本发明专利技术涉及亮丙瑞林的一种合成方法。解决目前采用固相合成亮丙瑞林从树脂上切割不安全，液相合成时间又长的问题。主要合成步骤：ａ．固相合成全保护的肽链ＰＧｌｕＲ－８；ｂ．合成原料Ｐｒｏ－ＮＨＥｔ．ＨＣｌ；ｃ．通过液相片断缩合合成全保护肽ＰＧｌｕＰ－９－ＮＨＥｔ，使用ＤＩＣ或ＢＯＰ，在１０℃－３０℃反应２４－３６小时后得到；ｄ．脱保护得亮丙瑞林粗品。本发明专利技术主要可用于合成Ｃ端为酰胺类的多肽。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种亮丙瑞林的合成方法，特别涉及一种亮丙瑞林的固液 合成法。
技术介绍
醋酸亮丙瑞林是促黄体生成释放激素(LH-RH)的高活性衍生物，它广泛用于治疗早熟、子宫内膜异位症、子宫肌瘤或绝经前乳腺癌等女性患者和前 列腺癌等男性患者。在以往的报道中有固相合成法合成亮丙瑞林(ref:Tetrahedron. 53,9, 1997,3179-3194),即采用类Merrifield树脂，从碳 端开始前四个氨基酸采用BOC法，后四个氨基酸釆用Fmoc法依次连接，最终使 用乙胺液体从树脂上切割下来。然而使用液体乙胺切割，需要在低温、带压力密 封下进行，在工业化生产中不方便，难以大规模生产。我们从这个角度出发研发 了这种固液相结合的合成方法，通过Fmoc固相法合成全保护的多肽片断，再通 过液相片断合成法完成肽链的合成，既保持固相合成的快速，又可以在非常温和 的条件下切割，便以大规模的制备。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种合成亮丙瑞林的方法，解决目前采用固相合 成法使用液体乙胺切割不方便、不安全及采用液相片断合成时间长的问题。本实用的技术方案包括如下步骤1. 选用Arg(pbf).Trt(2-Cl)-ClResin在有机溶剂中通过固相合成法合成序列 为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg的全保护多肽。有机溶剂为二氯 甲烷、N,N-二甲基甲酰胺和N,N-二甲基乙酰胺中的一种。2. BOC-Pro-OH溶解到适量的有机溶剂中，加入NMM或EOl，在-10°C -15。C加 入氯甲酸乙酯搅拌15 30min，加入乙胺盐酸盐和NMM或Et3N,室温搅拌过 夜后处理得到BOC-Pro-NHEt。合成的BOC-Pro-NHEt经2mol/L 二氧六环盐酸 气脱保护得到H-Pro-NHEt. HC1。有机溶剂为四氢呋喃和N， N-二甲基甲酰胺中 的一种。3. 全保护多肽PGluR-8和H-Pro-朋Et. HC1溶解到适量的有机溶剂中，加入HOBt 和薩或DIEA,冰浴下搅拌5 15min，加入BOP或DIC， 15 30min后撤掉 冰浴，10'C-3(TC搅拌24-36小时后得到全保护的PGluP-9-NHEt。有机溶剂为N, N-二甲基甲酰胺和N, N-二甲基乙酰胺溶剂中的一种。4.全保护肽PGluP-9-N冊t溶于切割液(V/W，三氟醋酸对甲苯酚水苯甲硫醚硫醇为82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)经脱保护得到亮丙瑞林粗品。本专利技术中一些常用的缩写具有以下含义BOC-Pro-OH: N-叔丁氧羰基-脯氨酸 DMF: N， N-二甲基甲酰胺 HOBt: 1-羟基苯并三唑 NMM: N-甲基吗啡啉BOC-Pro-N服t: N-叔丁氧羰基-脯氨酸乙胺H-Pro-NHEt:脯氨酸乙胺BOP:卡特縮合剂EtaN:三乙胺PGlu:焦谷氨酸His:组氨酸Trp:色氨酸Ser:丝氨酸Tyr:酪氨酸(D)-Leu: D-亮氨酸Leu:亮氨酸Arg:精氨酸Pbf :2， 2， 4, 6， 7-五甲基-2H-苯并呋喃-5-磺酰基Trt(2-CI)-CIResin: 2-氯-三苯基氯树脂Fomc-Leu-OH: N-芴甲氧羰基-亮氨酸collidine:三甲基吡啶DIC: 二异丙基碳化二亚胺DIEA:二异丙基乙胺piperide:哌啶Fmoc:荷甲氧羰基TFA:三氟醋酸CH2C12: 二氯甲垸tBu:叔丁基Trt:三苯基PGluR-8:序列为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg八肽的缩写 PGluP-9-NHEt:序列为PGlu-His-T卬-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg-Pro-NHEt九 肽的縮写合成路线如下<formula>complex formula see original document page 5</formula>本专利技术的有益效果是本专利技术通过固液结合合成亮丙瑞林，既避免了纯固相 合成从树脂上切割不方便、不安全，又简化了纯液相片断合成的繁琐，縮短了合 成时间。具体实施例方式以下将参照实例对本专利技术作进一步的详细描述，但本专利技术不限于这具体实例。实施例1,参照合成路线，5gArg(pbf).Trt(2-CI)-ClResin(load: 0.4,1/g) 置于接肽瓶浸泡在DMF溶液中，加入Fomc-Leu-0H(摩尔比1 : 3)， DIC(摩尔比1 :1) ， HOBT(摩尔比1:1)， collidine(摩尔比1:1)， 25。C下在摇床中震荡40min后，用DMF洗3次，頻2洗3次，再用20。/。piperide-DMF溶液脱去Fmoc，之后 用同样的方法依次反应直至PGLu连接上，用1%TFA- CH2Cl2溶液切割，得到3g PGlu-His(Trt)-Trp-Ser(tBu)-Tyr (tBu)-(D)-Leu-Leu-Arg(Pbf)-OH 。 B0C-Pro-0H13g (60扁1)溶解到麵1四氢呋喃中，加入NMM6. 6ml (60画1)， 在-10°C -15。C加入氯甲酸乙酯6ml (60mmo1),搅拌15 30min后，加入乙胺 盐酸盐4.8g (60腿o1)，室温搅拌过夜，后处理得到化合物BOC-Pro-NHEt。合成 的BOC-Pro-NHEt 6g经2raol/L 二氧六环盐酸气脱保护得到H-Pro-NHEt. HC1。 全保护的多月太PGluR-8 (1,1)和Pro-NHEt.HCl (l.lmmol)溶解到50mlDMF 中，加入HOBt(l咖ol), N固(2ramol),冰浴搅拌5 15rain，加入DIC (lmmol), 20min后撤掉冰浴，25'C搅拌34小时后处理得到全保护肽PGluP-9-NHEu全保 护肽PGluP-9-NHEt溶于切割液(V/V%，三氟醋酸:对甲苯酚水苯甲硫醚 硫醇为82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)经脱保护得到亮丙瑞林粗品650mg。亮丙瑞林粗品 经高效液相色谱纯化得到醋酸亮丙瑞林200mg, HPLC98%。实施例2，全保护的多肽PGluR-8 (2mmo1)和Pro-NHEt. HC1 (2.2咖o1)溶解到 100mlDMF中，加入H0Bt(2mrao1), DIEA(4ramo1)，冰浴搅拌5 15min，加入B0P (2mrao1)， 25min后撤掉冰浴，15。C搅拌28小时后处理得到全保护肽 PGluP-9-NHEt,全保护肽PGluP-9-N朋t溶于切割液(V/V%，三氟醋酸对甲苯酚水苯甲硫醚硫醇为82. 5 : 5 : 5 : 5 : 2. 5)经脱保护得到亮丙瑞林粗品1400mg。其余与实施例1相同。权利要求1、亮丙瑞林的固液合成法，包括以下步骤a.合成全保护的八肽PGluR-8选用Arg(pbf).Trt(2-Cl)-ClResin在有机溶剂中通过固相合成法合成序列为PGlu-His-Trp-Ser-Tyr-(D)-Leu-Leu-Arg的全保护八肽PGluR-8；b.以N-叔丁氧羰基-脯氨酸为原料合成脯氨酸乙胺盐酸盐N-叔丁氧羰基-脯氨酸溶解到适量的有机溶剂中，加入N本文档来自技高网...
【技术保护点】
亮丙瑞林的固液合成法，包括以下步骤：ａ．合成全保护的八肽ＰＧｌｕＲ－８：选用Ａｒｇ（ｐｂｆ）．Ｔｒｔ（２－Ｃｌ）－ＣｌＲｅｓｉｎ在有机溶剂中通过固相合成法合成序列为ＰＧｌｕ－Ｈｉｓ－Ｔｒｐ－Ｓｅｒ－Ｔｙｒ－（Ｄ）－Ｌｅｕ－Ｌｅｕ－Ａｒｇ的全保护八肽ＰＧｌｕＲ－８；ｂ．以Ｎ－叔丁氧羰基－脯氨酸为原料合成脯氨酸乙胺盐酸盐：Ｎ－叔丁氧羰基－脯氨酸溶解到适量的有机溶剂中，加入Ｎ－甲基吗啡啉或三乙胺，在－１０℃～－１５℃加入氯甲酸乙酯搅拌１５～３０ｍｉｎ，加入乙胺盐酸盐以及Ｎ－甲基吗啡啉和三乙胺中的一种，室温搅拌过夜后处理得到Ｎ－叔丁氧羰基－脯氨酸乙胺，合成的Ｎ－叔丁氧羰基－脯氨酸乙胺经二氧六环盐酸气脱保护得到脯氨酸乙胺盐酸盐；ｃ．全保护八肽ＰＧｌｕＲ－８和脯氨酸乙胺盐酸盐溶解到适量的有机溶剂中，加入１－羟基苯并三唑以及Ｎ－甲基吗啡啉和二异丙基乙胺中的一种，冰浴下搅拌５～１５ｍｉｎ，加入缩合剂，１５～３０ｍｉｎ后撤掉冰浴，１０℃－３０℃搅拌２４－３６小时后得到全保护的九肽ＰＧｌｕＰ－９－ＮＨＥｔ；ｄ．全保护九肽ＰＧｌｕＰ－９－ＮＨＥｔ溶于切割液经脱保护得到亮丙瑞林粗品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，朱琦，
申请(专利权)人：吉尔生化上海有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]
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