一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L‑谷氨酸的制备方法，主要解决原工艺中的复杂性，周期长，成本高，收率低等技术问题，本发明专利技术包括以下步骤：(1)、N‑芴甲氧羰基‑L‑谷氨酸的制备；(2)、N‑芴甲氧羰基‑L‑谷氨酸‑1‑苄酯的制备；(3)、S‑三苯甲基半胱胺的制备；(4)、N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L谷氨酸‑α‑苄酯的制备；（5）、N‑芴甲氧羰基‑γ‑（S‑三苯甲基‑半胱胺基）‑L谷氨酸的制备。本发明专利技术具有快速、高产、分离和纯化简单，且使用的溶剂为对环境友好的溶剂，适合大批量生产。

【技术实现步骤摘要】
一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法
本专利技术涉及多肽合成、药物多肽等领域，具体涉及一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法。
技术介绍
目前现有技术中，N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸及其中间体的制备方法路线为：将谷氨酸通过侧链羧基苄基保护做成h-glu(obzl)-OH，再经过和z-基团反应得到z-glu(obzl)-OH，在通异丁烯反应制备得到z-glu(obzl)-otbu，再加氢裂解得到h-glu-otbu，在和fmoc-基团反应得到fmoc-glu-otbu，再和hosu反应做成fmoc-glu(osu)-otbu，再和先期做好的S-三苯甲基半胱胺反应制得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-otbu，最后再脱除叔丁基得到fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH。此方案步骤繁琐，周期长，得率低，成本高，不适宜商业化生产。
技术实现思路
本专利技术技术目的在于克服原工艺中的复杂性，周期长，成本高，收率低等技术问题，提供了一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸及其中间体的制备方法，该方法简单易控制，反应周期较短，成本低，适宜于规模化生产。为了达到上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案是：一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）、将谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氢氧化钠搅拌，冰浴降温并加入氨基保护剂fmoc基团供体进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过酸化萃取、水洗，盐水洗，制得到fmoc-glu-OH；(2)、将fmoc-glu-OH和苄基供体混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加热反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加水稀释，并经乙酸乙酯洗涤，在加醋酸乙酯和柠檬酸酸化萃取，并经水洗，盐水洗，浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl；（3）、将2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入三苯甲基供体物，之后缓慢加入三甲基氯硅烷，机械搅拌反应，之后降温至4-6℃，并用质量百分含量20%的醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，晾干后制备得到S-三苯甲基半胱胺；（4）、将fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入缩合剂和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反应，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再经酸水洗、碱水洗，水洗，盐水洗，干燥，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl；（5）、将fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入钯炭，并通氢气反应，TLC跟踪监测进程，反应完成后，过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH，经NMR和MS验证，结构符合预期。所述步骤（1），谷氨酸和fmoc-基团的物质的量比为1:（1-1.5），反应的温度为：10-20℃，反应时间为6-12h，所述的fmoc-基团供体为fmoc-osu、fmoc-CL或fmoc-NH2中的一种。优选fmoc-基团供体为fmoc-osu。所述步骤（2），fmoc-glu-OH、苄基供体的物质的量比为：1:（1-1.6），反应温度为38-42℃，反应时间为22-26h，所述木瓜蛋白酶的用量为氨基酸质量的10%-15%，所述苄基供体为苯甲醇、溴化苄或氯化苄中的一种，优选溴化苄。所述步骤（3），2-巯基乙胺、三苯甲基供体物和三甲基氯硅烷的物质的量比为1:（1-1.5）:（0.9-1.3），所述反应温度为30-50℃，所述反应时间为2-6h，所述三苯甲基供体物为三苯甲醇、三苯基溴甲烷或三苯基氯甲烷中的一种，优选三苯基溴甲烷。所述步骤（4），fmoc-glu-obzl、缩合剂和S-三苯甲基半胱胺物质的量比的比为：1:（0.9-1.3）:（1-1.3），所述反应温度为5-15℃，所述反应时间14-18h，所述的缩合剂为HTBU、TBTU或HOBT中的一种，优选TBTU。所述步骤（5），所加的钯炭用量为氨基酸重量的5%-15%，所述反应时间为12-24h。所述TLC跟踪检测进程的条件：1）正丁醇:冰醋酸：水的体积比=4:1:1；2）三氯甲烷:甲醇:乙酸体积比=90:8:2。本专利技术的有益效果：本专利技术制备方法通过先制备成价格低廉的fmoc-glu-obzl来代替价格昂贵的fmoc-glu-otbu，并最终制得N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸，此方法简单易控制，大大简化了工艺，降低了成本，缩短了周期，适用于大规模生产，本专利技术制得N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸收率高，质量也有明显的提高。附图说明图1为本专利技术实施例1产物的色谱图谱。图2为本专利技术实施例1产物的质谱图谱。图3为本专利技术实施例1产物的核磁图谱。图4为本专利技术实施例2产物的色谱图谱。图5为本专利技术实施例3产物的色谱图谱。图6为本专利技术实施例4产物的色谱图谱。图7为本专利技术实施例5产物的色谱图谱。图8为本专利技术实施例6产物的色谱图谱。图9为本专利技术实施例6产物的质谱图谱。图10为本专利技术实施例6产物的核磁图谱。图11为本专利技术实施例7产物的色谱图谱。图12为本专利技术比较例产物的质谱图谱。具体实施方式下面结合具体实例对本专利技术进行详细的描述，但他们不是对本专利技术的进一步限制。实验所用主要检测仪器：1、岛津20A2、检验条件：色谱柱：4.6*250㎜，sinoCHromODS-BP5μm3、检测波长：220nm4、流动相：A：0.1%质量百分浓度三氟乙酸溶液B：0.1%质量百分浓度三氟乙酸乙腈混合溶液5、流速：1.0ml/min6、柱温：25℃7、岛津：LCMS-2020质谱仪8、瓦立安400兆核磁共振波普仪。实施例1，1.1、将100g（0.68mol）谷氨酸加入1L水和丙酮的混合液中，冰浴降温，再加入2N的氢氧化钠水溶液搅拌调节体系pH值为8-9，待温度小于5℃后，开始分批缓慢加入229g（0.68mol）的fmoc-osu，升温至10℃进行反应，TLC检测，反应12h后结束，后向体系中加入1L醋酸乙酯萃洗杂质3次，再加3L醋酸乙酯并加入盐酸酸化pH值为1-2，之后油相用1L酸水洗2次、1L水洗2次，1L盐水洗，无水硫酸钠干燥，之后浓缩结晶，抽滤制得到fmoc-glu-OH，烘干得到185.3g（73.8%，0.50mol）。1.2、将185.3g（0.50mol）fmoc-glu-OH和85.5g（0.5mol）溴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：/n（1）、将谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氢氧化钠搅拌，冰浴降温并加入氨基保护剂fmoc基团供体进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过酸化萃取、水洗，盐水洗，制得到fmoc-glu-OH；/n(2)、将fmoc-glu-OH和苄基供体混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加热反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加水稀释，并经乙酸乙酯洗涤，在加醋酸乙酯和柠檬酸酸化萃取，并经水洗，盐水洗，浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl；/n（3）、将2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入三苯甲基供体物，之后缓慢加入三甲基氯硅烷，机械搅拌反应，之后降温至4-6℃，并用醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，晾干后制备得到S-三苯甲基半胱胺；/n（4）、将fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入缩合剂和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反应，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再经酸水洗、碱水洗，水洗，盐水洗，干燥，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH...

【技术特征摘要】
1.一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）、将谷氨酸加入水和丙酮的混合液中，再加入氢氧化钠搅拌，冰浴降温并加入氨基保护剂fmoc基团供体进行反应，TLC跟踪检测进程，后经过酸化萃取、水洗，盐水洗，制得到fmoc-glu-OH；
(2)、将fmoc-glu-OH和苄基供体混合于二甲基甲酰胺中，加入木瓜蛋白酶并加热反应,TLC跟踪监测反应进程，反应好后加水稀释，并经乙酸乙酯洗涤，在加醋酸乙酯和柠檬酸酸化萃取，并经水洗，盐水洗，浓缩加石油醚结晶制得fmoc-glu-obzl；
（3）、将2-巯基乙胺加入冰醋酸中，升温，之后加入三苯甲基供体物，之后缓慢加入三甲基氯硅烷，机械搅拌反应，之后降温至4-6℃，并用醋酸钠水溶液调节体系pH值并搅拌结晶，之后将体系过滤，滤饼经水和乙醚冲洗，晾干后制备得到S-三苯甲基半胱胺；
（4）、将fmoc-glu-obzl加入THF中，机械搅拌并降温，之后加入缩合剂和三乙胺，之后再加入S-三苯甲基半胱胺反应，TLC跟踪监测反应进程，反应完后减压浓缩出去thf，之后加乙酸乙酯溶解，再经酸水洗、碱水洗，水洗，盐水洗，干燥，浓缩结晶得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl；
（5）、将fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-obzl加入甲醇中，之后加入钯炭，并通氢气反应，TLC跟踪监测进程，反应完成后，过滤去钯炭，之后浓缩至干加少许醋酸乙酯溶解并加石油醚结晶，之后抽滤烘干得fmoc-glu(NHCH2CH2Strt)-COOH。


2.根据权利要求1所述的一种N-芴甲氧羰基-γ-（S-三苯甲基-半胱胺基）-L-谷氨酸的制备
方法，其特征在于，所述步骤（1），谷氨酸和fmoc-基团的物质的量比为1:（1-1.5），反应的温度为：10-20℃，反应时间为6-12h，所述的fmoc-基团供体为fmoc-osu、fmoc-CL或fmoc-NH2中的一种...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐红岩，张家宝，付静晗，李仲才，朱银，曹世团，付等良，
申请(专利权)人：吉尔生化上海有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31