本发明专利技术涉及一种美拉诺坦－Ⅱ的合成工艺，特别涉及一种美拉诺坦－Ⅱ的固相合成工艺。解决现有成环多肽原料难以合成或去保护条件苛刻的问题，同时使成环在树脂上直接进行，反应简单。本发明专利技术的技术方案为：一种美拉诺坦－Ⅱ的固相合成工艺，其合成工艺步骤如下：Ｆｍｏｃ－Ｌｉｎｋｅｒ Ａｍｉｄｅ ＡＭ Ｒｅｓｉｎ作载体，然后按照Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相多肽合成的方法将氨基酸逐个连上，进行乙酰化，然后通过ＮａＯＨ溶液与二氧六环水解去掉氨基酸上的三氟乙酰基以及甲酯，再通过缩合剂直接在树脂上成环，最后用三氟醋酸：水：苯甲硫醚：二硫乙醇的混合溶液将肽从树脂上切下，得到的粗品美拉诺坦－Ⅱ，经制备ＨＰＬＣ纯化转醋酸盐，冷冻干燥得到醋酸美拉诺坦－Ⅱ。本发明专利技术提供了一种简单易行可规模合成醋酸美拉诺坦－Ⅱ的工艺。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种美拉诺坦-II的合成工艺，特别涉及一种美拉诺坦-II固相合成工艺。
技术介绍
美拉诺坦(Melanotan)是一种能保护皮肤的人工合成的多肽，是 天然alpha-MSH的复本，这种物质最早是在十几年甜，由亚利桑那州大学健康 科学中心细胞学和解剖学教授Mac Hadlly发现的。Hadly通过临床实验证明， Melanotan能使人的皮肤变黑，但并不影响头发，皮肤学教授Dr. Norman Levine通过研究，也得到同样结论。尽管人工合成的Melanotan和天然的alpha-MSH结构相似,但是Melanton的 有效作用却是天然alpha-MSH的1000倍，并且能更稳定，更持久地保持在人体内， 更重要的是在没有円晒和UV射线的情况下Melanotan能刺激黑细胞产生黑色素， 因为黑色素是防止日晒和有害的UV射线破坏皮肤细胞和DNA而导致皮肤疾病和 皮肤癌的重要物质。美国亚利桑那州癌症中心研究者表明，合成的Melanotan能 使皮肤变黑。经FDA批准，研究者将Melanotan II注射到男性志愿者身上,实验 证明Melanotan I和Menlanotan ]I注射到人体后，不通过R晒和其它UV光 线，也能使皮肤变黑除此之外，还惊奇地发现Melanotan II对治愈性功能衰 竭有很大作用。研究人员报导他们在早期试验中发现一种脑内产生激素的人工 合成品可以帮助勃起陣碍的男士维持勃起的时间。在实验中，有io位男士注射 了这种名为Melanotan II的药物。这10位男性均患有继发性勃起障碍，引起勃 起障碍的原因包括糖尿病、心脏病、外伤和髙血压。参考/;^e777a"0/7aJ/0Mn^ o//顺ot朋ce ^ esearc/ (2000) 12， Su卯l 4， S74-S79.基于以上的发现，近年 来Melanotan II及其类似多肽一直是科研的热点。Melanotan II (MT-II)，中文名美拉诺坦-II，的结构如式1所示，是一条側 链环的七肽，AC"Nle-Asp"HiS"D-Phe^Arg-T，LyS"NH2式l对于有侧链酰胺健成环的多肽--般通常釆用在树脂上进行成环的方法，参考 (1998) Synthesis of cyclic alpha-MSH peptides. Lett P印t Sci 5:205-208， 也有在液相中进行成环的。在树脂上进行成环合成比较方便，通常在Fmoc/fflu护基团可以用2n/n肼DMF溶液很方便的去除。另一组保护是用Fmoc-A印(0All)-0H, Fmoc-Lys(Aloc)-OH,通过Pd(O)，冰醋酸,A^甲基吗啡啉，氯仿去除。但上述的第 一种方法原料难以合成，成本非常高，而第二种方法脱保护试剂非常的贵，在这 里我们专利技术了一组原料比较容易得到，制各成本低并且脱保护也非常简单的保护 组合来合成Melanotan n。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种美拉诺坦-II的固相合成工艺。解决现有成 环多肽原料难以合成或去保护条件苛刻的问题，本专利技术的任务是选择一组保护 g团组合，使其满足(1)在多肽合成中具有稳定性；(2)原料比较容易制备 (3)同时，所选用的保护基团可以在比较温和的条件切除。本专利技术的技术方案 为一种美拉诺坦-II的固相合成工艺，其合成工艺步骤如下以Fmoc-Linker Amide AM Resin为起始树脂，通过Fmoc/tBu固相多肽合成的方法将Fmoc保护 的氨基酸逐个连上，其中A印用的是Fmoc-A印(OMe)-OH ， Lys用的是 F啦c-Lys(Tfa)-OH，其它氨基酸分别为Fmoc-Nle-OH， Fraoc-Arg(Pbf)_0H， Fmoc-D-Phe-0H， Fmoc-Trp(Boc)-OH， Fmoc-His(Trt)-OH，肇后脱掉Fmoc，用乙 酸酐与吡啶进行乙酰化，然后用NaOH的水与有机溶剂的混合液去掉A印上的甲 酯以及Lys上的三氟乙酰基团，通过縮合剂在树脂上直接成环,最后用三氟醱酸: 水:苯甲硫醚:二硫乙醇的混合溶液将肽从树脂上切下，得到的粗品，经制备型HPLC纯化，转醋酸盐后，冷冻干燥得到醋酸美拉诺坦-n 。本专利技术中一些常用的縮写具有以下含义 Fmoc:薪甲氧羰基 tfa:三氣乙酰基HOBt: l—羟基苯骈三啤Phe:苯丙氨酸 Asp:天冬氨酸 Tip:色氣酸 Nle:正亮氨酸 Lyss赖氨酸 Arg:精氨酸 His:组氨酸 Trt:三苯甲基Me: 甲基Pbf: 2， 2， 4,6， 7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基 Linker:连接剂HBTU:苯并三唑-l-四甲基六氟磷酸酯HATU: 0"(7-偶氮苯并三氣唑-l-氧)-N, N, N', N'-四甲基脲六氟磷酸酯HOAt: l-羟基-7-偶氣苯并三氮唑DIEA: 二异丙基乙胺DIC: N，N'-二异丙基碳二亚胺DMF: N， >f—二甲基酰胺Piperidine:六贫吡咬Ac20:醋酸酐Pyridine:吡啶Collidine: 2， 3, 5-三甲基吡捉Boc:叔丁氧羰基Amide AM Resin:氨甲基树脂TFA:三氟醋酸EDT:乙二硫醇NaOH:敏氣化钠MeOH:甲醇CH2C12: 二氣甲烷HPLC: (Varian 210高效液相色谱仪柱子Vydac C18 120A 25*300mm)Fmoc-Linker Amide AM Resin: Fmoc-Linker氨甲基树月旨Fmoc-AA: Fmoc保护的氨基酸合成路线如下<formula>complex formula see original document page 6</formula>从Fmoc-Linker Amide AM Resin丌始，通过Fmoc-AA/HBTU/HOBt/DIEA的方 法，脱帽用2096Piperidine的DMF ， 依次将Fmoc-Lys (Tfa)-OH , Fmoc-Trp(Boc)-OH， Fmoc-Arg(Pbf)-OH ， Fmoc-D-Phe-OH， Fmoc-His(Trt)-OH， Fmoc-A印(0Me)-0H ， Fmoc-Nle-OH连到树脂上，然后进行乙酰化，然后用1-2N NaOH的水溶液与二氧六环(1:1-1:4体积比)反应2-12小时，水解掉Lys侧 链上的tfa以及A印侧链上的甲酯，树脂洗涤后，通过縮合剂在树脂上直接成环。 我们选用了三种縮合试剂进行成环的研究分别是DIC， HBTU， HATU，縮合的时间 2-4小时。最后用6-10ml/克的三氟醋酸水苯甲硫醚二硫乙醇(92.5 : 2.5 : 2.5 : 2.5，为体积比)的混合液将肽从树脂上切下，得到的粗品经过HPLC 的纯化得到HPLC为98%以上的芙拉诺坦-11。经过我们的实验发现在水解去保 护时用1 N NaOH与二氧六环1 : 3 (体积比)反应2-12小时可以完全反应，最 后成环时DIC成环的效果不佳，而HATU的成环是最好的，时间3小时就可以 完成，检验反应的情况可以通过树脂的Kasie"est来判断，树脂颜色从紫蓝色变 为无色或淡黄色为反应完全。在小样的基本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种美拉诺坦－Ⅱ的固相合成工艺，其特征是包括以下步骤，首先使用Ｆｍｏｃ－ＬｉｎｋｅｒＡｍｉｄｅＡＭＲｅｓｉｎ作载体，然后按照Ｆｍｏｃ／ｔＢｕ固相多肽合成的方法将氨基酸逐个连上，进行乙酰化，然后通过ＮａＯＨ溶液与二氧六环水解去掉氨基酸上的三氟乙酰基以及甲酯，再通过缩合剂直接在树脂上成环，最后用三氟醋酸∶水∶苯甲硫醚∶二硫乙醇的混合溶液将肽从树脂上切下，得到的粗品美拉诺坦－Ⅱ，经制备ＨＰＬＣ纯化转醋酸盐，冷冻干燥得到醋酸美拉诺坦－Ⅱ。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，金健林，
申请(专利权)人：上海吉尔多肽有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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