The invention discloses a method, a preparation of human CD3+CD56+CIK cells by the steps of: (1) venous blood were collected from peripheral mononuclear cells were obtained by Ficoll Hypaque - glucamine density gradient centrifugation; (2) the PBMCs resuspended in plasma containing autologous inactivated commercialization without serum the culture medium, adjusting the cell density of 1-2 * 106/ml, and adding IFN- to a final concentration of 600-1000IU/ml gamma, finally transferred into culture flask culture; (3) 12-24 hours after adding anti CD3 monoclonal antibody, anti CD28, IL-2, IL-15, 14~21 cultured in consecutive days, each day with fresh medium containing 2~3 IL-2 and IL-15, the addition of culture medium after cell density control in 1~2 * 106/ml. The invention uses the anti CD3 monoclonal antibody as a stimulant, and activation of CIK cells, and cytokine RH RH and Rh IL-15 IL-2 costimulation. So as to provide a new alternative for clinical adoptive immunotherapy.
【技术实现步骤摘要】
人CD3+CD56+CIK细胞的制备方法及其应用
本专利技术属于细胞免疫学
,具体地说是一种人CD3+CD56+CIK细胞的制备方法及其应用。
技术介绍
细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokineinducedkillercell,CIK)是Schmidt等于1986年报的从外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs)中诱导出的一群异质性细胞。其主要效应细胞因同时表达CD3+和CD56+两种膜蛋白分子,因此又被称为NK细胞样T淋巴细胞(NKT细胞)。体内外的实验研究表明,CIK细胞具有杀瘤活性高、增值速度快、抗凋亡及杀瘤效应不受癌细胞多重耐药的影响等优势。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种实用高效的体外扩增人CIK细胞的方法。本专利技术采用的技术方案是:一种制备人CD3+CD56+细胞的方法,包括如下步骤:采集并分离外周血单个核细胞(Peripheralbloodmononuclearcells,PBMCs),用抗CD3单抗刺激,同时加入细胞因子rhIL-15和rhIL-2,置于37℃,5%CO2和饱和湿度的培养箱内培养,72小时后进行半两更换培养并补加等量的rhIl-2,以后根据细胞生长状态每2~3天进行补加等量含有rhIL-2和rhIL-15的培养液,以维持细胞密度为(0.5~2)×106个/mL。10~15天即可获得CD3+CD56+CIK细胞。根据本专利技术,所述的PBMCs是采用聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心法分离手机,并用生理盐水洗涤2次,低速离心后获得。所述rhIL-15终浓度为1 ...
【技术保护点】
人CD3+CD56+CIK细胞的制备方法,其特征在于采用如下步骤:采集患者外周静脉血,经经聚蔗糖‑泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞;将上述PBMCs重悬于含自体灭活血浆的商品化无血清培养基中,调整细胞密度1‑2×10
【技术特征摘要】
1.人CD3+CD56+CIK细胞的制备方法,其特征在于采用如下步骤:采集患者外周静脉血,经经聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞;将上述PBMCs重悬于含自体灭活血浆的商品化无血清培养基中,调整细胞密度1-2×106/ml,并加入IFN-γ至终浓度600-1000IU/ml,最后转移入培养瓶内进行培养;培养12-24小时后加入抗CD3单抗、抗CD28单、IL-2、IL-15,连续培养14~21天,其中每2~3天补加含有IL-2和IL-15的新鲜培养基,使补加培养基后的细胞密度控制在1~2×106/ml。2.根据权利要求1所述人CD3+CD56+CIK细胞的制备方法,其特征在于,所述12-24小时后使用的CD3单抗浓度为10-500ng/mL、50-500ng/mLanti-CD28mAb、1-50ng/mLrhIL-15、50-1500IUrhIL-2和1-10%自体...
【专利技术属性】
技术研发人员:崔博靖,付凡,饶秀茸,马飞,王宇环,
申请(专利权)人:深圳市合一康生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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