一种用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法，属于磷脂分离纯化技术领域。本发明专利技术以醇溶磷脂为原料，配成浓度３－５ｍｇ／ｍＬ的醇溶磷脂的乙醇溶液，以１ｍＬ／ｍｉｎ流速加入到Ｄ１１３－ⅢＦＣ树脂层析柱中，再用９５％乙醇以０．５－１ｍＬ／ｍｉｎ的速度洗脱，收集洗脱液，蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥得到淡黄色塑状体磷脂酰胆碱产品。本发明专利技术提出了离子交换树脂分离磷脂酰胆碱的方法，而且离子交换树脂可再生重复使用，成本低、较适合大规模工业化制备等特点。用本发明专利技术方法处理磷脂得到的产品，产品中磷脂酰胆碱（ＰＣ）含量为９４．０２％（ｗｔ％），产品得率为８０．７４％。
【技术实现步骤摘要】
，属于磷脂分离纯化
技术介绍
大豆磷脂是多种磷脂的混合物，其主要成分有磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)等物质。其中磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)，俗称卵磷脂，是一种在动植物中分布很广的天然两性表面活性剂，其化学结构式如下所示，它无毒、无刺激、易生物降解，具有特殊的生理功效。大豆磷脂中存在的不同磷脂具有结构类似性，PC比其他磷脂的极性强，在pH＝7的时候PC分子胆碱的N带一个正电荷，磷酸上的O带一个负电荷，整个分子呈电中性不带电荷。 PC的结构式磷脂酰胆碱具有重要的药物价值，从磷脂中分离磷脂酰胆碱也一直是国内外磷脂研究的重要课题，目前国内外学者研究的分离方法主要包括低碳醇法、超滤法、沉淀法、色谱法和超临界流体法等，其中，色谱法根据填料的不同可分为以下几种三氧化二铝柱层析法、硅胶柱层析法、离子交换柱层析法，上述方法主要是针对PC与PE这两种磷脂的分离，制得的PC产品纯度在90％左右，三氧化二铝柱对其他磷脂的吸附能力较强只能将极性较强的PC从柱上洗脱下来，洗脱的周期较短但过程中会产生溶血磷脂；硅胶柱可以实现PC、PE、PI等几种磷脂的分离，但是洗脱周期较长；离子交换树脂分离磷脂的研究较少，仅对树脂分离磷脂的可行性进行了研究，具体工艺参数方面的研究不够系统。根据分离物结构特点，提出了离子交换树脂分离磷脂酰胆碱的方法，而且离子交换树脂可再生重复使用，成本低、较适合大规模工业化制备等特点，目前未见国内外关于此方面的报道文章。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供，对用离子交换树脂分离纯化磷脂酰胆碱的吸附和洗脱的工艺进行了研究，实现磷脂酰胆碱的分离纯化，并确定了相应的工艺参数。本专利技术的技术方案用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法，是以醇溶磷脂为原料，配成浓度3-5mg/mL的醇溶磷脂的乙醇溶液，以1mL/min流速加入到D113-IIIFC树脂层析柱(2.8×50cm)中，再用95％乙醇以0.5-1mL/min的速度洗脱，收集洗脱液，蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥得到淡黄色塑状体磷脂酰胆碱产品。所用D113-IIIFC树脂使用前须经预处理，D113-IIIFC阳离子交换树脂预处理方法取处理树脂体积两倍的饱和食盐水，将树脂置于饱和食盐溶液中浸泡18-20小时，然后放尽食盐水，用清水漂洗净，使排出水不带黄色，再用树脂体积2倍的4％NaOH溶液，在其中浸泡2-4小时，放尽碱液后冲洗树脂直至排出水接近中性为止，最后用树脂体积2倍的5％HCl溶液浸泡4-8小时，放尽酸液，用清水漂至中性待用。所用树脂进行筛选时均需进行预处理，阳离子交换树脂的预处理方法同D113-IIIFC树脂使用前的预处理。阴离子交换树脂的预处理方法为饱和食盐水，取约等于处理树脂体积的两倍，将树脂置于食盐溶液中浸泡18-20小时，然后放尽食盐水，用清水漂洗净，使排出水不带黄色，其次再用5％HCl溶液，用量为树脂体积的2倍，在其中浸泡4-8小时，放尽酸液后冲洗树脂直至排出水接近中性为止。最后用4％NaOH溶液，用量为树脂体积的2倍，浸泡2-4小时，放尽碱液，用清水漂至中性待用。树脂再生用95％乙醇洗脱树脂柱直至流出液为无色，经多次使用后树脂吸附的杂质较多，颜色变深，可从柱上端依次加入2％NaOH和5％HCl水溶液洗脱，最后用水洗至流出液为中性即可再用。树脂筛选静态吸附吸附量和吸附率的测定分别准确称取经预处理的树脂2g放入150mL的锥形瓶中，再加入一定浓度的醇溶磷脂溶液30mL，静态吸附24h后，测定溶液中磷脂酰胆碱的浓度。按下式计算各种树脂的吸附量和吸附率。Q=(C0-Ce)×VW]]>E%=C0-CeC0×100%]]>其中 Q-吸附量(mg/g) E％-吸附率C0-吸附原液中磷脂酰胆碱浓度(mg/mL) V-吸附液的体积(mL)Ce-吸附平衡后溶液中磷脂酰胆碱浓度(mg/mL)W-树脂的重量(g)静态解吸率的测定树脂在分离天然物质中有效成分时是利用吸附的可逆性(即解吸)。由于树脂极性不同，对磷脂酰胆碱吸附强弱不同，解吸难易程度不同。因此，工业上希望树脂不仅吸附量大，还要求解吸率高，以保证有效成份最大限度的回收。解吸率测定是树脂试验的重要环节。取吸附饱和的6种不同型号树脂，依次用20％乙醇、40％乙醇、60％乙醇、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇30mL在恒温震荡器中震荡24h，过滤，取滤液定容，测定磷脂酰胆碱含量，按下式计算解吸率B%=C1×V1(C0-Ce)××100%]]>其中B％-解吸率 C1-解吸液中PC的浓度(mg/mL)V1-解吸后体积(mL) C0-吸附原液中PC的浓度(mg/mL)V-吸附液体积(mL)Ce-吸附平衡后溶液中PC的浓度(mg/mL)本专利技术的有益效果用本专利技术方法处理磷脂得到的产品，产品中磷脂酰胆碱(PC)含量为94.02％(wt％)，产品得率为80.74％。附图说明图1醇溶磷脂进样液浓度对吸附率的影响。图2进样液pH对吸附率的影响。图3不同浓度乙醇对PC的洗脱效果。图495％乙醇的洗脱曲线。图5洗脱流速对洗脱效果的影响。图6重复洗脱的次数。具体实施例方式实施例1树脂的筛选单位质量的树脂对磷脂酰胆碱的吸附量是设备设计的重要参数。树脂的吸附性能与被吸附分子的极性、大小以及吸附剂的极性、比表面积、孔径大小等因素有非常密切的关系。选择10种离子交换树脂，它们对磷脂酰胆碱的静态吸附情况见表1。由表1可知，201×7、201×4、D296具有较高的吸附率，其次是D113-IIIFC、001×7、SQD-88，而D001、SQD-61、D301-III、D318的吸附率较小。根据工业应用要求，选择吸附率较高的201×7、201×4、D296、D113-IIIFC、001×7、SQD-88六种树脂作静态解吸实验。用100％乙醇进行解吸，其解吸实验结果见表2。由表2可知，D113-IIIFC的解吸率较高，而吸附率很高的阴性离子交换树脂的解吸率极低。表1 10种离子交换树脂对磷脂酰胆碱的吸附量和吸附率 表2 6种树脂对磷脂酰胆碱的解吸率和解吸量 用不同浓度的乙醇对吸附饱和的D113-IIIFC进行静态解吸实验，结果见表3。由表3可见，60％、80％的乙醇对PC的解吸作用相对较大；浓度较低的乙醇对PC的解吸作用很小，这可能是因为低浓度的乙醇对PC的溶解性较小的原因。表3 不同浓度乙醇对D113-IIIFC的解吸率 吸附量、解吸率和选择性是大孔型离子交换树脂在分离天然产物时需要考虑的重要参数，它不仅要求吸附树脂具备较高的吸附量，同时还应该具有较高的解吸率和选择性。因此，从吸附量和解吸率综合考虑，在分离磷脂酰胆碱的过程中，D113-IIIFC是一种较为理想的吸附型离子交换树脂，因此选择D113-IIIFC树脂进行后续实验。实施例2进样液浓度对吸附效果的影响将不同浓度的醇溶磷脂溶液进行动态吸附实验，结果如图1所示。由图1可以看出，当醇溶磷脂浓度为3～5mg/mL时，树脂对PC的吸附率均本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用树脂层析法从磷脂中分离纯化磷脂酰胆碱的方法，其特征是以醇溶磷脂为原料，配成浓度３－５ｍｇ／ｍＬ的醇溶磷脂的乙醇溶液，以１ｍＬ／ｍｉｎ流速加入到Ｄ１１３－ⅢＦＣ树脂层析柱中，再用９５％乙醇以０．５－１ｍＬ／ｍｉｎ的速度洗脱，收集洗脱液，蒸发浓缩除去溶剂，真空干燥得到淡黄色塑状体磷脂酰胆碱产品。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：刘元法，王兴国，金青哲，汪燕，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]
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