本发明专利技术提供一种具有抗菌活性的倍半萜及其制备方法，所述的倍半萜化合物分子式为C15H26O3，通过液体发酵培养鸡枞菌Termitomyces albuminosus，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化倍半萜，本发明专利技术采用的倍半萜及其衍生物制备方法，可以利用真菌菌种鸡枞菌Termitomyces albuminosus经液体发酵制得，培养基原料来源广泛，制备方法简单，容易实现工业化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种具有抗菌活性的倍半萜及其制备方法，属于生物医药领域。
技术介绍
倍半萜是指分子中含15个碳原子的天然萜类化合物，是医药、食品、化妆品工业的重要原料。大型真菌中发现的天然产物结构多样，倍半萜是主要的结构类型，且化学结构多样，并具有等多种生物活性。细菌病害是人类面临的主要病害。虽然目前已有大量抗生素被发现并用来治疗细菌病，但也出现了各种耐药性菌，对人类的健康造成极大的威胁。为寻找安全有效的抗菌药物，特开展本专利技术的研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有抗菌活性的倍半萜及其制备方法。本专利技术的另一目的在于将该倍半萜类化合物作为抗菌药物。本专利技术所涉及的真菌为鸡枞菌(Termitomyces albuminosus)，所述菌株为鸡枞菌(Termitomyces albuminosus )ZYB2016，已于2016年5月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2016262；保藏的培养物名称及注明的鉴别特征为鸡枞菌(Termitomyces albuminosus)，地址为武汉大学。本专利技术所述倍半萜化合物分子式为C15H26O3，化学结构式如下：。本专利技术所述的倍半萜化合物的制备方法，通过发酵培养鸡枞菌(Termitomyces albuminosus)，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化出该化合物，具体步骤为：1) 真菌液体发酵：将鸡枞菌(Termitomyces albuminosus)斜面菌种活化后，进行液体深层发酵，培养基配方按重量百分比为：马铃薯5-40%，葡萄糖1-5%，余量为水，于0.1 Mpa和121 ℃灭菌30 min。采用恒温摇床或各式发酵罐进行液体发酵，温度设置22-30 ℃，发酵7-30天；2) 发酵产物处理：液体发酵结束后，除去菌丝体的发酵液用乙酸乙酯萃取，萃取液经脱水、浓缩，得到有机粗提物浸膏；3) 倍半萜分离纯化：将2)所述的有机粗提物浸膏用甲醇溶解，进行反相硅胶柱层析，用浓度为10-50%的甲醇水或丙酮水为洗脱剂，分管收集，将含有目标化合物的洗脱液浓缩得到亚组分。用甲醇将亚组分溶解，进行凝胶柱层析，用丙酮或甲醇溶液洗脱，分管收集，将含有所述化合物的洗脱液合并，接着进行正相硅胶柱层析，以氯仿装柱，干法上样，用氯仿：甲醇＝100：0.1－10的溶剂洗脱，得到倍半萜。本专利技术还保护了所述的倍半萜类化合物在制备抗菌药物中的用途。所述细菌为大肠杆菌。根据质谱（ESI）、高分辨质谱（HRMS-EI）、圆二色谱（CD）、旋光（[α]）、紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）和核磁共振波谱（1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H,1H-COSY和NOESY）的数据对化合物进行结构鉴定，可确定化合物结构。利用96孔板法测定化合物的抗菌活性，发现其对大肠杆菌有较强的抑制效果。结果表明，所述的倍半萜化合物具有抗菌活性，可应用于制备抗菌药物或其他生物活性先导物。本专利技术采用的倍半萜及其衍生物制备方法，可以利用真菌菌种鸡枞菌Termitomyces albuminosus经液体发酵制得，培养基原料来源广泛，制备方法简单，容易实现工业化生产。附图说明图1所述倍半萜的化学结构式。图2化合物1对大肠杆菌生长的抑制，图中黑框为所述的化合物1对大肠杆菌的抑制作用。具体实施方式在如下的实施例中所指的化合物1的化学结构：以下实施例将对本专利技术作进一步说明。实施例1用马铃薯葡萄糖培养基（每升水中含马铃薯200 g，葡萄糖20 g，pH自然，0.1 Mpa，121 ℃灭菌30 min），将活化后的菌株（Termitomyces albuminosus）液体发酵培养37 L，于28 ℃摇床培养 15 d。菌体过滤后，发酵液浓缩至1 L，发酵液用乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部分用无水硫酸钠脱水后浓缩，得到有机粗提物浸膏(3.1 g)。将上一步骤中得到的3.1g有机粗提物，用甲醇充分溶解，进行反相硅胶(170 g)柱层析，用50%甲醇水洗脱2 L，流速为15 mL/min，每管收集280 mL，用旋转蒸发仪真空浓缩后，分别取样进行薄层层析分析合并（展开剂为氯仿：甲醇＝10：1，显色剂为碘、10%硫酸乙醇或碘化铋钾），得到含有目标化合物的组分（68.3 mg）。从上一步骤得到的组分（68.3 mg），用甲醇溶解，进行凝胶(120g，Sephadex LH-20)柱层析，甲醇洗脱，流速约为12 s/drop，每管收集4 mL，根据薄层层析检测合并得到含有目标化合物的组分(44.0 mg)。从上一步骤得到的组分(44.0 mg)，用丙酮溶解，进行凝胶(120 g，Sephadex LH-20)柱层析，丙酮洗脱，流速约为12 s/drop，每管收集4 mL，根据薄层层析检测合并得到目标化合物的组分(7.8 mg)。从上一步骤得到的组分(7.8 mg)进行正相硅胶层析（1 g 硅胶），氯仿装柱，干法上样，流动相为氯仿：甲醇（60:1），洗脱体积为300 mL，薄层层析检测合并得到目标化合物1（2.8 mg）。将上一步骤所得的化合物1，进行质谱（ESI）、高分辨质谱（HRMS-EI）、圆二色谱（CD）、旋光（[α]）、紫外光谱（UV）、红外光谱（IR）和核磁共振波谱（1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、1H,1H-COSY和NOESY）测定，并确定化合物结构。化合物1，浅黄色油状物，可溶于甲醇或丙酮，[α]－18.4 (c=0.085，MeOH)；UV-vis(MeOH)，λ /nm：216；HR ESI-Q-TOF MS: 277.1776 ([M + Na+], C15H26NaO3+; calc. 277.1780)；IR (KBr) νmax：3385, 2965, 2853, 1384 cm-1；结合1H和13C NMR谱数据(表1)确定化合物1的分子式为C15H26O3。分析1H和13C NMR 以及DEPT谱，表明化合物1含有2个甲基，8个亚甲基（其中2个为羟甲基），1个次甲基，4个季碳（其中1个连氧，2个为烯碳）。从HMBC实验中可观察到甲基H3-14与C-10、C-1、C-9和C-5，以及H3-15与C-3、C-4和C-5的碳氢远程相关，从1H-1H COSY 实验中可观察到H-1α/β与H-2α/β及H-2α/β与H-3α/β之间的氢氢相关，可以推测出化合物1含有双甲基和羟基取代的环戊烯结构片段。又从HMBC实验中观察到甲基H２-13与C-12、C-7和C-11，H2-12与C-13、C-12和C-7, H-6α与C-7和C-11, 以及H-8α与C-7和C-11的碳氢远程相关，及C-7和C-11的化学位移值，推测化合物1含有双羟甲基和双烷基四取代乙烯的结构片段。根据H-6β与C-8, C-10和C-5，H-9α与C-15, C-8, C-10和C-5，以及H-8α/β与H-9β的1H-1H COSY相关，可以将上述的两个结构片段连接并推测出化合物1的基本结构。根据NOESY实验中H-1β和H-2β，H-2β和H-3β，以及H-1β和H-5的出现相关，表明这些质子朝向一面；而H3-14和H-2α，H-2α和H-3α，H3-15/14和本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种具有抗菌活性的倍半萜，其特征在于：所述的倍半萜化合物分子式为C15H26O3，结构式如下：。
【技术特征摘要】
1.一种具有抗菌活性的倍半萜，其特征在于：所述的倍半萜化合物分子式为C15H26O3，结构式如下：。2.一种如权利要求1所述的倍半萜类化合物的制备方法，其特征在于：通过液体发酵培养鸡枞菌Termitomyces albuminosus，获取发酵物，然后从发酵物中分离纯化倍半萜；所述鸡枞菌为鸡枞菌(Termitomyces albuminosus )ZYB2016，已于2016年5月16日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2016262；具体步骤为：1) 真菌液体发酵：将所述的鸡枞菌斜面菌种活化后，进行液体深层发酵，培养基配方按重量百分比为：马铃薯5-40%，葡萄糖1-5%，余量为水，于0.1 Mpa和121 ℃...
【专利技术属性】
技术研发人员：郑永标，吴雅滨，刘新锐，谢宝贵，邹先文，
申请(专利权)人：福建师范大学，
类型：发明
国别省市：福建;35
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