银耳粗多糖的纯化工艺制造技术

一种银耳粗多糖的纯化工艺，其特征是：对银耳多糖进行提取、分离，并采用DEAE-纤维素和Sephadex G-200进行纯化，得到均一酸性多糖TPP2；以银耳多糖清除羟基自由基能力为指标，对银耳多糖分离纯化的每一步进行跟踪，并研究了酸性多糖TPP2体外抗氧化活性；实验表明银耳酸性多糖TPP2清除羟自由基的作用明显。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及的是一种银耳粗多糖的纯化工艺。
技术介绍
银耳在我国已有悠久的药用和食用历史。近年来，对银耳的化学成分及药理活性进行许多研究和大量的现代药理证明，多数药理活性都与银耳多糖有关，特别是酸性银耳多糖。酸性银耳多糖具有广泛的药理活性，能提高机体免疫力，增强机体耐缺氧能力，清除自由基，抑制肿瘤，能使人体产生抗体及干扰素，可治疗高血压、高血脂、糖尿病、乙型肝炎等多种现代医学中的疑难病症。本申请以椴木银耳为材料，对银耳多糖进行提取、分离、纯化；并以多糖清除羟基自由基能力为指标，初步纯化出均一多糖。为开发、利用银耳资源、探索银耳多糖药理活性的物质基础提供研究线索。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种银耳粗多糖的纯化工艺。本专利技术的目的是这样实现的：一、提取：称取一定量的椴木银耳，将其在70℃的烘箱中烘3h，粉碎成60目，用80%的乙醇浸泡银耳粉末，用减压抽滤将乙醇浸出物除去；然后加水1：10，在70℃条件浸提5h，8000r/min离心30min，取上清液，重复抽提一次，合并两次上清液，即得银耳多糖粗提液，然后浓缩银耳多糖粗提液，搅拌下加入无水醇至终浓度80%，静置2h，离心分离，采用Sevag法除蛋白，获得精制银耳多糖，干燥，称重，并进行清除羟基自由基能力的测定；二、分离纯化：1、DEAE-SepharoseFastFlow柱层析，层析柱2.6cm×30cm，介质为DEAE-SepharoseFastFlow离子交换纤维素，用蒸馏水平衡，粗多糖上样量200mg，上样体积20ml；流速1.5m/min；蒸馏水洗脱150ml后，以蒸馏水250ml和3mol/cNacl250ml样度洗脱，采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并多糖洗脱液，透析后冻干，备用；2、SephadexG-200凝胶过滤柱层析，溶解冻干品10mg于10ml蒸馏水中，层析柱2cm×80cm，介质为SephadexG-200，用蒸馏水洗脱，流速0.5ml/min；采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并糖峰收集液，冻干，得均一多糖。本专利技术的积极效果在于：多糖是继蛋白质、核酸之后的又一信息分子，由于其结构的不均一性，如分子质量、极性、组成等的不均一，因此它的分离纯化和纯度鉴定上存在一定的困难，也无专门的活力测定手段。我们在对多糖进行纯化过程中，根据清除羟基自由基的实验结果，发现随着蛋白质等杂质的去除，其清除羟基自由基的作用相应增强。具体实施方式一、提取：称取一定量的椴木银耳，将其在70℃的烘箱中烘3h，粉碎成60目，用80%的乙醇浸泡银耳粉末，用减压抽滤将乙醇浸出物除去；然后加水1：10，在70℃条件浸提5h，8000r/min离心30min，取上清液，重复抽提一次，合并两次上清液，即得银耳多糖粗提液，然后浓缩银耳多糖粗提液，搅拌下加入无水醇至终浓度80%，静置2h，离心分离，采用Sevag法除蛋白，获得精制银耳多糖，干燥，称重，并进行清除羟基自由基能力的测定；二、分离纯化：1、DEAE-SepharoseFastFlow柱层析，层析柱2.6cm×30cm，介质为DEAE-SepharoseFastFlow离子交换纤维素，用蒸馏水平衡，粗多糖上样量200mg，上样体积20ml；流速1.5m/min；蒸馏水洗脱150ml后，以蒸馏水250ml和3mol/cNacl250ml样度洗脱，采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并多糖洗脱液，透析后冻干，备用；2、SephadexG-200凝胶过滤柱层析，溶解冻干品10mg于10ml蒸馏水中，层析柱2cm×80cm，介质为SephadexG-200，用蒸馏水洗脱，流速0.5ml/min；采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并糖峰收集液，冻干，得均一多糖。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种银耳粗多糖的纯化工艺，其特征是：一、提取：称取一定量的椴木银耳，将其在70℃的烘箱中烘3h，粉碎成60目，用80%的乙醇浸泡银耳粉末，用减压抽滤将乙醇浸出物除去；然后加水1：10，在70℃条件浸提5h，8000r/min离心30min，取上清液，重复抽提一次，合并两次上清液，即得银耳多糖粗提液，然后浓缩银耳多糖粗提液，搅拌下加入无水醇至终浓度80%，静置2h，离心分离，采用Sevag法除蛋白，获得精制银耳多糖，干燥，称重，并进行清除羟基自由基能力的测定；二、分离纯化：1、DEAE‑Sepharose Fast Flow柱层析，层析柱2.6cm×30cm，介质为DEAE‑Sepharose Fast Flow离子交换纤维素，用蒸馏水平衡，粗多糖上样量200mg，上样体积20ml；流速1.5m/min；蒸馏水洗脱150ml后，以蒸馏水250ml和3mol/c Nacl250ml样度洗脱，采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并多糖洗脱液，透析后冻干，备用；2、SephadexG‑200凝胶过滤柱层析，溶解冻干品10mg于10ml蒸馏水中，层析柱2cm×80cm，介质为SephadexG‑200，用蒸馏水洗脱，流速0.5ml/min；采用分部收集，收集液测定多糖浓度，合并糖峰收集液，冻干，得均一多糖。...

【技术特征摘要】
1.一种银耳粗多糖的纯化工艺，其特征是：一、提取：称取一定量的椴木银耳，将其在70℃的烘箱中烘3h，粉碎成60目，用80%的乙醇浸泡银耳粉末，用减压抽滤将乙醇浸出物除去；然后加水1：10，在70℃条件浸提5h，8000r/min离心30min，取上清液，重复抽提一次，合并两次上清液，即得银耳多糖粗提液，然后浓缩银耳多糖粗提液，搅拌下加入无水醇至终浓度80%，静置2h，离心分离，采用Sevag法除蛋白，获得精制银耳多糖，干燥，称重，并进行清除羟基自由基能力的测定；二、分离纯化：1、DEAE-SepharoseFastFlow柱层析，层析柱2.6cm×3...

【专利技术属性】
技术研发人员：王跃进，
申请(专利权)人：郑州国手生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河南;41