一种提高α-L-鼠李糖苷酶r-Rha1热稳定性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高α‑L‑鼠李糖苷酶r‑Rha1热稳定性的方法。以原始型α‑L‑鼠李糖苷酶r‑Rha1（WT）基因为模板，采用易错PCR方法进行随机突变，构建该酶的突变文库，并建立了96孔板诱导表达及高通量筛选方法，最终获得了热稳定性提高的突变体。V529A突变体对试验使用的金属离子及效应物都具有与WT同样的耐受性。该突变体V529A具有优良的酶学性质，同时本发明专利技术也成功地构建了含上述突变体V529A的重组载体，实现了异源表达，为该酶的工业化生产和应用提供了良好的基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及基因工程和酶工程的
，尤其涉及一种提高α-L-鼠李糖苷酶r-Rha1热稳定性的方法。
技术介绍
α-L-鼠李糖苷酶(α-L-rhamnosidase(EC 3.2.1.40))属于转化糖苷水解酶类，能够专一、高效地水解许多糖苷类物质如柚皮苷(naringin)、芦丁(rutin)、橘皮苷(hesperidin)等末端的α-L-鼠李糖基。CAZy(http://www.cazy.org/)数据库中糖苷水解酶的分类依据是其氨基酸序列的相似性，α-L-鼠李糖苷酶包含在四个糖苷水解酶家族(glycoside hydrolase family,GH)，分别是GH13、GH28、GH78和GH106。α-L-鼠李糖苷酶的来源非常广泛，已有动物组织、植物组织和微生物来源的α-L-鼠李糖苷酶的报道。目前关于动物组织和植物组织来源的α-L-鼠李糖苷酶的报道相对较少，主要是通过芽孢杆菌、拟杆菌、乳杆菌、链霉菌、单胞菌等细菌和黑曲霉、白曲霉、棘孢曲霉、土曲霉、青霉、木霉、酵母、犁头霉等真菌发酵来获取α-L-鼠李糖苷酶。由于黑曲霉是重要的酶制剂生产菌种，其具有重要的糖苷水解酶合成能力，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种编码α‑L‑鼠李糖苷酶V529A的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种编码α-L-鼠李糖苷酶V529A的基因，其特征在于：其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.一种α-L-鼠李糖苷酶V529A，其特征在于：其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.一种α-L-鼠李糖苷酶表达载体，其特征在于：含有权利要求1所述的编码α-L-鼠李糖苷酶V529A的基因的表达载体pPIC9k-V529A。4.一种α-L-鼠李糖苷酶V529A的制备方法，其特征在于：包括采用权利要求3所述的α-L-鼠李糖苷酶表达载体转化寄主细胞，培养转化体，从培养物中获得α-L-鼠李糖苷酶V529A。5.根据权利要求4所述的一种α-L-鼠李糖苷酶V529A的制备方法，其特征在于：所述的寄主细胞为毕赤酵母。6.根据权利要求5所述的一种α-L-鼠李糖苷酶V529A的制备方法，其特征在于：包括采用所述的α-L-鼠李糖苷酶表达载体转化至寄主细胞毕赤酵母GS115，经甲醇诱导，得到可溶性表达的重组α-L-鼠李糖苷酶。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：李利君，吴喆瑜，倪辉，杨远帆，于越，朱艳冰，姜泽东，肖安风，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35