液对106CFU/mL的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门氏菌有抑制作用，抑菌圈直径达18～24.2mm。所述干酪乳杆菌ZLC018的一种优选培养基的组成为：葡萄糖80g、大豆蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母浸粉20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、K2HPO4·3H2O2g、MgSO4·7H2O0.6g、MnSO4·H2O0.2g、碳酸钙0.5g、吐温-801mL、蒸馏水1000mL。利用该培养基配方，可使该菌的培养效率大幅提高，活菌数不低于6.0×109CFU/mL，效果优于MRS培养基。所述干酪乳杆菌ZLC018的一种优选冻干保护剂的组成为：脱脂奶粉25g、海藻糖10g、L-半胱氨酸1g、乳糖5g、谷氨酸钠3g、糊精20、甘油1g、羧甲基纤维素钠0.4g、蒸馏水100mL。利用该保护剂配方，可使该菌的冻干存活率达到94.6％。所述干酪乳杆菌ZLC018冻干制剂的制备方法，包括如下工艺步骤：①种子液制备：采取逐级扩大的方法，将于-70℃下保存的干酪乳杆菌ZLC018以1％的接种量接种于液体培养基中，在37℃下培养18h后，为一级种子液；一级种子液再以1％的接种量接种于液体培养基中，于37℃下培养18h，为二级种子液，待用；②扩大培养：将干酪乳杆菌ZLC018的种子液以1％的接种量接种于液体培养基中，在37℃下培养22～24h；③离心分离菌体：将步骤②中扩大培养制得的发酵液离心分离，得到菌泥；④保护剂的配制：将所需蒸馏水用滤膜孔径为0.22μm的无菌滤器过滤至无菌桶中，依次称取保护剂成分，混匀；⑤乳化：将配制好的保护剂和菌泥混合均匀，采用高剪切分散乳化机，转速3000r/min乳化30min，制成菌悬液；⑥真空冷冻干燥：将乳化好的菌悬液室温稳定30min，置于冷冻盘中，厚度在0.5～1.5cm，预冻2h，然后在冷凝温度为-30℃、真空度0.37Pa的条件下真空冷冻干燥20h，得到冻干粉；⑦收取冻干粉，粉碎、分装，铝箔袋真空包装，低温保存。研究表明，本专利技术干酪乳杆菌ZLC018易培养、生长好，且具有较强的产酸、耐酸及具有抑菌作用。本专利技术干酪乳杆菌ZLC018在猪饲料中的应用效果：在保育猪日粮中添加干酪乳杆菌ZLC018冻干制剂，使日粮中的活菌数达到4.0×109CFU/kg，保育猪的腹泻率下降7.5个百分点，存活率提高3.33个百分点，日增重提高12.71％，料重比降低7.34％，猪粪中的有害细菌数量大幅度下降，其中：大肠杆菌数量下降46.29％，金黄色葡萄球菌数量下降30.82％。饲喂干酪乳杆菌ZLC018冻干制剂后，改善了保育猪的健康状况，有利于其生产潜能的发挥。附图说明图1干酪乳杆菌ZLC018菌体、菌落及发酵液图片，图1a为MRS培养基，于37℃下，培养48h后的菌体形态(革兰氏染色)，图1b为MRS培养基，于37℃下，培养48h后的菌落形态；图1c为优化培养基培养24h的发酵液图片。图2干酪乳杆菌ZLC018培养过程OD600nm变化曲线。图3干酪乳杆菌ZLC018培养过程pH变化曲线。具体实施方式实施例1分离、筛选与鉴定猪源干酪乳杆菌ZLC018从北京某规模猪场选择健康的保育猪宰杀，取肠道，刮取肠粘膜与无菌生理盐水混匀。取1mL悬液，用无菌生理盐水分别稀释为10-5、10-6、10-7，各取0.1mL分别涂布于MRS固体培养基、SL固体培养基和LBS固体培养基上，37℃厌氧培养。48h后挑取疑似乳杆菌的乳白色菌落，进行厌氧纯培养。48h后，挑取半个培养后的菌落进行H2O2酶试验和革兰氏染色镜检，凡是革兰氏染色阳性、H2O2酶试验阴性、菌体形态为杆状的菌株可初步确定为乳杆菌。然后将剩下的半个菌落进行划线培养，直至确定为纯菌，然后对分离得到的本文档来自技高网...
【技术保护点】
干酪乳杆菌(Lactobacillus caseii)ZLC018菌株，其微生物保藏编号为：CGMCC No.9041。
【技术特征摘要】
1.干酪乳杆菌(Lactobacilluscaseii)ZLC018菌株，其微生物保藏编号为：CGMCCNo.9041。2.一种用于权利要求1所述干酪乳杆菌培养的培养基，其特征在于，该培养基的组成为：葡萄糖80g、大豆蛋白胨10g、牛肉膏10g、酵母浸粉20g、无水乙酸钠5g、柠檬酸氢二铵2g、K2HPO4·3H2O2g、MgSO4·7H2O0.6g、MnSO4·H2O0.2g、碳酸钙0.5g、吐温-801mL、蒸馏水1000mL。3.一种干酪乳杆菌冻干制剂，包括权利要求1所述的干酪乳杆菌ZLC018和冻干保护剂。4.如权利要求3所述的干酪乳杆菌冻干制剂，其特征在于，所述的冻干保护剂的组成为：脱脂奶粉25g、海藻糖10g、L-半胱氨酸1g、乳糖5g、谷氨酸钠3g、糊精20g、甘油1g、羧甲基纤维素钠0.4g、蒸馏水100mL。5.权利要求3或4所述的干酪乳杆菌冻干制剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括如下步骤：①种子液制备：采取逐级扩大的方法，将于-70℃下保存的干酪乳杆菌ZLC018以1％的接种量接种于液体培养基中，在37℃下培养18h后，为一级种子液；一级种子液再以1％的接种量接...
【专利技术属性】
技术研发人员：季海峰，王四新，张董燕，刘辉，王晶，王雅民，
申请(专利权)人：北京市农林科学院，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。