一种断氧化马钱子苷的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种断氧化马钱子苷的制备方法，该制备方法步骤为：(1)取金银花药材，加入乙醇回流提取，滤过，合并滤液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20％～95％的乙醇梯度洗脱，收集含有断氧化马钱子苷的洗脱部位；(2)工业制备色谱分离：用反相工业制备色谱进行制备，以甲醇：水为流动相，于242nm监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩得到断氧化马钱子苷。本发明专利技术提供的制备方法，经过系统实验筛选最佳的提取方法和大孔树脂纯化方法，并经优选的工业制备色谱纯化制备得到高纯度的断氧化马钱子苷，本发明专利技术工业合理，尤其是制备量大，效率高，制备产量高，得到的断氧化马钱子苷纯度高，适合大规模制备。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种断氧化马钱子苷的制备方法，具体涉及一种从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法。
技术介绍
断氧化马钱子苷是从忍冬科植物忍冬(LonicerajaponicaThunb.)的干燥花蕾即金银花(FlosLoniceraejaponicae)中提取精制得到的产品。断氧化马钱子苷是环烯醚萜类化合物，是金银花的一种有效成分。现代药理研究发现，环烯醚萜类化合物具有神经系统保护作用、抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤、保肝利胆、降血糖、解痉镇痛等药理作用，也可用于治疗心血管疾病、糖尿病及其并发症的原料药物。文献报道，断氧化马钱子苷在20mg/kg的剂量下，对CCl4致肝损伤小鼠显示显著的保肝活性，因此，断氧化马钱子苷具有很大的开发应用前景，对断氧化马钱子苷的分离和纯化成为断氧化马钱子苷深度开发的关键技术。现有研究技术中，关于断氧化马钱子苷制备方法的文献很少，且对断氧化马钱子苷的分离纯化也只限于实验室条件下研究，一般从药材提取经萃取或大孔树脂纯化到硅胶、凝胶及反相柱层析纯化等要经过5～6步甚至更多步骤才能得到纯度较高的化合物，步骤比较繁琐，且有机溶剂用量大。根据文献报道，如毕跃峰(毕跃峰，田野，裴珊珊，刘宏民.金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究.中草药[J].2008,39(1)：18～21.)利用D101、SephadexLH-20、硅胶等色谱法从1.5kg金银花中分离得到21mg断氧化马钱子苷；宋卫霞(宋卫霞.金银花水溶性化学成分研究[D].中国协和医科大学,2008.)从12kg金银花中分离得到断氧化马钱子苷13.1mg；田野(田野.金银花化学成分研究[D].郑州大学.2007.)从1.5kg金银花中通过萃取、大孔树脂及反复硅胶柱色谱等方法分离得到断氧化马钱子苷21mg；李畅(李畅，戴毅，张金博，刘明莉，姚新生.金银花中1个新的环烯醚萜苷类化合物.中草药[J].2013,44(21)：2951～2954.)通过HP-20大孔树脂、ODS、HW-40等多种柱色谱从1kg金银花中分离得到断氧化马钱子苷186.2mg；陈雨(陈雨，赵友谊，吴双，王鸣，冯煦，梁敬钰.灰毡毛忍冬花蕾水溶性化学成分研究.中药材[J].2012,35(2)：231～234.)采用D101、SephadexLH-20和反复反相柱层析等方法从8kg灰毡毛忍冬花蕾中分离得到断氧化马钱子苷121mg。然而，以上研究中普遍存在一个问题，断氧化马钱子苷都是在化学成分研究过程中发现的，得到的断氧化马钱子苷的量非常小，重现性差，难于放大。此外，多数精制纯化过程中用到SephadexLH-20填料，该填料载样量少、流速小，耗时长，大规模放大难以操作，而且该填料价格昂贵，成本高，不适合工业化推广。因此，很有必要在现有技术的基础之上，研究开发一种制备效率高，速度快，生产成本低，无需使用大量有机溶剂，具有很好应用前景的从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法。
技术实现思路
专利技术目的：本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足，经过大量实验筛选，提供从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法。本专利技术提供的制备方法，以金银花为原药材，采用优选树脂柱吸附，并用优选浓度的乙醇洗脱，最后在优化的工艺条件下工业制备色谱纯化，整个工艺制备效率高，尤其是制备量大，得率高，制备得到的断氧化马钱子苷纯度高，生产成本低，可操作性强，适合大规模制备，具有很好应用前景。技术方案：为了实现以上目的，本专利技术采用如下技术方案：一种断氧化马钱子苷的制备方法，包括以下步骤：(1)取金银花药材，加入药材8～16倍量体积浓度为70％～85％乙醇回流提取1～3次，滤过，合并滤液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20％～95％的乙醇梯度洗脱，收集含有断氧化马钱子苷的洗脱部位；(2)工业制备色谱分离：将断氧化马钱子苷部位用工业制备色谱制备，色谱柱以反相C18为填料，以体积比为10～35:90～65的甲醇：水为流动相，于242nm波长下监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到断氧化马钱子苷。作为优选方案，以上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法，所述的工业制备色谱分离的色谱条件为：色谱柱以反相C18为填料(30～250×250～1000mm)，流速为10～1000mL/min，进样量为0.2g～20.0g，波长为242nm，流动相为体积比为25:75的甲醇和水，每次样品处理时间为30～60min。制备工艺筛选试验1、树脂型号的筛选选取3种经预处理的树脂各5g(D101、HP20、HPD100)置100ml具塞锥形瓶中，取金银花提取浓缩液加入瓶中，于室温静置24h，吸附平衡后，滤去树脂，定量移取清液，测定断氧马钱苷的含量，计算吸附率。结果吸附率依次为72.1％、64.3％、67.7％，因此本专利技术选择D101型大孔吸附树脂，纯化效率更高。2、洗脱溶剂的选择按照优选的D101树脂平行取5份进行样品吸附后，先用水洗脱至流出液为无色后，然后分别用10％、20％、30％、40％、60％乙醇溶液进行洗脱，并用HPLC跟踪检测，计算洗脱率，流出液减压浓缩并干燥，测定断氧马钱苷含量，结果见表1。表1不同浓度乙醇对断氧马钱苷的洗脱率和含量由表1可知，10％乙醇洗脱液的断氧马钱苷含量最高，但洗脱不完全，30％、40％和60％乙醇洗脱液洗脱率虽高，但杂质也多，故选择20％乙醇作为洗脱溶剂，不仅洗脱率高，并且洗脱液中断氧马钱苷的含量也高。作为优选方案，以上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法，取金银花药材，加入药材8倍量体积浓度为70％乙醇回流提取2次，滤过，合并滤液，上D101大孔树脂柱。3、工业制备色谱分离条件选择采用Agilent1260分析型高效液相色谱仪，以甲醇-水，甲醇-0.5％甲酸水，乙腈-水和乙腈-0.5％甲酸水分别为流动相，实验结果表明，以甲醇-0.5％甲酸水，乙腈-水和乙腈-0.5％甲酸水为流动相时，系统分离效果较差，洗脱速度慢，峰形不佳，因此本专利技术选择甲醇-水为洗脱剂。确定洗脱剂后，本专利技术又通过大量实验对甲醇：水的具体体积比进行了大量的实验筛选，结果表明，甲醇：水＝25:75(V/V)时，具有很好的洗脱效果，并可在40分钟内分离洗脱得到断氧化马钱子苷。洗脱速度快，效率高。作为优选方案，以上所述的从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法，步骤(2)制备得到断氧化马钱子苷的纯度达98％以上，相比现有技术所得纯度更高。有益效果：本专利技术与现有技术相比具有以下优点：本专利技术提供的从金银花中快速制备断氧化马钱子苷的方法，经过系统实验筛选最佳的提取方法和大孔树脂纯化方法，并经过大量实验优选的反相工业制备色谱纯化制备得到高纯度的断氧化马钱子苷，本专利技术的优点是仅采用大孔树脂和工业制备色谱两步纯化即可得到高纯度的断氧化马钱子苷，避免了现有技术经萃取或反复正相硅胶、凝胶及常压反相柱层析等繁杂步骤、洗脱时间长、有机溶剂用量大、得率低等缺点，工艺合理，操作简单，重复性好，误差小，尤其是相对常本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种断氧化马钱子苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)取金银花药材，加入药材8～16倍量体积浓度为70％～85％乙醇回流提取1～3次，滤过，合并滤液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20％～95％的乙醇梯度洗脱，收集含有断氧化马钱子苷的洗脱部位；(2)工业制备色谱分离：将断氧化马钱子苷部位用反相工业制备色谱进行制备，以体积比为10～30:90～70的甲醇：水为流动相，于242nm波长下监视流出曲线以指导产品收集，收集液经浓缩干燥后得到断氧化马钱子苷。

【技术特征摘要】
1.一种断氧化马钱子苷的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)取金银花药材，加入药材8～16倍量体积浓度为70％～85％乙醇回流提取1～3次，滤
过，合并滤液，浓缩，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用浓度为20％～95％的乙醇梯度洗脱，
收集含有断氧化马钱子苷的洗脱部位；
(2)工业制备色谱分离：将断氧化马钱子苷部位用反相工业制备色谱进行制备，以体积
比为10～30:90～70的甲醇：水为流动相，于242nm波长下监视流出曲线以指导产品收集，
收集液经浓缩干燥后得到断氧化马钱子苷。
2.根据权利要求1所述的断氧化马钱子苷的制备方法，其特征在于，所述的工业制备色
谱的色谱条件为...

【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，王振中，宋亚玲，倪付勇，赵祎武，王雪晶，谢雪，罗鑫，温建辉，张宏达，黄文哲，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32