一种北柴胡多糖片段的纯化工艺及其在制备抗炎药物中的应用制造技术

本发明专利技术属于天然药物化学领域，特别是涉及到一种天然多糖类抗炎药物分子的分离纯化及其应用。本发明专利技术利用水提醇沉、脱蛋白、酸水解、冷冻干燥、脱盐、亲和色谱等方法，从北柴胡中纯化具有拮抗P‑选择素功能的多糖片段。流式细胞术和蛋白互作分析实验结果表明北柴胡多糖片段可以有效阻断P‑选择素与HL‑60细胞的结合，并拮抗P‑选择素与PSGL‑1间的相互作用。平行板流动小室和急性腹腔炎小鼠模型实验结果表明，北柴胡多糖片段在剪切应力状态下对P‑选择素介导的HL‑60细胞黏附具有显著抑制作用，并能有效抑制小鼠腹腔液中白细胞的渗出。通过本方法制备的北柴胡多糖片段具有良好的抗炎活性，作为新型抗炎药物有着广阔的应用前景。

Purification process of Polysaccharide from Bupleurum chinense and application thereof in preparing anti-inflammatory medicine

The invention belongs to the field of natural medicinal chemistry, in particular to the separation, purification and application of natural polysaccharide anti-inflammatory drugs. The invention uses water extraction and alcohol precipitation, deproteinization, acid hydrolysis, freeze-drying, desalting, affinity chromatography, purified from Bupleurum chinense with antagonistic P selectin function polysaccharide fragment. Flow cytometry and protein interaction analysis of the experimental results show that the bupleurum polysaccharide fragment can effectively inhibit P selectin and HL 60 cells with P and antagonize P-selectin and PSGL interaction between 1. The experimental results of parallel plate flow chamber and acute peritonitis mice model showed that the bupleurum polysaccharide fragment under stress of P selectin mediated cell adhesion HL 60 has significant inhibitory effect on the shear, and can effectively inhibit leukocyte exudation in the peritoneal fluid of mice. The results showed that this method has good anti-inflammatory activity, and has a broad application prospect as a new anti-inflammatory drug.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然药物化学领域，特别是涉及到一种具有特异靶向性的天然抗炎药物分子的分离纯化及其应用。
技术介绍
炎症反应在人体防御病原体入侵以及修复自身损伤组织中扮演着相当重要的角色，它受到免疫系统高度精细的调控，适度的炎症反应可动员体内的防御力量克服对机体的损伤作用，一旦这种调节能力失常将会引起一系列非可控性炎症反应。近年来的研究发现，白细胞向组织中大量而持续的浸润是多种急慢性炎症疾病，如牛皮癣、系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、支气管哮喘、慢性阻塞性肺炎及动脉粥样硬化等发病的中心环节，预防和治疗上述炎症相关疾病始终是医学领域的难题。大量的研究表明P-选择素（P-Selectin）是参与炎症反应的重要黏附分子之一，它可以作为抗炎药物研发的新靶点。炎症反应是一个多步骤的过程，其中白细胞在血管内皮上的动态黏附和血管渗出是炎症反应的重要环节，其分子基础在于白细胞与内皮细胞表面黏附分子间的相互作用。P-选择素是炎症部位血管内皮早期表达的参与介导白细胞与血管内皮起始识别与滚动黏附的关本文档来自技高网...

【技术保护点】
拮抗P‑选择素功能的北柴胡多糖片段的制备方法，其特征在于具体步骤是：将烘干的北柴胡粉碎过筛，经乙醇脱脂后，残渣利用水提醇沉法提取粗多糖，经反复冻融、酶法及Sevag法联合脱蛋白，冷冻干燥，将多糖样品置于具塞瓶中并加入0.1～1M三氟乙酸溶液，40～100℃条件下水解10～240分钟，无水甲醇旋蒸，冷冻干燥, 得到的酸水解产物上样到经缓冲液平衡处理的重组人P‑选择素/Fc嵌合体蛋白（rhP‑Fc）偶联的Sepharose Protein A 层析介质上，分别利用低盐洗脱液和高盐洗脱液洗脱样品，收集高盐洗脱部分，样品经脱盐、冷冻干燥后得到拮抗P‑选择素功能的北柴胡多糖片段。

【技术特征摘要】
1.拮抗P-选择素功能的北柴胡多糖片段的制备方法，其特征在于具体步骤是：
将烘干的北柴胡粉碎过筛，经乙醇脱脂后，残渣利用水提醇沉法提取粗多糖，经反复冻
融、酶法及Sevag法联合脱蛋白，冷冻干燥，将多糖样品置于具塞瓶中并加入0.1～1M三氟乙
酸溶液，40～100℃条件下水解10～240分钟，无水甲醇旋蒸，冷冻干燥,得到的酸水解产物
上样到经缓冲液平衡处理的重组人P-选择素/Fc嵌合...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟海滨，孙新，
申请(专利权)人：北华大学，
类型：发明
国别省市：吉林;22