The invention discloses a method for extraction of nucleic acid, magnetic beads method including: lysis buffer in biological samples, isolated nucleic acid cleavage in biological samples; nucleic acid binding with lysis buffer in the nano magnetic beads, in the external magnetic field, the formation of beads nucleic acid complexes; add washing buffer to bead nucleic acid in the compound, the bead nucleic acid compound centrifugal washing to remove impurities, beads nucleic acid complexes on the magnetic beads nucleic acid complexes were collected after washing; added to the beads nucleic acid complexes after washing in the elution buffer, and add to the mixture of beads inhibitor; direct nucleic acid complexes and the elution buffer for subsequent fluorescence quantitative PCR reaction. The invention uses centrifugal magnetic frame instead of adsorption beads, the eluent and magnetic separation, according to the different types of nucleic acid can set different speed and time, the eluent and the beads are thoroughly separated, improve the extraction concentration and purity.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于核酸提取
,特别涉及磁珠法核酸提取方法。
技术介绍
磁珠法核酸提取为运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后,制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠。该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合。利用氧化硅纳米微球的超顺磁性,在Chaotropic盐(盐酸胍、异硫氰酸胍等)和外加磁场的作用下,能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中的核酸和RNA分离出来,可应用于临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、分子生物学研究等多种领域。磁珠法核酸提取一般可以分为四步:裂解—结合—洗涤—洗脱。与传统核酸提取方法相比,磁珠法核酸提取具有以下优势:1)、能够实现自动化、大批量操作,目前已有96孔的核酸自动提取仪,用一个样品的提取时间即可实现对96个样品的处理,这一特点明显优于其他的提取方法。2)、操作简单、用时短,整个提取流程只需四步,大多可以在36-40分钟内完成,整个提取流程只有四步,大多可以在36-40分钟内完成。3)、安全无毒,不使用传统方法中的苯、氯仿等有毒试剂,对实验操作人员的伤害大大降低。4)、磁珠与核酸的特异性结合使得提取的核酸的纯度和浓度都得到提升。现有技术中,磁珠核酸提取方法,在提取过程中要经过多次的洗脱和洗涤,核酸DNA/RNA在提取过程中容易损失,影响最终提取核酸DNA/RNA的纯度和浓度。在向磁珠-核酸复合物中加入洗涤缓冲液后,洗涤去除磁珠-核酸复合物上的杂质时,要应用到外部磁场的作用,易造成洗涤液和磁珠-核酸复合物分离不完全,DNA纯度和浓度较低,最终提取的样本不能完全满足试验 ...
【技术保护点】
一种磁珠法核酸提取方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、在生物样品中加入裂解缓冲液,裂解分离出所述生物样品中的核酸DNA/RNA;所述核酸DNA/RNA与所述裂解缓冲液中的纳米磁珠结合,在外部磁场作用下,形成磁珠‑核酸复合物;S2、向所述磁珠‑核酸复合物中加入洗涤缓冲液,在预设转速和预设时间下将所述磁珠‑核酸复合物中进行离心洗涤,去除磁珠‑核酸复合物上的杂质,收集洗涤后的磁珠‑核酸复合物;重复离心洗涤一次;S3、向所述洗涤后的磁珠‑核酸复合物中加入洗脱缓冲液,并加入去抑制剂;直接将磁珠‑核酸复合物和洗脱缓冲液的混合物进行后续的荧光定量PCR反应。
【技术特征摘要】
1.一种磁珠法核酸提取方法,其特征在于,包括以下步骤:S1、在生物样品中加入裂解缓冲液,裂解分离出所述生物样品中的核酸DNA/RNA;所述核酸DNA/RNA与所述裂解缓冲液中的纳米磁珠结合,在外部磁场作用下,形成磁珠-核酸复合物;S2、向所述磁珠-核酸复合物中加入洗涤缓冲液,在预设转速和预设时间下将所述磁珠-核酸复合物中进行离心洗涤,去除磁珠-核酸复合物上的杂质,收集洗涤后的磁珠-核酸复合物;重复离心洗涤一次;S3、向所述洗涤后的磁珠-核酸复合物中加入洗脱缓冲液,并加入去抑制剂;直接将磁珠-核酸复合物和洗脱缓冲液的混合物进行后续的荧光定量PCR反应。2.如权利要求1所述的磁珠法核酸提取方法,其特征在于:所述裂解缓冲液中的高浓度盐包括以下成分:2-3M盐酸胍、1-3M碘化钠和5-10mMEDTA;所述裂解缓冲液还包括以下成分:1-2%曲拉通X-100,1-2%吐温-20,1-2%SDS,30-40%糖原,5-10%磁珠;所述裂解缓冲液的PH值=7.4。3.如权...
【专利技术属性】
技术研发人员:徐赛涛,吴勇聪,温小媛,陶瑞,
申请(专利权)人:解码上海生物医药科技有限公司,
类型:发明
国别省市:上海;31
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