一种用于肺病治疗的脂肪间充质干细胞及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种用于治疗肺部疾病的脂肪间充质干细胞及其制备方法。本发明专利技术提供的脂肪间充质干细胞可用于制备预防或治疗肺损伤及纤维化的药物。该药物应用于肺病治疗，尤其是肺损伤及其纤维化时，安全性高，取材易，干预和治疗效果好，通过成熟的细胞培养技术手段可以实现量化生产，具有很好的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种用于肺病治疗的脂肪间充质干细胞及其制备方法
本专利技术属于生物医学领域，具体涉及一种用于肺病治疗的脂肪间充质干细胞及其制备方法。
技术介绍
间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是一种多能干细胞，有长期自我更新和多向分化的潜能。间充质干细胞通常是指胚胎发育过程中在多种成体间叶组织中留存下来的未分化的原始APSC多能细胞，如：骨髓基质、脂肪、皮肤真皮、胎盘、骨骼肌、脐带血和脐带等。已经有研究证实间充质干细胞可改善或减轻肺损伤。肺纤维化是一种由多种病因引起的慢性进行性的，弥漫性肺间质疾病，主要特征包括大量的成纤维细胞(fibroblast)增殖和聚集，细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)沉积，并逐渐替代肺实质，从而失去呼吸功能，同时伴随炎性反应和损伤导致肺部组织被破坏以及肺功能受损。根据肺纤维化的发病原因，可将其分为特发性肺纤维化、尘肺、结节病、过敏性肺炎以及药物和放射性导致的肺纤维化等。其中特发性肺纤维化最为常见，发病率呈逐渐上升趋势，且随年龄而增加，患者确诊后的中位生存期仅为3.8年本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.间充质干细胞在制备用于治疗肺部疾病的药物中的应用，其特征在于，所述的肺部疾病为特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、重症新型冠状病毒肺炎、急性呼吸窘迫综合征、尘肺或肺损伤；所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、骨髓间充质干细胞中的一种或多种。/n

【技术特征摘要】
1.间充质干细胞在制备用于治疗肺部疾病的药物中的应用，其特征在于，所述的肺部疾病为特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、重症新型冠状病毒肺炎、急性呼吸窘迫综合征、尘肺或肺损伤；所述的间充质干细胞为脐带间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、骨髓间充质干细胞中的一种或多种。


2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的间充质干细胞为脂肪间充质干细胞。


3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脂肪间充质干细胞包括分离自人脂肪组织的原代细胞及其传代细胞。


4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脂肪间充质干细胞的总注射量为1×106-36×106个/kg体重。


5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的脂肪间充质干细胞的制备方法为：
(1)无菌操作采集脂肪组织，采集后在12h内用胶原酶消化法进行分离培养，洗涤脂肪组织，除去血细胞，加入与脂肪组织悬液等量新配制的预热的0.075％浓度的胶原酶I或者胶原酶IV工作液，剧烈晃动培养瓶5-10秒，置于振动气浴锅中，37℃，70rpm，消化50-70min，并每隔15分钟将培养瓶取出剧烈晃动培养瓶5-10秒后继续置于振动气浴锅中消化；
(2)分离基质血管组分：将消化后的组织用输血器滤网过滤，然后平均分装到2个50mL的离心管中，300g-500g室温离心10min，得到的沉淀即为基质血管组分；
(3)净化沉淀：离心后，基质血管组分沉积于离心管底部，用移液管自上而下小心除去上层油脂和下层的胶原酶溶液；适量生理盐水重悬基质血管组分，吹散，300g-500g室温离心10min；
(4)离心完毕后，小心吸去上清液，注意不要直接倾倒；用10mL培养基重悬基质血管组分，然后将基质血管组分汇总到1个新的50mL离心管中，再次室温离心，200g-400g，10min；
(5)种瓶：离心后取15mL上清送检进行无菌检测，用20mL培养基充分重悬组织，将20mL组织悬液均分至培养瓶中，将培养瓶置于37℃，5％CO2培养箱中；原代培养第24小时，进行全量换液，镜下观察细胞状态；将培养瓶中漂浮的、没有贴壁的基质血管组分及培养液一起倒入新的50mL离心管，700g-900g离心5min；倒去离心上清，重新往每个培养瓶中加入新完全培养液8mL，再用适量完全培养液定容，吹打混匀，分别往每个培养瓶中加入2mL基质血管组分；第五天全量换液；第七天收集细胞传代或冻存再培养7天左右，原代培养的细胞克隆团的面积百分比达到70％-80％时，消化收获；
(6)收获后的细胞悬液定容后接种至新的培养容器中，传代细胞密度为5000-6000个/cm2，即3.75×105-4.5×105个/培养瓶，按照4.5×105个/培养瓶进行传代，每瓶加培养基至10mL；置于37℃，5％CO2培养箱中培养至细胞融合度达到85％-90％，即得到P1代脂肪干细胞；
(7)传代：轻轻吹打重悬浮细胞，定容后接种至新的培养容器中，传代细胞密度为5000-6000个/cm2，即3.75×105-4.5×105个/培养瓶，按照4.5×105个/培养瓶进行传代，每瓶加培养基至10mL，置于37℃，5％CO2培养箱中培养至细胞融合度达到85％-90％，即得到P2代脂肪干细胞；
(8)依次制备培养第三到第八代次细胞，即P3-P8。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王宇环，罗晓玲，张正涵，
申请(专利权)人：深圳市合一康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44