多通道多肽固相合成方法技术

本发明专利技术公开了一种多通道多肽固相合成方法，按以下步骤来进行：第一步骤是连接步骤，第二步骤是树脂分装步骤；第三步骤是进行树脂溶胀，第四步骤是进行脱保护反应，第五步骤是洗涤树脂步骤，第六步骤是检测脱保护反应是否完成的步骤，第七步骤是进行偶合反应，第八步骤是检测偶合反应是否完成的步骤。本发明专利技术在使用时根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管归为同一组，从而为实现批量反应提供基础；本发明专利技术进一步设置出若干多肽合成管对应同一反应缸体的技术方案。与以往的合成装置及合成方法相比，具有突出的高效率优点，提高寻找效果最佳的多肽类物质的效率。

Multi-channel peptide solid-phase synthesis method

The invention discloses a multi-channel solid phase peptide synthesis method, according to the following steps: the first step is to connect the steps, the second step is the third step step filling resin; resin swelling, fourth steps of deprotection reaction, the fifth step is to wash the resin step, the sixth step is to detect the deprotection reaction is complete step seventh step is the coupling reaction, the eighth step is to test whether the complete coupling reaction steps. The present invention in use according to the coupling solution to the next step of the peptide synthesis tube group, the peptide synthesis requires the same pipe coupling solution into the same group, so as to provide the basis for realization of batch reaction; the technical scheme of the invention is further provided with a number of peptides corresponding to the same reaction cylinder tube the. Compared with the previous synthesis and synthesis methods, it has outstanding advantages of high efficiency, and improves the efficiency of finding the best polypeptide.

【技术实现步骤摘要】
多通道多肽固相合成方法
本专利技术涉及生物化学实验领域，尤其涉及一种多肽固相合成方法。
技术介绍
多肽固相合成是将保护氨基酸连接到固态树脂上，脱去保护基团，然后将下一个保护氨基酸与第一个氨基酸的残基反应并形成肽键，然后脱去第二个氨基酸的保护基团，再连接下一个氨基酸，这样循环下去使肽链增长。多肽固相合成中，固态树脂是必须使用的反应底物。多肽固相合成反应中，需要使用抽滤装置，抽滤装置包括有抽滤瓶和与抽滤瓶相连接的真空泵。多肽固相合成中，溶入活化剂的反应液为偶合溶液，溶入脱保护剂的反应液为脱保护溶液。在进行肽固相合成反应时，常常使用多肽固相合成管，在多肽固相合成管中加入树脂，先将树脂溶胀，然后交替加入脱保护溶液和偶合溶液进行合成反应。加入脱保护溶液时，树脂与脱保护溶液进行脱去保护基团的反应；加入偶合溶液时，树脂与偶合溶液中的带保护基团的氨基酸进行偶合反应。在多肽固相合成中，常常需要以一个母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽，如在研发多肽类药物时，需要以一种母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽，然后从各种衍生肽中寻找药效最佳的多肽类药物。在树脂上每连接一个氨基酸，都需要使用一种特定的与多肽的氨基酸序列相适应的偶合溶液，连接不同的氨基酸需要使用不同的偶合溶液。因此，在多肽固相合成的过程中，就需要多次更换反应液。在基于一种母肽制备多种衍生肽时，各种衍生肽需要的大部分偶合溶液是相同的，但是目前的多肽固相合成装置，在制备各衍生肽需要的偶合溶液相同时，也需要在制备不同的衍生肽时分别进行偶合反应，缺少能够批量进行多肽固相合成反应的装置以及方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种能够在制备不同的衍生肽时批量进行多肽固相合成反应的方法。为实现上述目的，本专利技术的多通道多肽固相合成方法使用多通道多肽固相合成装置来进行，多通道多肽固相合成装置包括用于盛装反应液的反应缸体，反应缸体底部连接有抽滤接管和氮气接管，氮气接管连接有氮气软管，氮气软管用于连接外置高压氮气瓶，氮气接管上设有氮气阀门，抽滤接管上设有抽滤阀门；抽滤接管连接有抽真空软管，抽真空软管用于连接外置的抽滤装置；反应缸体顶部设有气体进出管，反应缸体顶面连接有若干连接磨口，连接磨口的顶部呈上大下小的空心锥台形；每一连接磨口内分别插设有一多肽合成管，多肽合成管的底端插入反应缸体的下部且多肽合成管的底端设有砂芯滤芯；多肽合成管的中部设有磨砂连接部，磨砂连接部呈与连接磨口相适配的上大下小的空心锥台形；所述各多肽合成管的底端位于同一水平面，反应缸体内于各多肽合成管的下方设有氮气分气箱，氮气分气箱的顶面与各多肽合成管一一对应设有若干氮气分气口，氮气分气口处设有由下至上单向导通的单向阀；所述氮气接管伸入反应缸体内并与氮气分气箱相连接；本专利技术的多通道多肽固相合成方法按以下步骤来进行：第一步骤是连接步骤，将氮气软管与外置高压氮气瓶相连接，将抽真空软管与外置的抽滤装置相连接；第二步骤是树脂分装步骤，在多通道多肽固相合成装置的各多肽合成管中分别装入精确称量后的连接有相同或不同氨基酸残基的树脂；第三步骤是进行树脂溶胀，具体是：①将溶胀溶剂加入反应缸体；②将装有树脂的每个多肽合成管分别通过连接磨口插入同一反应缸体进行溶胀，多肽合成管支撑在连接磨口上且其底端高于氮气分气箱并位于氮气分气口的正上方；③打开高压氮气瓶的出气阀和氮气阀门，将氮气送入氮气分气箱；氮气分气箱内的氮气通过单向阀后进入反应缸体，氮气带动部分反应缸体内的液体通过砂芯滤芯进入多肽合成管，在反应中起到搅拌的作用，使液体与树脂充分接触；氮气同时通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出；溶胀30±10分钟，待树脂充分溶胀后，关闭氮气阀门；④进行抽滤操作，抽滤操作具体是打开抽滤阀门，使用塞子封闭气体进出管，启动抽滤装置，对反应缸体进行抽滤，将反应缸体内的液体从反应缸体内抽出；抽滤结束后关闭抽滤阀门；第四步骤是进行脱保护反应，具体是：①将脱保护溶液加入反应缸体；②打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的脱保护溶液与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行30-40分钟，关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；第五步骤是洗涤树脂步骤，本步骤是将溶剂（如DMF溶剂，甲醇溶剂或二氯化碳溶剂；DMF溶剂即N，N-二甲基甲酰胺溶剂）加入反应缸体中对树脂进行洗涤，打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的液体与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行1分钟，关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；本步骤重复进行六次；第六步骤是检测脱保护反应是否完成的步骤，具体是：通过茚三酮显色法检测各多肽合成管中的树脂的脱保护反应是否完成，对于未完成脱保护反应的树脂，重复第四和第五步骤；对于已完成脱保护反应的树脂，若固相合成反应未全部结束，则进行下一步骤；若固相合成反应已全部结束，则将树脂从各多肽合成管中取出，停止反应；本步骤是多肽固相合成方法的结束步骤。第七步骤是进行偶合反应，具体是：①对各多肽合成管进行区分，根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管归为同一组；②对于同一组装有树脂的多肽合成管，将该组中的每个多肽合成管分别通过连接磨口插入同一反应缸体，将偶合溶液加入反应缸体；③打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的液体与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行2-3小时；关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；然后进行第五步骤即洗涤树脂步骤，然后进行第八步骤；第八步骤是检测偶合反应是否完成的步骤，具体是：通过茚三酮显色法检测各多肽合成管中的树脂的偶合反应是否完成；对于未完成偶合反应的树脂，重复第七步骤以重新进行偶合反应；对于已完成偶合反应的树脂，则进行第四至第六步骤。所述溶胀溶剂为N，N-二甲基甲酰胺溶剂；所述树脂采用Wang树脂或Rink树脂。所述气体进出管设有两个，一个连接在反应缸体顶面中心处，另一个连接在反应缸体侧壁顶部。本专利技术设计了一种多通道多肽固相合成方法及专用的装置，进行多肽固相合成反应非常方便，而且通过将不同的多肽合成管同时插入同一反应缸体来进行批量反应，与以往相比大大提高了多肽固相合成的效率，节约了相应研究的时间。在以一种母肽为基础，合成多种突变位点不同的衍生肽时，与以往的合成装置及合成方法相比，具有突出的高效率优点，能够快速合成多种衍生肽，从而提高寻找效果（如药效）最佳的多肽类物质的效率。以往的多肽固相反应中，树脂和反应液均加入同一多肽固相反应管，砂芯滤芯则位于多固相反应管的中部。这种结构也限制了批量反应的可能性。本专利技术在使用时根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管归为同一组，从而为实现批量反应提供基础；本专利技术进一步设置出若干多肽合成管对应同一反应缸体的技术方案。这种分组的办法，以及多管对应同一缸体的结构，是专利技术人在经过长期低效重复反应实验后，经过创造性思考所提出来的，是实现批量反应、提高反应效率的关键。氮气分气箱的设置是专利技术人的另一创新之处，每一多肽合成管的底端（砂芯滤芯）均对应一个氮气本文档来自技高网...

【技术保护点】
多通道多肽固相合成方法，其特征在于：该方法使用多通道多肽固相合成装置来进行，多通道多肽固相合成装置包括用于盛装反应液的反应缸体，反应缸体底部连接有抽滤接管和氮气接管，氮气接管连接有氮气软管，氮气软管用于连接外置高压氮气瓶，氮气接管上设有氮气阀门，抽滤接管上设有抽滤阀门；抽滤接管连接有抽真空软管，抽真空软管用于连接外置的抽滤装置；反应缸体顶部设有气体进出管，反应缸体顶面连接有若干连接磨口，连接磨口的顶部呈上大下小的空心锥台形；每一连接磨口内分别插设有一多肽合成管，多肽合成管的底端插入反应缸体的下部且多肽合成管的底端设有砂芯滤芯；多肽合成管的中部设有磨砂连接部，磨砂连接部呈与连接磨口相适配的上大下小的空心锥台形；所述各多肽合成管的底端位于同一水平面，反应缸体内于各多肽合成管的下方设有氮气分气箱，氮气分气箱的顶面与各多肽合成管一一对应设有若干氮气分气口，氮气分气口处设有由下至上单向导通的单向阀；所述氮气接管伸入反应缸体内并与氮气分气箱相连接；本专利技术的多通道多肽固相合成方法按以下步骤来进行：第一步骤是连接步骤，将氮气软管与外置高压氮气瓶相连接，将抽真空软管与外置的抽滤装置相连接；第二步骤是树脂分装步骤，在多通道多肽固相合成装置的各多肽合成管中分别装入精确称量后的连接有相同或不同氨基酸残基的树脂；第三步骤是进行树脂溶胀，具体是：①将溶胀溶剂加入反应缸体；②将装有树脂的每个多肽合成管分别通过连接磨口插入同一反应缸体进行溶胀，多肽合成管支撑在连接磨口上且其底端高于氮气分气箱并位于氮气分气口的正上方；③打开高压氮气瓶的出气阀和氮气阀门，将氮气送入氮气分气箱；氮气分气箱内的氮气通过单向阀后进入反应缸体，氮气带动部分反应缸体内的液体通过砂芯滤芯进入多肽合成管，在反应中起到搅拌的作用，使液体与树脂充分接触；氮气同时通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出；溶胀30±10 分钟，待树脂充分溶胀后，关闭氮气阀门；④进行抽滤操作，抽滤操作具体是打开抽滤阀门，使用塞子封闭气体进出管，启动抽滤装置，对反应缸体进行抽滤，将反应缸体内的液体从反应缸体内抽出；抽滤结束后关闭抽滤阀门；第四步骤是进行脱保护反应，具体是：①将脱保护溶液加入反应缸体；②打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的脱保护溶液与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行30‑40分钟，关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；第五步骤是洗涤树脂步骤，本步骤是将溶剂加入反应缸体中对树脂进行洗涤，打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的液体与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行1分钟，关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；本步骤重复进行六次；第六步骤是检测脱保护反应是否完成的步骤，具体是：通过茚三酮显色法检测各多肽合成管中的树脂的脱保护反应是否完成，对于未完成脱保护反应的树脂，重复第四和第五步骤；对于已完成脱保护反应的树脂，若固相合成反应未全部结束，则进行下一步骤；若固相合成反应已全部结束，则将树脂从各多肽合成管中取出，停止反应；第七步骤是进行偶合反应，具体是：①对各多肽合成管进行区分，根据进行下一步反应所需要的偶合溶液对各多肽合成管进行分组，将需要的偶合溶液相同的多肽合成管归为同一组；②对于同一组装有树脂的多肽合成管，将该组中的每个多肽合成管分别通过连接磨口插入同一反应缸体，将偶合溶液加入反应缸体；③打开氮气阀门，进行氮气搅拌，使反应缸体内的液体与树脂充分接触；氮气通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出，本步骤持续进行2‑3小时；关闭氮气阀门，进行所述抽滤操作；然后进行第五步骤即洗涤树脂步骤，然后进行第八步骤；第八步骤是检测偶合反应是否完成的步骤，具体是：通过茚三酮显色法检测各多肽合成管中的树脂的偶合反应是否完成；对于未完成偶合反应的树脂，重复第七步骤以重新进行偶合反应；对于已完成偶合反应的树脂，则进行第四至第六步骤。...

【技术特征摘要】
1.多通道多肽固相合成方法，其特征在于：该方法使用多通道多肽固相合成装置来进行，多通道多肽固相合成装置包括用于盛装反应液的反应缸体，反应缸体底部连接有抽滤接管和氮气接管，氮气接管连接有氮气软管，氮气软管用于连接外置高压氮气瓶，氮气接管上设有氮气阀门，抽滤接管上设有抽滤阀门；抽滤接管连接有抽真空软管，抽真空软管用于连接外置的抽滤装置；反应缸体顶部设有气体进出管，反应缸体顶面连接有若干连接磨口，连接磨口的顶部呈上大下小的空心锥台形；每一连接磨口内分别插设有一多肽合成管，多肽合成管的底端插入反应缸体的下部且多肽合成管的底端设有砂芯滤芯；多肽合成管的中部设有磨砂连接部，磨砂连接部呈与连接磨口相适配的上大下小的空心锥台形；所述各多肽合成管的底端位于同一水平面，反应缸体内于各多肽合成管的下方设有氮气分气箱，氮气分气箱的顶面与各多肽合成管一一对应设有若干氮气分气口，氮气分气口处设有由下至上单向导通的单向阀；所述氮气接管伸入反应缸体内并与氮气分气箱相连接；本发明的多通道多肽固相合成方法按以下步骤来进行：第一步骤是连接步骤，将氮气软管与外置高压氮气瓶相连接，将抽真空软管与外置的抽滤装置相连接；第二步骤是树脂分装步骤，在多通道多肽固相合成装置的各多肽合成管中分别装入精确称量后的连接有相同或不同氨基酸残基的树脂；第三步骤是进行树脂溶胀，具体是：①将溶胀溶剂加入反应缸体；②将装有树脂的每个多肽合成管分别通过连接磨口插入同一反应缸体进行溶胀，多肽合成管支撑在连接磨口上且其底端高于氮气分气箱并位于氮气分气口的正上方；③打开高压氮气瓶的出气阀和氮气阀门，将氮气送入氮气分气箱；氮气分气箱内的氮气通过单向阀后进入反应缸体，氮气带动部分反应缸体内的液体通过砂芯滤芯进入多肽合成管，在反应中起到搅拌的作用，使液体与树脂充分接触；氮气同时通过各多肽合成管的顶端开口或者反应缸体上的气体进出管流出；溶胀30±10分钟，待树脂充分溶胀后，关闭氮气阀门；④进行抽滤操作，抽滤操作具体是打开抽滤阀门，使用塞子封闭气体进出管，启动抽滤装置，对反应缸体进行抽滤，将反应缸体内的液体从反应缸体内抽出；抽滤结束后关闭抽滤阀门；第四步骤是进行脱...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕名秀，刘广斌，卢奎，杨柳，李林璐，姜佳敏，
申请(专利权)人：河南工程学院，
类型：发明
国别省市：河南,41