与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌RHT-3201及其用途制造技术

本发明专利技术涉及一种与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌及其制备方法和用途。本发明专利技术的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌对特应性疾病的治疗效果显著，特别是显著地改善了现有的乳酸菌剂所具有的肠道粘膜附着竞争力，显示出与类固醇类药物相同水平的预防、改善和治疗皮炎的效果，因此具有很高的工业实用性。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请要求并享有2014年05月07日在韩国知识产权局提交的韩国专利申请第10-2014-0054237号的优先权，其全文以引用的方式纳入本说明书。本专利技术涉及一种与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌，及其制备方法和用途。更具体而言，涉及一种与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，通过所述方法制备的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌，以及包含所述与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌作为有效成分的预防和治疗特应性皮炎的药物组合物以及食品组合物。
技术介绍
特应性皮炎(Atopicdermatitis，AD)是指表现为瘙痒症状的慢性、复发性炎症皮肤病，主要多见于婴幼儿和儿童。已知特应性皮炎和过敏性鼻炎、支气管哮喘共同作为最有代表性的过敏症状，儿童的患病率为10～30％，成人的患病率为1～3％。特应性皮炎是免疫系统对侵入到体内的尘螨等抗原做出过敏反应的症状。抗原通过巨噬细胞递送至T细胞，T细胞根据抗原种类或对做出反应的受体的种类，分化为Th1细胞或Th2细胞。Th2细胞通过细胞因子如IL-4、IL-5和IL-10激活体液免疫，并激活B细胞使IgE(免疫球蛋白)生成量增多从而引发特应性皮炎。相反，Th1细胞通过IL-12、IFN-γ激活细胞免疫，IFN-γ起到抑制IgE生成的作用。因此，可维持Th1细胞和Th2细胞的均衡的免疫调节而缓解特应性症状。目前虽然没有明确的针对特应性皮炎的治疗方法，但是使用着抗过敏剂、抗组胺剂、类固醇类等药物。其中，多以软膏剂形式用于治疗特应性皮炎的类固醇类药物通过弱化免疫应答而减轻炎症，然而，已报道长时间使用时会引起多种副作用。另外，许多乳酸菌或含有乳酸菌的乳制品作为具有免疫调节作用的食品而上市销售。作为乳酸菌可列举乳杆菌属、乳酸乳球菌属、链球菌属、片球菌属、肠球菌属等，并已知这些乳酸菌具有增强免疫或抗过敏作用。对此，本专利技术人的长时间使用时无副作用并可从根本上治疗特应性皮炎的新菌株材料——具有Th1细胞和Th2细胞的均衡免疫调节功能的鼠李糖乳杆菌IDCC3201曾获得专利授权[专利文献1007429000000]。然而，人体肠道中栖息有约500多种100兆个以上的肠道细菌，有害菌如大肠菌以及有益菌如乳酸菌作为常住菌群维持着均衡，因此在给予乳酸菌益生菌时，在肠道粘膜上进行附着竞争具有局限性，因此其效果也根据附着率而不同。此外，一定数量的乳酸菌益生菌在通过胃肠道时死亡或在进行附着竞争时被淘汰，然后随排便排出。因此，乳酸菌益生菌在它们治疗重度特应性疾病方面具有局限性。此外，为了提高益生菌的肠道粘膜附着率，需要以超过标准菌数的过量给药方式进行摄取。由于益生菌在到达肠道之前需要穿过人体内的层层障碍，因此无法预测所摄取的菌数和特应性疾病的治疗效率。由于这些问题，目前几乎没有显示出与类固醇类药物相同水平的效果的乳酸菌剂。虽然试图作为复合剂而提高其效果，但在益生菌菌株的贮存中，由于自然地出现经时死亡，因此无法对其效果定制正式标准。最近，随着对人体肠道粘膜免疫体系进行相关研究，已报道了作为宿主的人体的肠道免疫细胞和乳酸菌细胞壁成分之间的相互作用和附着性能。其中，树突细胞(DC)的Toll样受体-2(TLR-2)与存在于乳酸菌细胞壁上的脂磷壁酸和肽聚糖结合而传递免疫相关的信号。此外，当发挥免疫调节作用的乳酸菌在特种培养基中进行发酵时，会在细菌外生成短链脂肪酸(SCFA)和免疫蛋白，从而促进从Th1细胞中分泌IFN-γ和IL-12，因此，起到改善特应性皮炎的作用。但是，大多数乳酸菌发酵产物不起改善特应性皮炎的作用，只有一部分选择性的乳酸菌生产这样的物质，因此开发这种乳酸菌的价值很高。在这样的背景下，需要开发一种能从根本上有效治疗特应性皮炎的组合物，其能克服用于特应性皮炎的类固醇类药物的副作用以及根据乳酸菌益生菌的附着率而治疗特应性皮炎的局限性。
技术实现思路
专利技术要解决的问题对此，本专利技术人在开发可维持与类固醇类药物相同水平的效果且无副作用的治疗特应性皮炎的药物而进行研究时，证实通过在培养滤液中混合多糖聚合物而制备的粘合剂与热灭活(heat-killed)鼠李糖乳杆菌的缀合物，不仅对肠粘膜的附着性能优异，对重度特应性皮炎具有治疗效果，而且无副作用，从而完成了本专利技术。因此，本专利技术的目的是提供一种与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌的制备方法，其包含：(a)将通过培养鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)而制备的发酵培养液分离成细菌和发酵滤液的步骤；(b)将步骤(a)中的发酵滤液和多糖聚合物混合而制备多糖聚合物粘合剂的步骤；(c)将步骤(a)中的细菌热灭活的步骤；以及(d)将步骤(c)中的热灭活细菌与步骤(b)中制备的粘合剂缀合的步骤。本专利技术的另一个目的是提供一种通过所述方法制备的与多糖聚合物粘合制缀合的鼠李糖乳杆菌。本专利技术的再一个目的是提供一种预防和治疗特应性皮炎的药物组合物，该组合物包含与多糖聚合物粘合制缀合的鼠李糖乳杆菌作为有效成分。本专利技术的再一个目的是提供与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌用于制备治疗特应性皮炎的药剂的用途。本专利技术的再一个目的是提供一种预防或治疗特应性疾病的方法，其特征在于对需要预防或治疗特应性疾病的个体给予有效剂量的与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌。本专利技术的再一个目的是提供一种用于预防和改善特应性皮炎的食品组合物，该组合物包含与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌作为有效成分。本专利技术的再一个目的是提供与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌用于制造预防和改善特应性皮炎的食品的用途。本专利技术的再一个目的是提供一种预防或改善特应性疾病的方法，其特征在于使需要预防或改善特应性疾病的个体摄入有效剂量的与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌作为有效成分的食品。解决问题的方法为了实现本专利技术的目的，提供一种与多糖聚合物粘合制缀合的鼠李糖乳杆菌的制备方法，其包含：(a)将通过培养鼠李糖乳杆菌而制备的发酵培养液分离成细菌和发酵滤液的步骤；(b)将步骤(a)中的发酵滤液和多糖聚合物进行混合而制备多糖聚合物粘合剂的步骤；(c)将步骤(a)中的细菌热灭活的步骤；以及(d)将步骤(c)中的热灭活细菌与步骤(b)中制备的粘合剂缀合的步骤。为了实现本专利技术的另一个目的，提供一种通过所述方法制备的与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌。为了实现本专利技术的再一个目的，提供一种用于预防和治疗特应性皮炎的药物组合物，该组合物包含与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌作为有效成分。为了实现本专利技术的再一个目的，提供与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌用于制备治疗特应性皮炎的药剂的用途。为了实现本专利技术的再一个目的，提供一种治疗或预防特应性疾病的方法，其特征在于对需要治疗或预防特应性疾病的个体给予有效剂量的与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌。为了实现本专利技术的再一个目的，提供一种用于预防或改善特应性皮炎的食品组合物，该组合物包含与多糖聚合物粘合制缀合的鼠李糖乳杆菌作为有效成分。为了实现本专利技术的再一个目的，提供与多糖聚合物粘合剂缀合的鼠李糖乳杆菌用于制造改善特应性皮炎的食品的的用途。为了实现本专利技术的再一个目的，提供一种预防或改善特应性疾病的方法，其特征在于使需要预防或改善特应性本文档来自技高网...

【技术保护点】
(a)将通过培养鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)而制备的发酵培养液分离成细菌和发酵滤液的步骤；(b)将步骤(a)中的发酵滤液与多糖聚合物混合而制备多糖聚合物粘合剂的步骤；(c)将步骤(a)中的细菌热灭活的步骤；以及(d)将步骤(c)中的热灭活细菌与步骤(b)中制备的粘合剂缀合的步骤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.07 KR 10-2014-00542371.(a)将通过培养鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)而制备的发酵培养液分离成细菌和发酵滤液的步骤；(b)将步骤(a)中的发酵滤液与多糖聚合物混合而制备多糖聚合物粘合剂的步骤；(c)将步骤(a)中的细菌热灭活的步骤；以及(d)将步骤(c)中的热灭活细菌与步骤(b)中制备的粘合剂缀合的步骤。2.根据权利要求1所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，其特征在于：所述鼠李糖乳杆菌为鼠李糖乳杆菌RHT-3201(LactobacillusrhamnosusKCTC10833BP)。3.根据权利要求1所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，其特征在于：所述步骤(b)中的多糖聚合物选自透明质酸、藻酸盐、麦芽糊精和壳聚糖中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，其特征在于：所述步骤(b)中的多糖聚合物为透明质酸。5.根据权利要求4所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，其特征在于：所述透明质酸以0.0001％(w/v)至1％(w/v)的比率与发酵滤液混合。6.根据权利要求1所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭活鼠李糖乳杆菌的制备方法，其特征在于：所述步骤(c)的热灭活在60℃至100℃的温度范围内实施。7.根据权利要求1所述的与多糖聚合物粘合剂缀合的热灭...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昇勳，姜大中，康在勳，
申请(专利权)人：日东制药株式会社，
类型：发明
国别省市：韩国;KR