The present invention relates to the field of biotechnology, in particular to a cell culture based on aquilariasinensis extraction method of sesquiterpene, which comprises the following steps: taking aquilariasinensis pods as materials, disinfection, spare; remove the disinfection of the pod of Aquilaria sinensis seeds were induced and cultured without vaccine, get aquilariasinensis aseptic seedling; induced out of aquilariasinensis aseptic seedling leaves were removed, induction of callus, the callus obtained white wood incense; induced out of Aquilaria sinensis callus were removed, cell suspension culture, cell suspension obtained aquilariasinensis; aquilariasinensis cell suspension after induction, after access to sweet strains co culture; cell suspension of aquilariasinensis accumulation of secondary metabolites in the induction of sesquiterpene sweet strains, extracting sesquiterpene. The method has the advantages of high extraction rate, short culture period, simple operation and low cost.
【技术实现步骤摘要】
一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法
本专利技术涉及生物
，具体涉及一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法。
技术介绍
白木香（Aquilariasinensis(Lour.)Gilg）别名土沉香、女儿香、牙香树、莞香、六麻树，为瑞香科(Thymelaeaceae)沉香属植物，是一种热带、亚热带常绿乔木。但因过度采伐，遭到了毁灭性打击，野生白木香已所剩无几，现已被列为国家珍稀濒危三级保护植物及国家二级重点保护野生植物。现有技术中悬浮细胞系的诱导多采用茎尖作为外植体，消毒过程不充分，会导致愈伤组织诱导存活率低，污染率高等问题。其次现有技术中采用的诱导培养基以及悬浮细胞的培养基存在诱导率较低以及悬浮细胞细胞活性较低等问题。现有的技术方法中沉香的诱导多数在白木香树木上结合真菌、化合物等进行诱导，存在操作困难，诱导时间长等缺点。诱导获得的沉香再经过加工后提取获得沉香倍半萜，增加了成本。
技术实现思路
为了克服现有技术中存在的缺点和不足，本专利技术的目的在于提供一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，该方法提取率高，培养周期短，操作简单化，成本低。本专利技术的目的通过下述技术方案实现：一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，包括如下步骤：（1）取材消毒：取白木香果荚作为材料，进行消毒处理，备用；（2）无菌苗诱导：将消毒处理后的白木香果荚的种子取出，进行无菌苗的诱导培养，得到白木香无菌苗；（3）愈伤组织诱导：将诱导出来的白木香无菌苗的幼叶取出，进行愈伤组织的诱导培养，得到白木香愈伤组织；（4）悬浮细胞培养：将诱导出来的白木香愈伤组织取出，进行悬浮细胞培养，得到白木...
【技术保护点】
一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）取材消毒：取白木香果荚作为材料，进行消毒处理，备用；（2）无菌苗诱导：将消毒处理后的白木香果荚的种子取出，进行无菌苗的诱导培养，得到白木香无菌苗；（3）愈伤组织诱导：将诱导出来的白木香无菌苗的幼叶取出，进行愈伤组织的诱导培养，得到白木香愈伤组织；（4）悬浮细胞培养：将诱导出来的白木香愈伤组织取出，进行悬浮细胞培养，得到白木香悬浮细胞；（5）共培养：取诱导的白木香悬浮细胞，处理后接入结香菌种进行共培养；（6）提取倍半萜：白木香悬浮细胞在结香菌种的诱导下积累次生代谢产物倍半萜，提取倍半萜。
【技术特征摘要】
1.一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：包括如下步骤：（1）取材消毒：取白木香果荚作为材料，进行消毒处理，备用；（2）无菌苗诱导：将消毒处理后的白木香果荚的种子取出，进行无菌苗的诱导培养，得到白木香无菌苗；（3）愈伤组织诱导：将诱导出来的白木香无菌苗的幼叶取出，进行愈伤组织的诱导培养，得到白木香愈伤组织；（4）悬浮细胞培养：将诱导出来的白木香愈伤组织取出，进行悬浮细胞培养，得到白木香悬浮细胞；（5）共培养：取诱导的白木香悬浮细胞，处理后接入结香菌种进行共培养；（6）提取倍半萜：白木香悬浮细胞在结香菌种的诱导下积累次生代谢产物倍半萜，提取倍半萜。2.根据权利要求1所述的一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：所述步骤（1）具体为：取成熟的白木香果荚作为材料，先用洗洁精水中浸泡15-25min，清洗表面污渍，流水冲洗2-4h；再用质量分数为0.08-0.12%的升汞溶液浸泡处理10-20min，无菌水冲洗3-7次，用无菌吸水纸吸干表面水分，备用。3.根据权利要求1所述的一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：所述步骤（2）具体为：将消毒处理过的白木香果荚的种子取出，接种在添加有0.4-0.6mg/L6-BA的改良MS培养基中进行无菌苗的诱导培养，每个培养皿倒入18-22mL培养基接种8-10粒种子。4.根据权利要求1所述的一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：所述步骤（2）中，诱导培养的条件为：光照强度700-900lx，光照时间9-11h/d，温度26-28℃，培养13-17d。5.根据权利要求3所述的一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：所述步骤（3）中，将诱导出来的白木香无菌苗的幼叶取出，叶片大小0.4-0.6cm×0.4-0.6cm，接入在18-22mL添加有1.5-1.9mg/LNAA和1.1-1.5mg/L6-BA的改良MS培养基中进行愈伤组织的诱导培养，培养温度23-25℃，暗培养18-22d后继代。6.根据权利要求5所述的一种基于白木香细胞培养提取倍半萜的方法，其特征在于：所述步骤（4）中，取继代5次的白木香愈伤组织用镊子夹碎后放入添加有1.5-1.9m...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈跃华，卢续贞，李海燕，
申请(专利权)人：广东国方医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44
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