一种黄金柏初代培养方法技术

本发明专利技术公开了一种黄金柏初代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养基配制：选择基础培养基，加入蔗糖和琼脂，再加入6‑苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，调节pH值，灭菌，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，消毒；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养。相对于现有技术，本发明专利技术方法不仅具有现有技术中组培繁殖的优势，还通过特定的消毒方法，与其它处理方法相结合，能够显著降低黄金柏组培中的污染率，解决其较易污染的问题，同时还能显著提高芽诱导率。

A method for culture of primary gold Bai

The invention discloses a method for culturing primary gold Bai characterized, which comprises the following steps: (1) medium preparation: basic medium, sucrose and agar, then add 6 6-Benzylamino adenine and NAA, regulating pH value, sterilizing, namely; (2) explants collected: with the axillary and terminal buds of gold Bai stems as explants, their branches each branches have at least one bud; (3) the disinfection of explants: the explant, cleaning, disinfection; (4) inoculation culture: step (3) the explants old wound cut and insert steps (1) the medium into the culture of indoor culture. Compared with the prior art, the method of the invention not only has the advantages of tissue culture and propagation of the existing technology, but also through specific disinfection methods, combined with other treatment method, can significantly reduce the contamination rate of gold Bai culture, is easy to solve the pollution problem, but also significantly improved the shoot induction rate.

【技术实现步骤摘要】
一种黄金柏初代培养方法
本专利技术涉及一种黄金柏初代培养方法，属于苗木繁殖

技术介绍
黄金柏(CupressusmacrocarpaGoldcrest)又称金冠大果柏木，金叶桧。为柏科柏木属的一种色叶植物。常绿小灌木，产地自美国加州。性喜冷凉，耐高温。树形呈球形。尤以霜后色彩最为美丽，貌似黄金故名为黄金柏。播种扦插是其中的一种繁殖方式。可作为盆栽，庭院绿化，街道，公路两侧的栽植树种，也是是高速公路中隔离带绿化树种的最新替代树种，还是住家院子向阴处的优先选择的树木，是我国重要的园林柏类。黄金柏为新引树种，为进一步加快黄金柏的推广应用，希望通过对黄金柏芽诱导快繁技术的研究，促进黄金柏扩繁技术的发展。目前现有技术中，黄金柏属于较易污染品种，其启动培养的污染率往往高达50％以上，并且芽诱导率较低，无法满足培养要求。
技术实现思路
专利技术目的：为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种黄金柏初代培养方法。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术公开了一种黄金柏初代培养方法，包括以下步骤：(1)培养基配制：选择基础培养基，加入蔗糖和琼脂，再加入6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，调节pH值，灭菌，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，消毒；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养。作为优选，所述步骤(1)中基础培养基为MS培养基。作为另一种优选，所述步骤(1)中蔗糖和琼脂的浓度分别为30g/L和7g/L。作为另一种优选，所述步骤(1)中6-苄氨基腺嘌呤的浓度为0.8-1.2mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.1-0.3mg/L。作为另一种优选，所述步骤(1)中pH值为5.8～6.0，灭菌条件为：121℃高压下灭菌25min。作为另一种优选，所述步骤(3)中清洗的方法为：先用洗衣粉加水漂洗3-5遍，再用自来水冲洗，直至外植体干净。作为另一种优选，所述步骤(3)中消毒的方法为：在无菌环境下，依次用75％的酒精漂洗30s，无菌水漂洗1次，升汞进行5min的漂洗，无菌水漂洗3次后，残留的水分用无菌滤纸吸取。作为另一种优选，所述步骤(4)中培养的条件为：1600Lx的光照强度，每天进行16h光照，温度稳定在(25±2)℃，以及75％的湿度。技术效果：相对于现有技术，本专利技术方法不仅具有现有技术中组培繁殖的优势，还通过特定的消毒方法，与其它处理方法相结合，能够显著降低黄金柏组培中的污染率，解决其较易污染的问题，同时还能显著提高芽诱导率。具体实施方式实施例1(1)培养基配制：选择MS培养基作为基础培养基，加入蔗糖和琼脂，其浓度分别为30g/L和7g/L，再加入6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，其浓度分别为0.8mg/L和0.3mg/L，调节pH值为5.8～6.0，121℃高压下灭菌25min，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；一般选用遗传性状品质优越发育良好的新萌芽枝条，距地面一半处的芽比较好，选择发育条件好，除了顶芽之外较紧实未萌芽的作为实验本体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽。而本次实验所采用的材料黄金柏，由于放置过几天，本专利技术组培时选取带有腋芽幼嫩的茎作外植体。(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，方法为：先将外植体放入烧杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自来水冲洗1h直至外植体干净；消毒，方法为：开启紫外灯，在无菌室的工作台下进行消毒，在实验工作台上将冲刷洁净的外植体用75％的酒精漂洗30s，然后用无菌水漂洗1次，再用1％次氯酸钠进行浸泡15min，然后再用灭菌水冲洗3次，最后再用升汞进行5min的漂洗，然后用无菌水漂洗3次后，残留的水分用无菌滤纸吸取；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养，条件为：1600Lx的光照强度，每天进行16h光照，温度稳定在(25±2)℃，以及75％的湿度。实施例2：(1)培养基配制：选择MS培养基作为基础培养基，加入蔗糖和琼脂，其浓度分别为30g/L和7g/L，再加入6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，其浓度分别为1.2mg/L和0.1mg/L，调节pH值为5.8～6.0，121℃高压下灭菌25min，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；一般选用遗传性状品质优越发育良好的新萌芽枝条，距地面一半处的芽比较好，选择发育条件好，除了顶芽之外较紧实未萌芽的作为实验本体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽。而本次实验所采用的材料黄金柏，由于放置过几天，本专利技术组培时选取带有腋芽幼嫩的茎作外植体。(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，方法为：先将外植体放入烧杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自来水冲洗1h直至外植体干净；消毒，方法为：开启紫外灯，在无菌室的工作台下进行消毒，在实验工作台上将冲刷洁净的外植体用75％的酒精漂洗30s，然后用无菌水漂洗1次，再用1％次氯酸钠进行浸泡15min，然后再用灭菌水冲洗3次，最后再用升汞进行5min的漂洗，然后用无菌水漂洗3次后，残留的水分用无菌滤纸吸取；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养，条件为：1600Lx的光照强度，每天进行16h光照，温度稳定在(25±2)℃，以及75％的湿度。实施例3：(1)培养基配制：选择MS培养基作为基础培养基，加入蔗糖和琼脂，其浓度分别为30g/L和7g/L，再加入6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，其浓度分别为1.0mg/L和0.2mg/L，调节pH值为5.8～6.0，121℃高压下灭菌25min，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；一般选用遗传性状品质优越发育良好的新萌芽枝条，距地面一半处的芽比较好，选择发育条件好，除了顶芽之外较紧实未萌芽的作为实验本体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽。而本次实验所采用的材料黄金柏，由于放置过几天，本专利技术组培时选取带有腋芽幼嫩的茎作外植体。(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，方法为：先将外植体放入烧杯中，加入洗衣粉水漂洗3-5遍，再用自来水冲洗1h直至外植体干净；消毒，方法为：开启紫外灯，在无菌室的工作台下进行消毒，在实验工作台上将冲刷洁净的外植体用75％的酒精漂洗30s，然后用无菌水漂洗1次，再用1％次氯酸钠进行浸泡15min，然后再用灭菌水冲洗3次，最后再用升汞进行5min的漂洗，然后用无菌水漂洗3次后，残留的水分用无菌滤纸吸取；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养，条件为：1600Lx的光照强度，每天进行16h光照，温度稳定在(25±2)℃，以及75％的湿度。实验例取同一批黄金柏进行初代培养，分别设为对照1组、对照2组、实施例1、2和3组；对照1组，按照常规的现有技术进行培养；对照2组，按照实施例3方法，去掉消毒方法中“再用1％次氯酸钠进行浸泡15min，然后再用灭菌水冲洗3次”的步骤；本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种黄金柏初代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养基配制：选择基础培养基，加入蔗糖和琼脂，再加入6‑苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，调节pH值，灭菌，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，消毒；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养。

【技术特征摘要】
1.一种黄金柏初代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)培养基配制：选择基础培养基，加入蔗糖和琼脂，再加入6-苄氨基腺嘌呤和萘乙酸，调节pH值，灭菌，即得；(2)外植体采集：选择带腋芽和顶芽的黄金柏茎作为外植体，剪取枝条时每个枝条上存留至少一个侧芽；(3)外植体的消毒：取上述外植体，清洗，消毒；(4)接种培养：将步骤(3)所得外植体旧伤口剪去，插入步骤(1)所得培养基中，置于培养室内培养。2.根据权利要求1所述的黄金柏初代培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中基础培养基为MS培养基。3.根据权利要求1所述的黄金柏初代培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中蔗糖和琼脂的浓度分别为30g/L和7g/L。4.根据权利要求1所述的黄金柏初代培养方法，其特征在于，所述步骤(1)中6-苄氨基腺嘌呤的浓度为0.8-1.2mg/L，所述萘乙酸的浓度为0.1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：周余华，周琴，蒋涛，张虎，王红梅，
申请(专利权)人：江苏农林职业技术学院，
类型：发明
国别省市：江苏,32