采用亲和层析法生产高纯度胰蛋白酶的方法技术

本发明专利技术涉及采用亲和层析法生产高纯度胰蛋白酶的方法，包括生产用原料获取，原料粉碎、提取蛋白，分级盐析、酶原沉淀，粗品酶解，亲和层析分离纯化，超滤浓缩除菌，真空冷冻干燥得到成品。与现有技术相比，本发明专利技术体现出了亲和层析法生产胰蛋白酶的优越性，有利于工艺的简化和质量的可控，降低了生产成本，提高了产品品质，以较高的收率得到纯度很高的产品(＞3000单位/毫克)，大大提高了产品的市场竞争力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物制药领域，涉及到药用蛋白酶的生化分离技术，尤其是涉及一种。
技术介绍
胰蛋白酶是从牛胰腺或猪胰腺中分离纯化得到的一种蛋白酶。它在药理和临床上的功用主要有分解液化血凝块、脓性分泌物、坏死组织等，能使脓液变稀，易于引流并能促进伤口愈合。国内提取胰蛋白酶的工艺长期以来一直采用多重结晶结合透析的工艺，多重结晶工艺复杂、纯化能力弱，透析工艺耗时长、不便于规模化生产，以这种传统工艺生产的产品活性一般在2000-2500单位/毫克，最高只能达到2700单位/毫克左右。根据分析，胰蛋白酶工艺未获得重大突破的原因有二 一是生产厂家的工艺惯性，工艺一旦稳定不轻易变动；二是亲和层析技术本身的技术难度使得开发以亲和层析工艺来制备胰蛋白酶的技术不是那么容易。
技术实现思路
本专利技术的目的就是为了克服上述现有技术存在的缺陷而提供一种工业化的高效手段。本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现，其特征在于，该方法包括以下步骤(I)获取生产用原料将新鲜的牛胰或猪胰进行冷冻保存，得到冷冻原料；(2)原料粉碎、提取蛋白用粉碎机将冷冻原料直接粉碎成浆状，加入三倍体积预冷的O. 25N硫酸溶液，控制温度为本文档来自技高网...

【技术保护点】
采用亲和层析法生产高纯度胰蛋白酶的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)获取生产用原料：将新鲜的牛胰或猪胰进行冷冻保存，得到冷冻原料；(2)原料粉碎、提取蛋白：用粉碎机将冷冻原料直接粉碎成浆状，加入三倍体积预冷的0.25N硫酸溶液，控制温度为4℃搅拌提取3？5h，放置过夜，次日将提取液进行固液分离，在清液中加入硫酸铵至30％饱和度，并加入硅藻土助滤，控制温度为4℃放置过夜后过滤，得到的清液即为提取液；(3)分级盐析、酶原沉淀：在提取液中再补充硫酸铵至70％饱和度，控制温度为4℃放置过夜，次日吸取上清液弃去，用离心法收集底层沉淀，用1.5倍重量的冰水溶解沉淀，加入0.5倍重量的饱和硫酸铵溶...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：叶昀，林克，王洪森，朱吉源，
申请(专利权)人：上海林叶生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：