The invention discloses a primer combination for identifying duck hepatitis virus and its application. The primer combination provided by the invention comprises 6 kinds of DNA molecules, which are shown in sequence 1 to sequence 6. The primer combination can be applied to identify or assist the identification of whether the virus to be tested is duck hepatitis virus, and can also be used for detecting whether the tested sample is infected with duck hepatitis virus. The present invention has successfully established RT LAMP method for detection of duck hepatitis virus. The detection method has the advantages of high accuracy, high sensitivity and strong specificity.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物检测技术应用领域，具体涉及一种鉴定鸭肝炎病毒的引物组合及其应用。
技术介绍
鸭肝炎病毒(DuckHepatitisVirus，DHV)是小RNA病毒科、肠道病毒属的一种。可感染2周龄以下的小鸭，死亡率高达90％以上，是危害养鸭业最为严重的传染病之一。成年鸭、鸡、鹅都不感染。传统的病原鉴定方法包括中和试验和血清保护试验，这两种方法实用性强、特异性高，但所需时间较长，是目前用于诊断或血清流行病学调查的常规方法。其他血清学诊断方法还包括酶联免疫吸附试验(ELISA)和斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)，胶体金免疫电镜技术检测DHV，但这些检测存在耗时长、敏感性较低、不易标准化等缺点，结果可靠性并不是很高，且价格较为昂贵。目前已建立的DHVRT-PCR和荧光定量RT-PCR检测方法，虽然敏感性较高，但是需要使用昂贵的仪器和试剂等。环介导等温扩增技术(loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)通过识别靶序列上6个特异区域的引物，在一种具有链置换特性的DNA聚合酶——Bst酶(BstDNApolymerase)的作用下，能够在恒温条件下高效、快速、特异地扩增DNA靶序列。在反应体系中加入逆转录酶，即可检测RNA靶序列。在LAMP体系中加入荧光染料，可根据反应体系中的荧光信号强度来判断反应的进行情况。目前，LAMP技术已经被广泛应用于病原微生物的检测中，包括人类致病微生物、动植物病毒以及寄生虫所致疾病的诊断。对LAMP技术而言，引物设计是其核心。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种鉴定鸭肝炎病毒的引...
【技术保护点】
引物组合，由引物F3‑1、引物B3‑1、引物FIP‑1、引物BIP‑1、引物LF‑1和引物LB‑1组成；所述引物F3‑1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物B3‑1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物FIP‑1为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BIP‑1为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物LF‑1为如下(a9)或(a10)：(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与...
【技术特征摘要】
1.引物组合，由引物F3-1、引物B3-1、引物FIP-1、引物BIP-1、引物LF-1和引物LB-1组成；所述引物F3-1为如下(a1)或(a2)：(a1)序列表的序列1所示的单链DNA分子；(a2)将序列1经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列1具有相同功能的DNA分子；所述引物B3-1为如下(a3)或(a4)：(a3)序列表的序列2所示的单链DNA分子；(a4)将序列2经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列2具有相同功能的DNA分子；所述引物FIP-1为如下(a5)或(a6)：(a5)序列表的序列3所示的单链DNA分子；(a6)将序列3经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列3具有相同功能的DNA分子；所述引物BIP-1为如下(a7)或(a8)：(a7)序列表的序列4所示的单链DNA分子；(a8)将序列4经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列4具有相同功能的DNA分子；所述引物LF-1为如下(a9)或(a10)：(a9)序列表的序列5所示的单链DNA分子；(a10)将序列5经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列5具有相同功能的DNA分子；所述引物LB-1为如下(a11)或(a12)：(a11)序列表的序列6所示的单链DNA分子；(a12)将序列6经过一个或几个核苷酸的取代和/或缺失和/或添加且与序列6具有相同功能的DNA分子。2.权利要求1所述的引物组合的应用，为如下(b1)或(b2)或(b3)或(b4)：(b1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为鸭肝炎病毒；(b2)制备用于鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为鸭肝炎病毒的试剂盒；(b3)检测待测样本是否感染了鸭肝炎病毒；(b4)制备用于检测待测样本是否感染了鸭肝炎病毒的试剂盒。3.含有权利要求1所述引物组合的试剂盒；所述试剂盒的用途为如下(c1)或(c2)：(c1)鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为鸭肝炎病毒；(c2)检测待测样本是否感染了鸭肝炎病毒。4.权利要求3所述试剂盒的制备方法，包括将各条引物单独包装的步骤。5.一种鉴定或辅助鉴定待测病毒是否为鸭肝炎病毒的方法，为方法甲或方法乙：所述方法甲包括如下步骤：提取待测病毒的总RNA；以总RNA为模板，采用权利要求1所述引物组合进行RT-LAMP扩增反应，如果采用所述引物组合可以实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测病毒为或候选为鸭肝炎病毒，如果采用所述引物组合不能实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测病毒为或候选为非鸭肝炎病毒；所述方法乙包括如下步骤：检测待测病毒的总RNA是否含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA，如果所述总RNA中含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测病毒为或候选为鸭肝炎病毒，如果所述总RNA中不含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测病毒为或候选为非鸭肝炎病毒。6.一种检测待测样本是否感染了鸭肝炎病毒的方法，为方法丙或方法丁：所述方法丙包括如下步骤：提取待测样本的总RNA；以总RNA为模板，采用权利要求1所述引物组合进行RT-LAMP扩增反应，如果采用所述引物组合可以实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测样本感染或疑似感染了鸭肝炎病毒，如果采用所述引物组合不能实现以所述总RNA为模板的阳性扩增、待测样本未感染或疑似未感染鸭肝炎病毒；所述方法丁包括如下步骤：检测待测样本的总RNA是否含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA，如果所述总RNA中含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测样本感染或疑似感染了鸭肝炎病毒，如果所述总RNA中不含有权利要求1所述引物组合的靶序列相应的RNA、待测样本未感染或疑似未...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵丽健，王磊，王亚南，邢婉丽，陈翔，程京，
申请(专利权)人：博奥生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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