一种纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法技术

一种纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法属于酶固定化技术领域。该方法以螯合镍离子的纳米磁球为载体，以融合了锚定域的荧光蛋白(GFP和DsRed)为模型代替融合了锚定域的酶，利用基因重组构建的包含N端His标签和黏连蛋白(A和C)的支架蛋白为中介，通过Ni

Nano magnetic ball directional proportional controllable enzyme fixing method

The invention relates to a nano magnetic ball directional proportional controllable enzyme fixing method, belonging to the field of enzyme immobilization technology. In this method, nano magnetic sphere nickel chelate ion as the carrier, with the fusion of fluorescent protein anchoring domain (GFP and DsRed) for the model to replace the fusion of anchoring domain of the enzyme, constructed by gene recombination including N His tags and laminin (A and C) scaffold protein mediated by Ni

【技术实现步骤摘要】
一种纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法
本专利技术属于酶固定化
，具体地涉及一种多酶的固定化方法，尤其涉及一种用于酶级联反应中需要两种不同比例的酶催化反应的多酶固定化方法。
技术介绍
酶是一种能够降低反应的活化能并提高反应速率的生物催化剂。固定化酶具有显著的催化性能和可重复利用性，因而，其在绿色应用和可持续应用中具有巨大的潜力，特别是在工业应用中表现尤为明显。现在已经有很多关于努力开发有效的固定酶的策略的报道，其中大多数主要集中在单一酶的固定化。然而，在许多情况下，单个酶不能完全催化反应，而是需要多个酶在级联反应中协同作用，因此越来越多的人开始对通过多酶共固定来催化生物转化感兴趣。将多酶在载体表面进行共固定,充分地利用不同酶种的催化特性,提高中间产物的运转浓度,既能扩展酶催化的应用范围,又可以提升多酶体系的整体反应效率,在很大程度上克服了单酶反应体系单一催化的局限性。虽然已经开始有人探索用于共固定多酶的不同策略，但其中大多数方法仍是基于单一酶固定化开发的技术。通常，这些方法的主要缺点是难以在共固定期间将一种酶与另一种酶区分开，因为很多酶具有共同的结构特征。因此，共定位的酶分子的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法，其特征在于：利用纳米磁球表面螯合的Ni

【技术特征摘要】
1.一种纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法，其特征在于：利用纳米磁球表面螯合的Ni2+和支架蛋白的His标签之间的亲和吸附作用，把支架蛋白固定在纳米磁球上；依据支架蛋白上黏连蛋白和锚定域的特异性吸附作用，将融合了锚定域的酶固定在支架蛋白上；通过控制支架蛋白上黏连蛋白的种类、数量和排序，实现酶的定向、比例可控吸附。2.根据权利要求1所述的纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法，其特征在于：用于需要不同数量比的多酶的级联反应中。3.根据权利要求1所述的纳米磁球定向比例可控固定多酶的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)构建重组支架蛋白；(2)构建融合锚定域的荧光蛋白；(3)将支架蛋白和螯合Ni2+的磁球混合培养，使支架蛋白固定在磁球上；(4)将支架蛋白处理过的纳米磁球用磁铁分离，之后和融合了锚定域的荧光蛋白混合吸附，加入CaCl2,使其终浓度为5mM～10mM，使荧光蛋白复...

【专利技术属性】
技术研发人员：范立海，岳艺，黎梅，陆洋阳，谭天伟，
申请(专利权)人：北京化工大学，
类型：发明
国别省市：北京,11