一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法技术

本发明专利技术公开了一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，搅拌混合15‑20min，获得第一混合液；将第一混合液静置12‑24小时，获得第二混合液；将第二混合液匀浆8‑12min，获得第三混合液；将第三混合液离心23‑28min，取上清液，获得第四混合液；采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物；采用SephadexG‑200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得最终纯化物；将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品。本发明专利技术提取方法所获得的乙酰胆碱酯酶的酶活性高，纯度高，灵敏度高的优点，且所制得的产品为粉末状，易于存储，具有广阔的市场前景。

Method for extracting acetylcholinesterase from horse blood

The invention discloses a method, acetylcholinesterase was extracted from horse blood in the following steps: Taking the fresh horse blood, adding mixed buffer extract, mixing 15 20min, won the first mixed solution; the first mixture of static 12 24 hours, second mixed liquid; second mixture of 8 homogenate 12min third, mixed liquid; third mixed liquid centrifugal 23 28min supernatant, fourth mixed solution; the mixed solution of fourth Procainamide affinity chromatography purified, obtained initial purification; using SephadexG 200 gel column for initial purification purification processing, to obtain the final purification; ultimately purified concentrate and drying to obtain the product. The method of the invention has the advantages of high enzyme activity, high purity and high sensitivity of the acetylcholinesterase, and the obtained product is powder like and easy to store, and has a broad market prospect.

【技术实现步骤摘要】
一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法
本专利技术涉及一种酶的提取方法，具体是一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法。
技术介绍
乙酰胆碱酯酶是生物神经传导中的一种关键性的酶，在胆碱能突触间，该酶降解乙酰胆碱，终止神经递质对突触后膜的兴奋作用，保证神经信号在生物体内的正常传递。由于乙酰胆碱酯酶对于乙酰胆碱的高速水解作用，使得其近年来得到越来越多的研究人员的关注。乙酰胆碱酯酶在生物防治、农药残留检测、分子生物学以及各种神经性疾病治疗方面有广泛的应用。最近研究表明，氨基甲酸乙酯在一定程度上可以抑制乙酰胆碱酯酶的活性，因此乙酰胆碱酯酶有可能应用在氨基甲酸乙酯的检测上。乙酰胆碱酯酶广泛存在于各种动植物组织中，对于动物来说，主要集中在肝脏、血液和脑组织中。现有的乙酰胆碱酯酶的提取方法普遍存在酶活性差的缺陷。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的问题。为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、100-200rpm的转速下搅拌混合15-20min，获得第一混合液；2)将第一混合液在0-4℃下静置12-24小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、300-400rpm的转速下匀浆8-12min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7500-8000rpm的条件下冷冻离心23-28min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得最终纯化物；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品。作为本专利技术进一步的方案：步骤1)中，所述混合缓冲提取液的加入量为所用的新鲜马血体积的3-5倍。作为本专利技术再进一步的方案：步骤1)中，所述混合缓冲提取液中含有质量百分比为0.5-0.8％的聚乙二醇辛基苯基醚，余量为磷酸盐缓冲液。作为本专利技术再进一步的方案：步骤1)中，所述混合缓冲提取液的pH为7.2-7.6。作为本专利技术再进一步的方案：步骤5)中，体系pH为7.3。作为本专利技术再进一步的方案：步骤6)中，体系pH为7.5。作为本专利技术再进一步的方案：步骤7)中，采用透析法于4℃下浓缩最终纯化物，然后进行真空冷冻干燥。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：本专利技术提取方法所获得的乙酰胆碱酯酶的酶活性高，纯度高，灵敏度高的优点，且所制得的产品为粉末状，易于存储，具有广阔的市场前景。具体实施方式下面结合具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步详细地说明。实施例1一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、100rpm的转速下搅拌混合15min，获得第一混合液，其中，所述混合缓冲提取液的加入量为所用的新鲜马血体积的3倍；所述混合缓冲提取液中含有质量百分比为0.5％的聚乙二醇辛基苯基醚，余量为磷酸盐缓冲液；所述混合缓冲提取液的pH为7.2；2)将第一混合液在0℃下静置12小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、300rpm的转速下匀浆8min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7500rpm的条件下冷冻离心23min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物，其中，Procainamide亲和层析体系pH为7.3；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得产物，其中，SephadexG-200凝胶柱体系pH为7.5；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品，具体为，采用透析法于4℃下浓缩最终纯化物，然后进行真空冷冻干燥，获得产品。实施例2一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、150rpm的转速下搅拌混合16min，获得第一混合液，其中，所述混合缓冲提取液的加入量为所用的新鲜马血体积的3倍；所述混合缓冲提取液中含有质量百分比为0.6％的聚乙二醇辛基苯基醚，余量为磷酸盐缓冲液；所述混合缓冲提取液的pH为7.3；2)将第一混合液在0℃下静置15小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、320rpm的转速下匀浆9min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7600rpm的条件下冷冻离心24min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物，其中，Procainamide亲和层析体系pH为7.3；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得产物，其中，SephadexG-200凝胶柱体系pH为7.5；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品，具体为，采用透析法于4℃下浓缩最终纯化物，然后进行真空冷冻干燥，获得产品。实施例3一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、150rpm的转速下搅拌混合18min，获得第一混合液，其中，所述混合缓冲提取液的加入量为所用的新鲜马血体积的4倍；所述混合缓冲提取液中含有质量百分比为0.7％的聚乙二醇辛基苯基醚，余量为磷酸盐缓冲液；所述混合缓冲提取液的pH为7.4；2)将第一混合液在2℃下静置18小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、350rpm的转速下匀浆10min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7800rpm的条件下冷冻离心25min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物，其中，Procainamide亲和层析体系pH为7.3；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得产物，其中，SephadexG-200凝胶柱体系pH为7.5；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品，具体为，采用透析法于4℃下浓缩最终纯化物，然后进行真空冷冻干燥，获得产品。实施例4一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、180rpm的转速下搅拌混合19min，获得第一混合液，其中，所述混合缓冲提取液的加入量为所用的新鲜马血体积的5倍；所述混合缓冲提取液中含有质量百分比为0.7％的聚乙二醇辛基苯基醚，余量为磷酸盐缓冲液；所述混合缓冲提取液的pH为7.5；2)将第一混合液在4℃下静置20小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、400rpm的转速下匀浆10min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、8000rpm的条件下冷冻离心26min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物，其中，Procainamide亲和层析体系pH为7.3；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得产物，其中，SephadexG-200凝胶柱体系pH为7.5；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品，具体为，采用透析法于4℃下浓缩最终纯化物，然后进行真空冷冻干燥，获得产品。实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、100‑200rpm的转速下搅拌混合15‑20min，获得第一混合液；2)将第一混合液在0‑4℃下静置12‑24小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、300‑400rpm的转速下匀浆8‑12min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7500‑8000rpm的条件下冷冻离心23‑28min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物；6)采用SephadexG‑200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得最终纯化物；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品。

【技术特征摘要】
1.一种从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于，步骤如下：1)取新鲜马血，加入混合缓冲提取液，在4℃冰浴、100-200rpm的转速下搅拌混合15-20min，获得第一混合液；2)将第一混合液在0-4℃下静置12-24小时，获得第二混合液；3)将第二混合液在4℃冰浴、300-400rpm的转速下匀浆8-12min，获得第三混合液；4)将第三混合液在4℃、7500-8000rpm的条件下冷冻离心23-28min，取上清液，获得第四混合液；5)采用Procainamide亲和层析法对第四混合液进行纯化处理，获得初次纯化物；6)采用SephadexG-200凝胶柱对初次纯化物进行纯化处理，获得最终纯化物；7)将最终纯化物浓缩，干燥，即得产品。2.根据权利要求1所述的从马血中提取乙酰胆碱酯酶的方法，其特征在于，步...

【专利技术属性】
技术研发人员：程宇，
申请(专利权)人：武汉中科志康生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42