双倍半萜内酯类化合物及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体为一种双倍半萜类化合物及其制备方法和应用。该双倍半萜类化合物从旋覆花中提取分离得到，分别为双旋覆花内酯甲（Ｊａｐｏｎｉｃｏｎｅ　　Ａ）、双旋覆花内酯乙（Ｊａｐｏｎｉｃｏｎｅ　　Ｂ）、双旋覆花内酯丙（Ｊａｐｏｎｉｃｏｎｅ　　Ｃ）。经实验研究表明，该类化合物对多种人肿瘤细胞具有良好的抑制活性，对炎症具有显著的抑制作用，因此，可以用于制备抗肿瘤药物和抗炎症药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属医药
，具体涉及一种从植物旋覆花中分离得到的三个新的双倍半萜 内酯类化合物双旋覆花内酯甲(Japonicone A)、双旋覆花内酯乙(Japonicone B)、双旋覆 花内酯丙(Japonicone C)及其制备方法和应用。
技术介绍
旋覆花属(Inula L.)植物是菊科(Compositae)中的一属，全世界约有100种，分别于 亚洲、欧洲和非洲，以地中海地区为主。我国有20余种，本属多种植物常供药用，如土木 香(//2e/em'ww)可作为健胃、利尿、祛痰和驱虫药；大花旋覆花(/. 6r!'tomn'ca)具有消痰、下 气、软坚、行水等功效。倍半萜类化合物是本属植物的特征性成分，以桉垸型、吉马烷型 和愈创木垸型为主，还包括伪愈创木烷型、裂环桉烷型、榄烷型、苍耳垸型和少量的无环 倍半萜及倍半萜二聚体。研究表明，该属植物中的倍半萜类化合物具有驱虫杀虫、抗菌抗 肿瘤、抗病毒、免疫抑制的功效。旋覆花(i/K7h >/w/7iCa)又名金佛花，金佛草(江浙)，六月菊(河北)。多年生 草本。根状茎短，横走或斜生，有多少粗壮的须根。分布在我国北部、东北部、中部、东 部、四川、广东等地。我国通称的旋覆花应是此种，供药用。根及叶治刀伤、疔毒，煎服 可平喘镇咳；花是健胃祛痰药，也治疗胸中痞闷、胃部膨胀、嗳气、咳嗽、呕逆等(《江 苏省药材志》)。古方祛痰、除湿、利肠，又为治水肿的主要药。我们对采自安徽亳州的 旋覆花进行了系统的化学成分研究，以期明确其化学成分，为天然药物化学研究积累资料； 发现具有良好活性的天然产物，为后续深入的研究开发提供物质基础。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种新的双倍半萜内酯类天然化合物及其制备方法和其在制 备抗肿瘤、抗炎药物中的应用。本专利技术提供的双倍半萜内酯类化合物是从旋覆花(生长于安徽亳州)中提取分离得到， 分别命名为双旋覆花内酯甲(Japonicone A)、双旋覆花内酯乙(Japonicone B)、双旋覆花 内酯丙(Japonicone C)，其化学结构式如下<formula>formula see original document page 4</formula>Japonicone C上述化合物的制备方法如下(1) 提取将旋覆花地上部分干燥，粉碎，以80 95%乙醇室温浸泡提取3 4次， 每次12 24小时；合并提取液，提取液减压浓縮成流浸膏，加水稀释，然后，先以石油醚萃取，再以二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇萃取，收集二氯甲烷部位；(2) 分离将上述二氯甲垸部位应用硅胶柱色谱，以体积比为100: 1 2: 1的二 氯甲烷/甲醇系统梯度洗脱，薄层色谱检测，分别收集含有双旋覆花内酯甲、双旋覆花内酯 乙和双旋覆花内酯丙的流分，再经葡聚糖凝胶柱色谱，以体积比为1: 1的二氯甲烷/甲醇 洗脱，最后经液相色谱制备，得双旋覆花内酯甲、双旋覆花内酯乙和双旋覆花内酯丙。本专利技术的双倍半萜内酯类化合物Japonicone A为片状结晶，由电喷雾离子质谱信号 m々535—，高分辩质谱得该化合物精密质量数为559.2676 +，推算其分子式为 C32H4()07;本专利技术的双倍半萜内酯类化合物Japonicone B为白色粉末，由电喷雾离子质谱 信号附/z535—，高分辩质谱得该化合物精密质量数为559.2670 +，推算其分子 式为C32H4o07;本专利技术的双倍半萜内酯类化合物Japonicone C为白色粉末，由电喷雾离子 质谱信号w/z493—，高分辩质谱得该化合物精密质量数为517.2567 +，推算其分子式为C3oH3806。以上三个化合物的结构通过^-NMR， 13C-NMR， 2D-NMR以及X — 衍射等手段进行确证。'H和^C核磁共振数据见表l:表1 Japonicone A、 C和D的^和13C核磁共振数据<table>table see original document page 5</column></row><table><table>table see original document page 6</column></row><table>具体实施例方式下面的实施例可以使本专业技术人员更全面的理解本专利技术，但不以任何方式限制本专利技术。实施例1:将干燥的旋覆花(/j'a/70"/ca)地上部分20.0 kg粉粹，室温下用95%的乙醇提取3次， 每次分别用时24， 12， 12小时。将所得粗提物925.3 g加适量水稀释后，依次用石油醚， 二氯甲垸，乙酸乙酯，正丁醇萃取，收集二氮甲垸部位。将得到的二氯甲垸萃取物84.5 g 用200-300目的薄层硅胶分离，用CH2Cl2-MeOH (100:1, 50:1， 20:1, 10:1,5:1,2:1，)进行梯 度洗脱。薄层色谱检测，分别收集其中含有双旋覆花内酯甲、乙和丙的流分，再采用 SephadexLH-20进行分离，用CH2Cl2-MeOH (1:1)进行洗脱，得到混合物，香草醛浓硫酸 显色为倍半萜类化合物，采用prep HPLC分离得到双旋覆花内酯甲(Japonicone A) 273 mg, 双旋覆花内酯乙(Japonicone B) 80 mg，双旋覆花内酯丙(Japonicone C) 52 mg。实施例2:双旋覆花内酯甲、乙和丙的细胞毒活性实验1、实验材料1.1、 受试样品Japonicone A、 Japonicone B、 Japonicone C用DMSO (Merck)溶解后，力口入PBS(-) 配成1000 pg/ml的溶液或均匀的混悬液，然后用含DMSO的PBS(-)稀释。1.2、 细胞株A549 (人肺癌细胞)，LOVO (人肠癌细胞)，6T-CEM (人T细胞白血病细胞)，MDA-MB-435 (人乳腺癌细胞)，1.3、 培养液RPMI1640+15。/。NBS+双抗，1.4、 其他材料全自动酶标仪型号WellscanMK-2，生产厂商Labsystems，进口 96孔培养板等。2、 试验方法MTT法96孔板每孔加入浓度为4 6X 1()4个/ml的细胞悬液100 pl，置37°C， 5% C02 培养箱内。24h后，加入样品液，IOmI/孔，设双复孔，37°C， 5。/。C02作用72h。每孔加 入5 mg/ml的MTT溶液20 pl，作用4 h后加入溶解液，100 |al/ L，置培养箱内，溶解后 用MK-2全自动酶标仪测570 nm OD值。3、 试验结果结果见表2，结果显示，JaponiconeA、 JaponiconeB、 Japonicone C对人月市癌细胞，人 肠癌细胞，人T细胞白血病细胞，人乳腺癌细胞均有较好的抑制活性，双旋覆花内酯甲、 乙和丙都有很好的抗肿瘤作用，因此，可以用于制备抗肿瘤药物。实施例3:双旋覆花内酯甲、乙和丙对小鼠S180肉瘤(实体型)的疗效实验1、 实验材料 1.1受试样品Japonicone A、 Japonicone B、 Japonicone C分别用少量吐温—80助溶后用0.5%CMC 配成溶液。 1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双倍半萜内酯类化合物，其特征在于从旋覆化中提取分离得到，为双旋覆花内酯甲、双旋覆花内酯乙或双旋覆花内酯丙，其化学结构式分别如下：＊＊＊。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张卫东，金慧子，单磊，苏娟，柳润辉，李慧梁，覃江江，
申请(专利权)人：中国人民解放军第二军医大学，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]