一种利用重组基因工程菌获得链霉菌胰蛋白酶酶原的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用重组基因工程菌获得链霉菌胰蛋白酶酶原的方法，本发明专利技术通过化学全合成胰蛋白酶酶原基因连接到毕赤酵母GS115（Pichia?pastoris）染色体上，构建了一株高效分泌表达胰蛋白酶酶原的基因工程菌，发酵3～4天后，可得到链霉菌胰蛋白酶酶原的表达，解决了长期无法从野生灰色链霉菌中获得胰蛋白酶酶原的问题。应用该菌种生产胰蛋白酶酶原，产量高、工艺简单、便于基础中进行链霉菌晶体结构研究及其激活机理研究之用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及与应用，特别是一种高产胰蛋白酶酶原的基因工程菌及构建方法与应用，属于生物

技术介绍
链霉菌胰蛋白酶(SGT) (E. C. 3. 4. 21. 4)是一种来源于灰色链霉菌的碱性丝氨酸蛋白酶，其在氨基酸编码基因结构上属于pre-pro-protease类型,而通过对灰色链霉菌的基因组测序发现编码SGT的基因SprT中，除去SGT自身信号肽和链霉菌活性胰蛋白酶，在其成熟酶N端还具有一段前导肽(-Ala-Pr0-Asn-Pr0-)(图I);通过前人对链霉菌胰蛋白酶在灰色链霉菌中的分泌，纯化，氨基酸测序以及相关生理生化功能的研究，发现在链霉菌气生菌丝和营养菌丝分化时，链霉菌胞外开始出现活性胰蛋白酶，纯化和氨基酸测序也仅 能获得活性的胰蛋白酶的信息，而带有前导肽的链霉菌胰蛋白酶酶原的活化和活化机理却未有见到报道，并且对于链霉菌胰蛋白酶酶原的获得也未有报道，因此建立获得在N端具有野生前导肽的胰蛋白酶酶原的方法，对于链霉菌胰蛋白酶酶原晶体结构的研究，以及其激活机理的研究具有至关重要的意义。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种产胰蛋白酶酶原(trypsinoge本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用重组基因工程菌获得链霉菌胰蛋白酶酶原的方法，其特征在于以重组基因工程菌毕赤酵母GS115为种子，活化后按10%的接种量接入发酵培养基中中，控制发酵温度30℃，摇床转速200r/min，发酵3？4天，所述重组基因工程菌染色体上携带有胰蛋白酶酶原的基因。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈坚，令桢明，堵国成，康振，李江华，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：