一种规模化质粒纯化的联合液相层析分离方法技术
Combined liquid chromatography separation method for large-scale plasmid purification
The invention provides a method for purification of plasmid DNA vaccine pDNA pharmaceutical grade scale preparation, the method of combined application of granular medium column liquid chromatography system with fixed overall development (Monoliths) column liquid chromatography separation system, give full play to the advantage of the two complement each other to obtain the outstanding effect, has good practical value.
【技术实现步骤摘要】
一种规模化质粒纯化的联合液相层析分离方法
本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及基因疫苗、基因治疗所用质粒的纯化分离工艺，更具体地说，涉及规模化质粒纯化的联合液相层析分离方法。技术背景质粒(pDNA)核酸疫苗是正在开发的新型疫苗，具有诱导机体产生细胞免疫应答的优点，对于治疗目前没有有效疫苗的慢性乙型肝炎、艾滋病、结核病、癌症等需要诱导细胞免疫力的疾病具有良好应用前景，质粒纯化技术也从实验室阶段向实用产业化阶段发展。质粒是大肠杆菌细胞内能独立于染色体进行复制和表达的环形DNA。工程质粒是将大肠杆菌质粒经基因工程改造，在其中插入了编码病原体保护性抗原蛋白的编码基因，和/或优选的免疫增强性细胞因子编码基因等。将纯化的工程质粒注射入人体肌肉等部位，能在相关抗原加工处理细胞(AntigenPresentCell,APC)或肌肉细胞中表达所编码的抗原,诱导机体产生体液和细胞免疫应答反应来抵御消灭病原体和癌细胞。迄今较好而实用的质粒纯化方法的发展主要有：1)采用Qiagen公司首先提出的硅胶吸附法质粒提取试剂盒进行纯化，该方法必须采用得自牛胰腺的牛RNAse酶和能专一结合内毒...
【技术保护点】
一种用于药物级核酸pDNA疫苗规模化制备的质粒纯化方法，其特征是联合应用了颗粒介质液相分离系统与的整体柱液相层析分离系统，所述方法包括以下步骤：1)对宿主大肠杆菌的碱裂解液进行超滤浓缩；2)在中压液相层析分离装置中，将浓缩裂解液加载到颗粒介质凝胶过滤柱进行层析分离，收集第一峰质粒组分，去除后续的RNA大峰；3)将所得质粒组分加载到CIM C4疏水整体柱或氨基酸‑DNA亲和整体柱进行层析分离，洗涤去除主要杂质，洗脱收集超螺旋质粒组分；4)将所得超螺旋质粒组分加载到CIM DEAE离子交换整体柱进行层析分离，洗涤去除残留杂质，洗脱收集得到纯化的超螺旋质粒组分。
【技术特征摘要】
1.一种用于药物级核酸pDNA疫苗规模化制备的质粒纯化方法，其特征是联合应用了颗粒介质液相分离系统与的整体柱液相层析分离系统，所述方法包括以下步骤：1)对宿主大肠杆菌的碱裂解液进行超滤浓缩；2)在中压液相层析分离装置中，将浓缩裂解液加载到颗粒介质凝胶过滤柱进行层析分离，收集第一峰质粒组分，去除后续的RNA大峰；3)将所得质粒组分加载到CIMC4疏水整体柱或氨基酸-DNA亲和整体柱进行层析分离，洗涤去除主要杂质，洗脱收集超螺旋质粒组分；4)将所得超螺旋质粒组分加载到CIMDEAE离子交换整体柱进行层析分离，洗涤去除残留杂质，洗脱收集得到纯化的超螺旋质粒组分。2.如权利要求1所述的联合液相层析质粒纯化方法，其中第1)步所述超滤浓缩采用截留分子量100kD-500kD的常规超滤装置，将细菌碱裂解液浓缩5-10倍。3.如权利要求2所述的质粒纯化方法，其中所述常规超滤装置选自PES或改性PES材质制成的切向流中空纤维超滤装置。4.如权利要求2所述的质粒纯化方法，其中所述超滤浓缩过程中通过渗滤洗滤将细菌裂解液浓缩8-10倍。5.如权利要求1所述的质粒纯化方法，其中第2)步采用的颗粒介质凝胶是高度交联的琼脂糖凝胶介质，凝胶过滤柱的平衡和洗涤液为TE液，加载的浓缩裂解液体积为柱体积的10-35...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘庆良，李忠明，柯尊阳，
申请(专利权)人：固安鼎泰海规生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13
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