The invention discloses a cryopreservation protective solution and an application thereof, wherein the cryopreservation protection liquid is to add fetal bovine serum, human serum albumin, two methylene sulfoxide, ethylene glycol, formamide and trehalose in a basal medium. The invention of the cryoprotective liquid can vitrification advantage: cell recovery rate reached more than 90%, the survival rate reached more than 85%, compared with the ordinary freezing method, the recovery rate and survival rate were increased significantly, greatly improve the cryopreservation effect.
【技术实现步骤摘要】
一种冻存保护液及其应用
本专利技术属于生物
,具体涉及一种冻存保护液,特别用于玻璃化冻存免疫细胞和脐血的冻存保护液及其方法和应用。
技术介绍
传统的细胞低温保存方法有连续慢速降温法、程序性降温法和梯度降温法等,其主要的区别在于细胞的降温速率及各个降温阶段停留的时间不同,所采用的冷冻保护剂成分及浓度也有区别,文献报道在这些方法中目前低温保存细胞存活率最高的为程序性降温法,人们采用类似的降温技术低温保存细胞已取得了一定的进展。但是,传统的低温保存方法有很多局限性,如无法避免冷冻过程中细胞内冰晶的形成,且操作过程繁琐,需要昂贵的程序降温仪。玻璃化冻存法是近年来发展起来的一项新的冷冻技术,玻璃化冷冻技术是利用体积微小的冷冻承载工具,在极快速降温过程中,使高浓度的冷冻保护液由液态转变为黏度很高的类似玻璃样的固态,并以这种状态在低温下长期保存。其超快的降温速率可以避免细胞内冰晶的形成,极大的降低了冷冻过程中的细胞损伤。玻璃化冻存法可以保持原有细胞的活性和完整性,并能降低其抗原性,其冷冻保护剂的组分及配方已可用于保存人体的组织和器官,到目前为止,已经成功保存了人的精子、卵母细胞、胚胎、红细胞、胚胎干细胞、造血干细胞、胰岛等。
技术实现思路
本专利技术提供一种玻璃化冻存免疫细胞和脐血的冻存保护液及相应的冻存方法,采用本专利技术的冻存保护液具有良好的玻璃化冻存效果;采用此法冻存的细胞,在复苏后存活率相比于传统冻存方法有显著增加;而且细胞复苏后有更高的活细胞比率。本专利技术的目的之一在于提供一种存活率更高的玻璃化冻存免疫细胞和脐血的冻存保护液。本专利技术的目的之二在于提供一 ...
【技术保护点】
一种冻存保护液,其特征在于:在基础培养基加入胎牛血清、人血清白蛋白、二甲亚砜、乙二醇、甲酰胺和海藻糖;各组分的用量为:二甲亚砜 2.5~3.5mol/L乙二醇 2.5~3.5mol/L甲酰胺 2.0~3.0mol/L海藻糖 0.5~1.0mol/L胎牛血清 15~25%(v/v)人血清白蛋白 0.2%‑3%。
【技术特征摘要】
1.一种冻存保护液,其特征在于:在基础培养基加入胎牛血清、人血清白蛋白、二甲亚砜、乙二醇、甲酰胺和海藻糖;各组分的用量为:二甲亚砜2.5~3.5mol/L乙二醇2.5~3.5mol/L甲酰胺2.0~3.0mol/L海藻糖0.5~1.0mol/L胎牛血清15~25%(v/v)人血清白蛋白0.2%-3%。2.根据权利要求1所述的冻存保护液,其特征在于:各组分的用量为:二甲亚砜3.2mol/L乙二醇3.2mol/L甲酰胺2.5mol/L海藻糖0.5mol/L胎牛血清20%(v/v)人血清白蛋白1%。3.如权利要求1或者2所述的冻存保护液,其特征是:所述基础培养基为RPMI1640培养液。4.一种冻存免疫细胞和脐血的方法,其特征在于:包括步骤:A)制备冻存保护液;B)制备细胞;C)用步骤A)制备的冻存保护液悬浮细胞并注入冻存管;D)直接放入液氮中进行玻璃化冻存。5.根据权利要求4所述的冻存免疫细胞和脐血的方法,其特征在于:步骤A)中制备培养液的方法为:在基础培养基RPMI1640培养液中依次加入胎牛血清、人血清白蛋白、海藻糖...
【专利技术属性】
技术研发人员:张雷,李旺,韩香华,魏志璋,罗晓玲,
申请(专利权)人:深圳市合一康生物科技股份有限公司,
类型:发明
国别省市:广东,44
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