一种高稳定型MazF突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种高稳定型MazF突变体及其应用。本发明专利技术提供了一种蛋白质，为如下1)或2)：1)所示的蛋白为将野生型MazF蛋白氨基酸序列中第48位半胱氨酸置换为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸，得到的蛋白；2)所示的蛋白为将1)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且由1)衍生的蛋白质。本发明专利技术的实验证明了，突变体在野生型序列48位发生氨基酸替换，该突变体在保持了野生型MazF毒蛋白相当的核酸内切酶活性的条件下，有效提高了活性保持时间与结构稳定性。该突变体可用于各类基于mazEF毒素‑抗毒素系统建立的合成生物学模块，在细菌TAs自杀机制研究、抗菌及抗病毒具有广泛应用。

【技术实现步骤摘要】
一种高稳定型MazF突变体及其应用
本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种高稳定型MazF突变体及其应用。
技术介绍
毒素-抗毒素系统(Toxin-Antitoxinsystem，TA)是原核生物中的一对基因操纵元件，通常为中间有一个或数个碱基重叠的相邻基因，分别编码一个稳定的毒素蛋白和不稳定的抗毒素，可以在细菌应对各种胁迫条件时诱导其生长抑制或程序性死亡，具有重要的生理调节功能。在典型的TA中，抗毒素基因编码的不稳定抗毒素易被降解，使毒素能够从毒素-抗毒素复合物中得以释放,进而发挥其毒性作用。TA最先发现于低拷贝质粒上，通过“分离后致死”效应维持质粒的稳定传递，随后被发现大量存在于细菌的基因组中。毒素蛋白的作用靶标很多，已经明确的包括破坏细胞膜、抑制细胞壁形成、剪切mRNA及rRNA、抑制核糖体亚基的功能及抑制螺旋酶的活性等。其中，对细胞最重要和常见的毒性表现为对翻译水平的调控，进而导致细菌的生长抑制或死亡。由于基于TA编码的毒素对细菌的显著抑制活性，对其采用人为干预的方式进行激活，释放毒素进而杀死致病菌的抗菌策略已引起了广泛关注。与传统的抗生素治疗原理不同，该策略利用了细菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质，为如下1)或2)：1)所示的蛋白为将野生型MazF蛋白氨基酸序列中第48位半胱氨酸进行修饰，得到的蛋白；2)所示的蛋白为将1)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且由1)衍生的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.一种蛋白质，为如下1)或2)：1)所示的蛋白为将野生型MazF蛋白氨基酸序列中第48位半胱氨酸进行修饰，得到的蛋白；2)所示的蛋白为将1)所示蛋白的氨基酸序列末端添加标签序列且由1)衍生的蛋白质。2.根据权利要求1所述的蛋白质，其特征在于：所述修饰为氨基酸置换。3.根据权利要求2所述的蛋白质，其特征在于：所述氨基酸置换为将第48位的半胱氨酸置换为丙氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸或异亮氨酸。4.根据权利要求1-3中任一所述的蛋白质，其特征在于：所述野生型MazF蛋白来源于大肠杆菌；或所述野生型MazF蛋白来源于大肠杆菌，其氨基酸序列为序列2。5.编码权利要求1-4中任一所述蛋白的DNA分子。6.含有权利要求5所述DNA分子的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系。7.一种融合蛋白或蛋白组合物，包括抗毒素蛋白MazE和权利要求1-5中任一所述蛋白；或一种融合蛋白或蛋白组合物，包括抗毒素蛋白MazE部分片段和权利要求1-5中任一所述蛋白。8.根据权利要求7所述的融合蛋白或蛋白组合物，其特征在于：所述抗毒素蛋白MazE源于大肠杆菌；或所述抗毒素蛋白MazE部分片段为大肠杆菌MazE蛋白C端部分中包括但不限于可中和MazF毒性的氨基酸序列。9.权利要求1-4中任一所述蛋白或权利要求5所述的蛋白或权利要求6所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在剪切核酸中的应用；或权利要求1-4中任一所述蛋白在作为核酸内切酶中的应用；或权利要求5所述的蛋白或权利要求6所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在制备核酸内切酶中的应用；或权利要求1-4中任一所述蛋白或权利要求5所述的蛋白或权利要求6所述的表达盒、重组载体、重组菌或转基因细胞系在抑制细菌生长或促进细菌死亡中的应用；或权利要求1-4中...

【专利技术属性】
技术研发人员：车永胜，杜现礼，熊建伟，陈依军，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所，中国药科大学，
类型：发明
国别省市：北京,11