一种乳酸片球菌及其用途制造技术

本发明专利技术公开了一种乳酸片球菌及其用途，属于生物工程技术领域。本发明专利技术所述的乳酸片球菌，为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)zk160135，于2016年02月01日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:12126，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为哈尔滨中科生物工程有限公司。本发明专利技术的乳酸片球菌耐胃液和胆盐；对病原微生物具有抑制作用。使用本发明专利技术的菌株能够有效提高动物的免疫力、改善肠道微环境和促进生长，具有优异的益生作用。

Lactic acid coccus and its use

The invention discloses a lactic acid coccus and the use thereof, belonging to the technical field of biological engineering. Pediococcus said, as Pediococcus acidilactici (Pediococcus acidilactici) zk160135, 02 2016 to 01 August: common microorganisms preserved in the center China microbe preservation management committee, to address the preservation number is CGMCC NO:12126: Beijing City, Chaoyang District No. 1 Beichen West Road, No. 3 hospital, the request for the preservation unit Harbin Zhongke bio engineering co.. The lactic acid coccus of the present invention is tolerant of gastric juice and bile salts, and has inhibitory effect on pathogenic microorganisms. The strain of the invention can effectively improve the immunity of animals, improve the microenvironment of intestinal tract and promote growth, and has excellent prebiotic effect.

【技术实现步骤摘要】
一种乳酸片球菌及其用途
本专利技术属于生物工程
，具体涉及一种乳酸片球菌及其用途。
技术介绍
乳酸菌是动物肠道正常菌群中的优势菌，能够利用可发酵糖产生大量乳酸，具有调节肠道内菌群平衡、提高机体免疫力并促进营养吸收等功能，也有不少关于乳酸菌促进动物增质量、提高饲料利用率、分泌抑菌物质并减少发病率等方面的报道。近年来，已从许多乳酸菌中分离出了产细菌素的菌株，但其中对乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)产生的片球菌素(Pediocin)的研究最为突出。片球菌素对大肠杆菌、单核细胞增多症李氏杆菌、金黄色葡萄球菌、肉毒梭菌和产气荚膜梭状芽胞杆菌等有抑制和杀灭作用。片球菌素具有宽的pH耐受性和对低、高温的耐受性。乳酸片球菌常用于肉品、乳品和蔬菜的发酵，可改善食品的质地、风味、色泽、消化性和营养价值等，同时乳酸片球菌是饲料添加剂品种目录(2013)(中华人民共和国农业部公告第2045号)中允许使用的安全菌株。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的技术方案如下：一种乳酸片球菌，为乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)zk160135，于2016年02月01日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO:12126，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为哈尔滨中科生物工程有限公司。在上述方案的基础上，所述乳酸片球菌分离于健康牛粪。在上述方案的基础上，所述乳酸片球菌的菌落形态为乳白色、较小、圆形、表面湿润且光滑，边缘整齐，成对、成链或聚团状排列。在上述方案的基础上，所述乳酸片球菌具有如下菌学特性：具有链霉素、丙氟哌酸、万古霉素和卡那霉素的抗性；耐胃液和胆盐；对猪源产肠毒素型大肠杆菌(E.coliO139)、金黄色葡萄球菌(SA)和单核细胞增多症李氏杆菌具有抑制作用。在上述方案的基础上，所述乳酸片球菌最适生长温度为35℃～45℃、最适初始pH值6.2～6.5。在上述方案的基础上，所述乳酸片球菌可用于调整动物肠道功能、促进动物生长、提高动物免疫力。在上述方案的基础上，使用时乳酸片球菌的含量≥1亿/mL。一种调整动物肠道功能的方法，使用上述乳酸片球菌制成微生态制剂或中药发酵制剂。一种促进动物生长的方法，使用上述乳酸片球菌制成微生态制剂或中药发酵制剂。一种提高动物免疫力的方法，使用上述乳酸片球菌制成微生态制剂或中药发酵制剂。本专利技术的有益效果本专利技术的乳酸片球菌具有链霉素、丙氟哌酸、万古霉素和卡那霉素的抗性；耐胃液和胆盐；对猪源产肠毒素型大肠杆菌(E.coliO139)、金黄色葡萄球菌(SA)和单核细胞增多症李氏杆菌具有抑制作用。此外，本专利技术的乳酸片球菌菌株能耐受消化道内的环境，耐受胃酸和胆盐，生长速度快，抗逆性强，稳定性好。用本专利技术的乳酸片球菌发酵中药制备中药发酵制剂，有效的补充或增强了原有药物的功能；中药经乳酸片球菌转化后产生了新的活性物质；该中药发酵制剂能够有效提高动物的免疫力、改善肠道微环境和促进生长，具有优异的益生作用。附图说明图1.菌株P-2在液体培养基37℃静置培养24h，显微镜下放大400倍观察图；图2.菌株P-2的菌落形态；图3.菌株P-2的16SrDNA系统发育树；图4乳酸片球菌zk160135与乳酸片球菌AS1.2696产酸性能对比；图5乳酸片球菌zk160135与乳酸片球菌AS1.2696的生长曲线。具体实施方式在本专利技术中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本专利技术。以下实施例只是为了举例说明本专利技术，而非以任何方式限制本专利技术的范围。本专利技术所述的乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)于2016年02月01日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO:12126，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为哈尔滨中科生物工程有限公司，保藏名称为乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)zk160135。实施例1样品采集、菌株分离及筛选1.1分离及筛选菌种培养基MRS液体培养基(g/L)：蛋白胨10.0、肉膏8.0、酵母浸粉4.0、葡萄糖20.0、磷酸氢二钾2.0、柠檬酸氢二铵2.0、乙酸钠5.0、硫酸镁0.2、硫酸锰0.04、吐温801.0、碳酸钙20.0，调pH6.2-6.45。115℃灭菌20min。固体培养基：在液体培养基的基础上添加1.5％的琼脂。1.2模拟胃液：胰蛋白胨8.3g、葡萄糖3.5g、氯化钠2.05g、氯化钙0.11g、氯化钾0.37g、磷酸二氢钾0.6g、猪胆盐0.05g、溶菌酶0.1g、胃蛋白酶13.3g、蒸馏水1000mL，盐酸分别调pH值至1.5、2.5，115℃灭菌20min。1.3样品采集分离样品采集于健康牛粪。采集时间和地点：于2015年01月采集于哈尔滨巴彦县丰源养牛场。1.4菌株的分离和筛选取样品10g，放入盛有90mL无菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡，80℃水浴20min。采用稀释平板法将上述样品涂布于MRS培养基中，37℃下静置培养24h～48h，挑选15株长势良好菌落，反复划线分离至获得纯菌株，以“P”代表乳酸片球菌将菌株编号P-1、P-2、P-3......P-15。以上菌株分别进行革兰氏染色、镜检和过氧化氢酶试验，选定菌株P-2为试验菌株。实施例2筛选菌株的鉴定2.1形态鉴定图1为P-2菌株在液体培养基37℃静置培养24h，显微镜下放大400倍观察图。P-2菌株的菌落形态如图2所示：菌株在MRS培养基中形成乳白色、较小、圆形、表面湿润且光滑，边缘整齐，成对、成链或聚团状排列的菌落，溶钙圈现象明显。菌株最适生长温度为35℃～45℃、最适初始pH值6.2～6.5。2.2生理生化鉴定参照《伯杰细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》进行接触酶检测、厌氧生长检测、45℃生长检测和7％NaCl生长检测，之后再进行一系列的验证检测，包括葡萄糖产酸产气、吲哚试验、淀粉水解试验等。具体见表1。表1P-2菌株生理生化鉴定结果注：“+”表示阳性，“-”表示阴性。将上述鉴定结果与《伯杰细菌鉴定手册》描述相对照及镜检结果相结合，初步判断该菌株为乳酸片球菌。2.316SrDNA序列测定按照细菌DNA抽提试剂盒的说明对所选乳酸菌的DNA进行提取，利用细菌16SrDNA的通用引物：上游引物：PrimerF：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’；下游引物：PrimerR：5’-CTACGGCTACCTTGTTACGA-3’。对提取的细菌DNA进行PCR，PCR扩增后的序列，由上海生工生物工程技术服务有限公司进行测序，测得的基因序列在NCBI(http://www.ncbi.nlm.nih.gov)上进行Blastn比对分析。结果显示：P-2菌株的16SrDNA序列结果与乳酸片球菌BCC1的16SrDNA的序列的覆盖率为96％，一致性为99％。利用测得的P-2菌株的16SrDNA序列构建核酸系统发育树如图3所示，所用到的序列名称及Genbank登录号如表2所示。本专利技术的P-2菌株与乳酸片球菌NBRC388本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乳酸片球菌，其特征在于：所述乳酸片球菌为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)zk160135，于2016年02月01日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO:12126，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为哈尔滨中科生物工程有限公司。

【技术特征摘要】
1.一种乳酸片球菌，其特征在于：所述乳酸片球菌为乳酸片球菌(Pediococcusacidilactici)zk160135，于2016年02月01日保藏于：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNO:12126，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，请求保藏单位为哈尔滨中科生物工程有限公司。2.根据权利要求1所述乳酸片球菌，其特征在于：分离于健康牛粪。3.根据权利要求2所述乳酸片球菌，其特征在于：菌落形态为乳白色、较小、圆形、表面湿润且光滑，边缘整齐，成对、成链或聚团状排列。4.根据权利要求1-3任一项所述乳酸片球菌，其特征在于：具有如下菌学特性：具有链霉素、丙氟哌酸、万古霉素和卡那霉素的抗性；耐胃液和胆盐；对猪源产肠毒素型大肠杆菌(E.coli...

【专利技术属性】
技术研发人员：隋利涛，曹亚彬，梁晓彤，
申请(专利权)人：哈尔滨中科生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37