【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种肝靶向聚合物囊泡的制备方法及其应用，属于高分子材料和医学工程领域。
技术介绍
1、自然界中存在的细胞外囊泡是一类由细胞分泌的具有双层磷脂膜结构的微小囊泡，在细胞间的信息交换中承担着重要作用。细胞外囊泡可包裹质粒dna，mrna，酶和神经递质等，通过其表面相关受体和特定的细胞间粘附因子，特异性识别靶细胞，进行信号转导，从而参与靶细胞间的功能调控。
2、基于此，在高分子领域，通过两亲性聚合物自组装技术，可以得到具有双层膜和空腔结构的聚合物囊泡，且更稳定更具功能设计性，因此具有更加广泛的应用范围。
3、刺激响应型聚合物囊泡指的是能够对外界刺激做出响应的聚合物囊泡。这些外界刺激包括温度、ph、光、超声、磁场和氧化还原等多种类型。在外界刺激条件改变的情况下，刺激响应型聚合物囊泡的组成、形态或者尺寸会随之发生改变。这种刺激响应行为使得该类型的聚合物囊泡被广泛应用在药物递送、微纳反应器和诊断造影剂等领域。
4、肝脏类疾病是一种严重威胁人类生命健康的重大疾病，且肝脏是肿瘤好发部位之一。肝脏恶性肿瘤的治疗目前主要是手术治疗联合放、化疗。手术治疗存在操作复杂，风险性高，创伤较大等问题，放、化疗通常伴随着严重的毒副作用，预后较差。目前所应用的化疗药物均属于细胞毒性药物，由于传统药物剂型和全身给药的方式，使得药物在病灶部位的血药浓度较低，治疗效果较差。
5、因此，开发肝靶向药物递送载体对增强病灶部位的药物富集，降低药物毒副作用等方面至关重要。
6、目前肝靶向药物递送载体主要以
技术实现思路
1、针对现有技术存在的缺陷与不足，本专利技术主要目的在于提供一种肝靶向聚合物囊泡的制备方法及应用，可有效提高化疗药物及核酸药物的包载效率和稳定性，并将其有效递送至肝癌细胞，达到治疗肝癌细胞的作用。
2、本专利技术制备的肝靶向聚合物囊泡，是由n-乙酰半乳糖胺修饰的两亲性共聚物自组装而成的中空纳米球；具有可生物降解的多肽骨架、良好的超声响应性以及肝脏靶向能力；生物相容性和生物降解性良好，可作为化疗药物与核酸药物的优良载体，有效实现靶向肝癌细胞的核酸药物递送。相较于商业化的核酸递送试剂，该聚合物囊泡显著提高了肝癌细胞的摄取与质粒基因的稳定表达。
3、本专利技术的第一个目的是提供一种具有肝靶向性的聚合物囊泡的制备方法，所述方法包括如下步骤：
4、(1)两亲性聚合物的合成
5、将聚己内酯和氨基酸环内酸酐溶于第一类溶剂中，室温条件下抽真空反应30～50h后，得到聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物；然后再将得到的聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物溶于三氟乙酸中，加入氢溴酸醋酸溶液，室温下反应2～5h，在丙酮中沉淀，得到脱除叔丁氧羰基保护的聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物；
6、(2)聚合物囊泡的制备
7、将步骤(1)获得的脱除叔丁氧羰基保护的聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物溶于第二类溶剂中，加入n-乙酰半乳糖胺，n,n-二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶在20～70℃反应24～96h，反应结束后，依次经过透析、冷冻干燥，得到目标聚合物；
8、将上述制备的目标聚合物溶解在第三类溶剂中，控制目标聚合物的初始浓度在0.5～5.0mg/ml，在搅拌状态下以15～45d/min的速度滴加1～5倍体积的去离子水，滴加完成后在去离子水中透析10～100h，每1～10h换一次水，透析后的溶液即为具有肝靶向性的聚合物囊泡。
9、在一种实施方式中，步骤(1)所述第一类溶剂为正己烷，n,n-二甲基甲酰胺、丙酮和二氯甲烷中的一种或几种。
10、在一种实施方式中，步骤(1)所述氨基酸环内酸酐为具有反应性基团的氨基酸环内酸酐，包括l-谷氨酸-γ-苄酯环内酸酐、l-天冬氨酸-β-苄酯环内酸酐中的任一种。
11、在一种实施方式中，步骤(1)所述聚己内酯为氨基封端的聚己内酯。
12、在一种实施方式中，步骤(1)所述聚己内酯和氨基酸环内酸酐摩尔比为1：(10～30)。
13、在一种实施方式中，步骤(1)所述三氟乙酸与聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物的体积质量比为10～15：1，ml/g。
14、在一种实施方式中，步骤(1)所述氢溴酸醋酸溶液与聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物体积质量比为10～15:1～2，ml/g；其中氢溴酸醋酸溶液的质量分数为33％。
15、在一种实施方式中，步骤(2)所述第二类溶剂为n,n-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃或丙酮中的一种或几种。
16、在一种实施方式中，步骤(2)所述脱除叔丁氧羰基保护的聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物与n-乙酰半乳糖胺、n,n-二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1：(10～40)：(10～50)：(1～10)。
17、在一种实施方式中，步骤(2)所述脱除叔丁氧羰基保护的聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物与n-乙酰半乳糖胺、n,n-二异丙基碳二亚胺和4-二甲氨基吡啶的摩尔比为1：(10～30)：(10～30)：(1～10)；优选为1：(10～20)：(12～18)：(1.2～1.8)。
18、在一种实施方式中，步骤(2)所述透析条件为在去离子水中透析10～100h，每1～10h换一次水。
19、在一种实施方式中，步骤(2)所述冷冻干燥条件为在-30～-60℃，真空度0.04～0.08mbar，干燥时间为2～5天。
20、在一种实施方式中，步骤(2)所述第三类溶剂为乙醚，n,n-二甲基甲酰胺、正己烷、四氢呋喃或乙酸乙酯中的一种或几种。
21、本专利技术的第二个目的是提供一种由上述所述方法制备获得的具有肝靶向性的聚合物囊泡。
22、在一种实施方式中，所述聚合物囊泡为具有独特的“腔-膜-冠”结构的中空纳米球，直径为100～500nm，其中聚己内酯组成纳米球的疏水膜层，n-乙酰半乳糖胺修饰的聚多肽组成纳米球的亲水冠层；所述纳米球在脉冲超声的作用下，尺寸变化率为5％～30％。
23、本专利技术的第三个目的是提供一种由上述所述的具有肝靶向性的聚合物囊泡在化疗药物、核酸药物递送载体中的应用。
24、本专利技术的有益效果：
25、(1)传统小分子化疗药物通常不具备靶向性，经系统注射后仅有少量药物会最终到达病灶部位发挥药效，毒副作用大。本专利技术制备的聚合物囊泡，其亲水冠层修饰的n-乙酰半乳糖胺与肝细胞表面的去唾液酸糖蛋白受体(asgpr)具有高度的亲和力，有效实现肝细胞靶向递送；可作为一种肝靶向药物递送载体，可高效包载化疗药物或核酸，并实现超声调控的药物包载与释放。因此，本专利技术的肝靶向聚合物囊泡可本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种具有肝靶向性的聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述第一类溶剂为正己烷，N,N-二甲基甲酰胺、丙酮和二氯甲烷中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述氨基酸环内酸酐为具有反应性基团的氨基酸环内酸酐，包括L-谷氨酸-γ-苄酯环内酸酐、L-天冬氨酸-β-苄酯环内酸酐中的任一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述聚己内酯和氨基酸环内酸酐摩尔比为1：(10～30)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述氢溴酸醋酸溶液与聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物体积质量比为10～15:1～2，ml/g；其中氢溴酸醋酸溶液的质量分数为33％。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述第二类溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜、四氢呋喃或丙酮中的一种或几种。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述脱除叔丁氧羰基保护的聚已
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(2)所述第三类溶剂为乙醚，N,N-二甲基甲酰胺、正己烷、四氢呋喃或乙酸乙酯中的一种或几种。
9.由权利要求1～8任一所述的制备方法获得的具有肝靶向性的聚合物囊泡。
10.权利要求9所述的具有肝靶向性的聚合物囊泡在化疗药物、核酸药物递送载体中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种具有肝靶向性的聚合物囊泡的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述第一类溶剂为正己烷，n,n-二甲基甲酰胺、丙酮和二氯甲烷中的一种或几种。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述氨基酸环内酸酐为具有反应性基团的氨基酸环内酸酐，包括l-谷氨酸-γ-苄酯环内酸酐、l-天冬氨酸-β-苄酯环内酸酐中的任一种。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述聚己内酯和氨基酸环内酸酐摩尔比为1：(10～30)。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(1)所述氢溴酸醋酸溶液与聚已内酯-嵌段-聚氨基酸共聚物体积质量比为10～15:1～2，ml/g；其中氢溴酸醋酸溶液的质量分数为...
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